FAAz Fragment Assembly Analyzer Erico Teixeira e Francisco do Nascimento Maio, 2003 Seqüenciamento • Leitura do DNA de um organismo • Atividade realizada nos laboratórios biológicos • Restrições das máquinas: – Não suportam leitura longa (em média 600 bases) – Fragmentos aleatórios A difícil arte de montar CTTGCAAGAC TTCTCA TCACCTTGC CCAGACA ACAGCTGTTC ACAGACCC TCTTGCG TGCGCAACC TTCTCA TCACCTTGC CTTGCAAGAC ACAGACCC CCAGACA ACAGCTGTTC TCTTGCG TGCGCAACC TTCTCACCTTGCAAGACAGACCCAGACAGCTGTTCTTGCGCAACC Repetições – uma armadilha TTCTCACCTTGCAATTGCAATTGCAATTGCAATTGCAACGCAACC TTCTCACCTT CCTTGCAATT CTTGCAATTG ATTGCAATTGC ATTGCAACGC CAACGCAACC TTCTCACCTTGCAATTGCAATTGCAACGCAACC TTCTCACCTTGCAATTGCAATTGCAATTGCAATTGCAACGCAACC Montadores • Vocabulário necessário – Fragmento = pequenas seqüências bases para serem alinhadas – Qualidade = cada base tem associado um inteiro correspondendo a confiabilidade – Contig = conjunto de fragmentos que têm trechos similares, de modo que possam ser alinhados – Consenso = a superseqüência gerada pelos elementos do contig • Montadores de estudo – PHRAP – Phragment Assembly Program – CAP3 – Contig Assembly Program Procedimento comum de um montador – Alinhar dois fragmentos quaisquer – Se a similaridade entre eles for boa, eles fazem parte de um mesmo contig e será gerado um consenso deste contig – Se não, formarão dois contigs diferentes – Alinhar um novo fragmento com os consensos de cada contig e com o que tiver maior similaridade, ele será agrupado – E assim por diante Um montador MONTADOR FAAz – Fragment Assembly Analyzer • Objetivos – Auxiliar na detecção de possíveis erros de montagens – Fornecer indicativos de erro através de uma interface amigável – Comparar diferentes montadores de fragmentos Procedimentos do FAAz • Comparar os consensos gerados por cada montador (PHRAP e CAP3) PHRAP Contig X CAP3 Contig Y Procedimentos do FAAz • Após a identificação das regiões fazer uma análise quantitativa delas – Fragmentos que as compõem – Número de fragmentos por posição – Tamanho – Localização no consenso – Média de cobertura e as sub-regiões que estão acima desta média Saídas • Regiões similares encontradas nos contigs gerados por cada montador Overlaps Saídas • Representação gráfica das sobreposições das regiões Seleção Zoom FAAz Fragment Assembly Analyzer Erico Teixeira e Francisco do Nascimento Maio, 2003