Transcrição e Tradução Profa. Dra. Juliana Garcia de Oliveira Disciplina: Biologia Celular e Molecular Turmas: Biologia, enfermagem, nutrição e TO. Tópicos abordados na aula Dogma Molecular; Central da Biologia Características Gerais Transcrição: do DNA ao RNA; Tipos de RNAs; Etapas da Transcrição; Tradução da Dogma Central da Biologia Celular Transcrição Visão Geral Assim, o RNA é transcrito a partir de uma sequência de DNA (gene). •Transcrição estado fisiológico da célula extremamente variável, para atender às suas necessidades. Transcrição Visão Geral Fita DNA Molde (3’ 5’) RNA Complementar a Fita Molde de DNA Semelhante a fita de DNA não-molde A=U •Antiparalelismo •Síntese 5’ 3’ Transcrição Estrutura do RNA -Fita simples - Ribose - Uracila no lugar da Timina Transcrição Estrutura do RNA Por serem fita simples podem dobrar-se de diversas formas: Transcrição Catalisam a transcrição; reação Não necessita (primer); de de iniciador Funções: -reconhecem sequências específicas de DNA e se ligam a elas; -desnaturam DNA expõem a sequência de nucleotídeos a ser copiada; -mantém estável a dupla fita aberta; -mantém estável fita híbrida DNA:RNA; -terminam síntese RNA polimerase- RNApol Transcrição RNA polimerase- RNApol 1000 transcritos sendo sintetizados em menos de 1 hora a partir do mesmo gene. Menos cuidado que a DNApol. Transcrição RNA polimerase- RNApol Tipo Localização Sintetiza RNA pol I Nucléolo RNA Ribossômico (rRNA) RNA pol II Nucleoplasma RNA mensageiro (mRNA) RNA pol III Nucleoplasma RNA transportador (tRNA) Tipos dos RNAs Trancrição RNA-Classes principais RNA mensageiro (RNAm): Carrega a informação copiada do DNA sob a forma de trincas (códons), cada um especificando um aminoácido. RNA transportador (RNAt): Decifra o código representado pelo mRNA, carregando os anticódons. RNA ribossômico (RNAr): Associa-se com uma série de proteínas para formar os ribossomos. Transcrição RNA Ribossômico S= coeficiente de sedimentação, Svedberg Transcrição RNA Ribossômico Saem do nucléolo duas subunidades e são montadas no citoplasma Transcrição RNA Transportador Tamanho: 80 nucleotídeos; Ligações de H mantêm a molécula dobrada em forma de trevo; Regiões: -Anticódon: conjunto de 3 nucleotídeos consecutivos que pareiam com o códon complementar no RNAm; -Braço aceptor: extremidade 3‘ fita simples ligada ao aminoácido correspondente. Transcrição RNA Mensageiro Cópia do gene do DNA Etapas da Transcrição Transcrição Etapas Início Alongamento Término Início Ligação do complexo de iniciação e da RNApolimerase à região promotora. Transcrição Etapas - Início 3’ 5’ AATAAA TTATTT GTACGCTGTAACG CATGCGACATTGC 5’ ATATTTT TATAAAA Fita não-molde Fita molde 3’ •Sequências PROMOTORAS início da síntese • elementos promotores: sequências de 100 a 200 nucleotídeos próximos ao sítio de início da transcrição (-25) que possuem sequências consenso TATAAAA denominadas “TATA box”. • TF = fator de transcrição Transcrição Etapas - Início 3’ RNA polimerase AATAAA TTATTT GTACGCTGTAACG CATGCGACATTGC 5’ 5’ ATATTTT TATAAAA Fita não-molde Fita molde 3’ Complexos de transcrição + RNA polimerases (I, II e III) + Fatores específicos de cada enzima Início da transcrição Alongamento Adição de nucleotídeos à cadeia polipeptídica, complementando a fita molde de DNA. Transcrição Etapas - Alongamento 3’ 5’ ACGCTGTA RNA polimerase AATAAA TTATTT 5’ ATATTTT TATAAAA TGCGACAT Fita não-molde Fita molde 3’ Bolha de transcrição RNA polimerase se desloca sobre a fita molde (3´5´) adicionando nucleotídeos, por complementariedade, formando uma molécula de RNA (5´ 3´) Transcrição Etapas - Alongamento 3’ 5’ ACGCTGTA AATAAA TTATTT RNA polimerase 5’ ATATTTT TATAAAA TGCGACAT 3’ Fita não-molde Fita molde Transcrição Etapas - Alongamento 3’ 5’ ACGCTGTA AATAAA TTATTT UA TGCGACAT 5’ ATATTTT TATAAAA 3’ Fita não-molde Fita molde Transcrição Etapas - Alongamento 3’ 5’ ACGCTGTA AATAAA TTATTT CUGUA TGCGACAT 5’ ATATTTT TATAAAA 3’ Fita não-molde Fita molde Transcrição Etapas - Alongamento 3’ 5’ ACGCTGTA AATAAA TTATTT ACGCUGUA TGCGACAT 5’ ATATTTT TATAAAA 3’ Fita não-molde Fita molde Transcrição Etapas - Alongamento 3’ 5’ ACGCTGTA AATAAA TTATTT ACGCUGUA TGCGACAT 5’ ATATTTT TATAAAA 3’ Fita não-molde Fita molde Transcrição Etapas - Alongamento 3’ 5’ ACGCTGTA AATAAA TTATTT ACGCUGUA TGCGACAT 5’ ATATTTT TATAAAA 3’ Fita não-molde Fita molde Transcrição Etapas - Alongamento 3’ 5’ ACGCTGTA AATAAA TTATTT ACGCUGUA TGCGACAT 5’ ATATTTT TATAAAA Fita não-molde Fita molde 3’ RNA polimerase continua se deslocando sobre a fita molde (3´5´) adicionando nucleotídeos, por complementariedade, até total transcrição, formando uma molécula de RNA (5´ 3´) Transcrição Etapas - Alongamento 5’ 3’ 5’ ACGCTGTA AATAAA TTATTT 3’ TGCGACAT 5’ ATATTTT TATAAAA Fita não-molde Fita molde 3’ Molécula de RNA precursor Transcrição Etapas - Alongamento 5’ 3’ 5’ AATAAA TTATTT 5’ GTACGCTGTAACG 3’CATGCGACATTGC ATATTTT TATAAAA Fita não-molde Fita molde 3’ Molécula de RNA precursor Transcrição Etapas - Alongamento 7 MG 5’ 3’ 5’ AATAAA TTATTT 5’ GTACGCTGTAACG 3’CATGCGACATTGC ATATTTT TATAAAA Fita não-molde Fita molde 3’ Molécula de RNA precursor 7-metil-guanosina (7MG) Início da tradução Protege contra nucleases Transcrição Etapas - Alongamento 7 MG 5’ 3’ 5’ AATAAA TTATTT 5’ GTACGCTGTAACG 3’CATGCGACATTGC ATATTTT TATAAAA Fita não-molde Fita molde 3’ Molécula de RNA precursor Transcrição Etapas - Alongamento 7 MG 5’ 3’ AATAAA 5’ AAUAAA TTATTT 5’ GTACGCTGTAACG 3’CATGCGACATTGC Fita não-molde ATATTTT TATAAAAFita molde 3’ Molécula de RNA precursor Transcrição Etapas - Alongamento 7 MG 5’ 3’ AATAAA 5’ AAUAAA TTATTT 5’ GTACGCTGTAACG 3’CATGCGACATTGC Fita não-molde ATATTTT TATAAAAFita molde 3’ Molécula de RNA precursor Reconhecimento da sequência AAUAAA Término Reconhecimento da sequência de término; Complexo de iniciação é desligado do DNA; RNApol é desligada do DNA;. As fitas do DNA são totalmente renaturadas; Adição de cauda de poli-A no RNA nascente. Transcrição Etapas - Término 7 MG 5’ 3’ AATAAA AAUAAA 5’ TTATTT 5’ 3’ GTACGCTGTAACG CATGCGACATTGC Fita não-molde ATATTTT TATAAAAFita molde 3’ Molécula de RNA precursor Reconhecimento da sequência AAUAAA Clivagem Endonucleotídica poli-A endonuclease/polimerase Transcrição Etapas - Término 7 MG 5’ 3’ 3’ 5’ AAUAAA 5’ AATAAA TTATTT GTACGCTGTAACG CATGCGACATTGC ATATTTT TATAAAA 3’ Complexo de iniciação e RNA pol são desligados do DNA; As fitas do DNA são totalmente renaturadas. Fita não-molde Fita molde Transcrição Etapas - Término 7 MG 5’ AAUAAA Molécula de RNA precursor (íntrons + éxons) 3’ Adição da cauda de poli-A (poli-A polimerase) Estabilidade Transporte do núcleo para Citoplasma Transcrição Processamento do RNA Transcrito primário Processamento Splicing RNAm Transcrição Importante • Ausência de RNA polimerase proteína VIDA • A inibição da RNA polimerase Transcrição Importante • Antibióticos e Toxinas têm como alvo a RNA Polimerase: – Toxina do cogumelo Amanita phalloides ou “chapéu da morte” altamente tóxico. • Inibe a RNA polimerase II inibindo a síntese de mRNA. – Ação do antibiótico Rifampicina • Tratamento de Tuberculose e Hanseníase (Inibição da RNA pol destas bactérias Mycobacterium). Questões para discussão 1. Quais os 3 principais tipos de RNA, explique a função de cada um na síntese proteica. 2. Resolver o Quiz do dia seguindo a orientação do professor Tradução: Citoplasma, RER • mRNA Proteína •Cada aminoácido é codificado na sequência de DNA, de três nucleotídeos códon (mRNA) •RNA transportador (tRNA) transfere a informação (anticódon) sequência de aminoácidos proteínas. http://pos-darwinista.blogspot.com.br/2011/11/shapiro-revisita-o-dogma-central-no.html Tradução: Citoplasma, RER Código Genético: É a relação entre a sequência de bases no DNA e a sequência correspondente de aminoácidos, na proteína. O código genético encontra-se na forma de trincas – os códons Tradução: Citoplasma, RER CÓDIGO GENÉTICO Tradução: Citoplasma, RER Ribossomos + Retículo Endoplasmático ↓ Retículo Endoplasmático Rugoso ↓ Síntese Proteíca Modificado de: http://www.coladaweb.com/biologia/genetica/o-rna, http://www.virtual.epm.br/cursos/biomol/transcri/html/rrna.htm JUNQUEIRA, L. C.; CARNEIRO, J. Biologia celular e molecular. 9. ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2012, pag. 210 Tradução: Citoplasma, RER Códon: Anticódon: C G A C U G G A U C G C Aminoácido: Ala Asp Leu Ala Síntese Protéica (INICIAÇÃO) Subunidade maior P Sítio A Sítio mRNA A U G Subunidade menor C U A C U U C G Síntese Protéica (INICIAÇÃO) aa2 aa1 2-tRNA 1-tRNA anticódon Ligações de Hidrogênio U A C A U G códon G A U C U A C U U C G A mRNA Síntese Protéica (ALONGAMENTO) Ligação peptídica aa1 1-tRNA anticódon Ligações de Hidrogênio U A C A U G códon aa2 2-tRNA G A U C U A C U U C G A mRNA aa1 Ligação peptídica aa3 aa2 1-tRNA 3-tRNA U A C (vai para sítio E) 2-tRNA A U G G A A G A U C U A C U U C G A mRNA Ribossomos movem-se sobre um códon Ligações peptídicas aa1 aa4 aa2 aa3 4-tRNA 2-tRNA A U G G A U C U A 3-tRNA G C U G A A C U U C G A A C U mRNA Ligações peptídicas aa1 aa5 aa2 aa3 aa4 5-tRNA U G A 3-tRNA G C U 4-tRNA G A A G C U A C U U C G A A C U mRNA Ligações peptídicas aa1 aa5 aa2 aa3 aa4 5-tRNA U G A 3-tRNA G A G C A U 4-tRNA A C U G C U U C G A A C U mRNA Ribossomos movem-se sobre um códon aa4 aa3 TÉRMINO aa5 aa199 Estrutura primária de uma proteína aa200 aa2 aa1 Códon de parada 200-tRNA A C mRNA U C A U G U U U A G Biologia Molecular http://web.uconn.edu/mcb201/cellgeneexpress.jpg http://iecdpgolhosdafe.webnode.com.br/forum/