Materiais do Teste de Água de Baixo Custo
MIT Design que Faz Diferença
Primavera 2006
Membros do Time do Teste de Água de Baixo Custo
Para encaixar
a seringa
To attach to syringe
Tampa da garrafinha,
Baby
bottlefechar
cap, screw
gire
para
on to create seal
Wire
mesh &e
Malha de
arame
rubber washer
arruela de borracha
AjusteScrew
em rosca
fit
Saco para armazenar água
Disposable Drop-ins to
do gotejamento
hold water
Rodelas
de proteção
Metal Washer
biológica
Garrafinha
para
prender o
Baby bottle insert
holder
saco de água
Filtro
Filter paper
Desenho Esquemático do Suporte do Filtro do Teste de Água de Baixo Custo
1
Garrafinha/Suporte
Metal lavável
Recipiente descartável
Arame
Filtro
Tampa Furada
Tubo emborrachado e seringa
Arruela de Borracha
Tampa com rosca
Passos para a filtração via membrana usando o Teste de Água de Baixo Custo
Preparação:
1.
Coloque um pouco de álcool (isopropílico) dentro de um pires fundo o suficiente
para submergir as partes laváveis e o arame. (Caso o teste demore, será necessário
colocar mais álcool para repor o que for evaporando. Adicione mais álcool toda vez que
a chama não estiver cobrindo todo o material sendo higienizado)
2.
Mantenha uma vela acesa para por fogo nas coisas que precisarem esterilizadas
freqüentemente. (Nota: quando colocar objetos na chama, segure acima da parte visível
do fogo. Isso prevenirá acúmulo de fuligem. Caso acumule fuligem, você poderá limpála com um papel toalha)
3.
Se possível, utilize um suporte para deixar a garrafinha de cabeça para baixo.
4.
Prenda uma ponta da borracha vulcanizada no registrinho, que por sua vez estará
conectado à seringa. Prenda a outra ponta do tubo de borracha na tampa de rosca, e
atarraxe a tampinha furada.
5.
Limpe a tampa furada, a tampa em rosca, a beira superior e a rosca da garrafa
com álcool para esterilizá-los antes do início do uso.
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6.
Prepare a placa de Petri (isso pode ser feito por passos):
• Usando uma caneta fina tipo marcador, marque os fundo das placas de Petri (o
lado que ajusta dentro da outra metade da placa de Petri) com as iniciais do
seu nome, data, identificação da amostra, volume de água testada, e qualquer
outra informação necessária para distinguir um teste do outro.
• Abra o prato com as mãos esterilizadas. Coloque 2-ml de alimento para
bactérias sobre o bloco de absorvente que se localiza dentro do prato. Evite
colocar as últimas gotinhas de alimento para bactérias, pois fará bolhas. Não
deixe de cobrir o bloco inteiro com a alimento para bactérias. Caso haja uma
quantia grande de alimento para bactérias na parte inferior do prato,
cuidadosamente tire o excesso, garantindo uma quantidade suficiente na parte
inferior. Feche o prato.
Testando:
1.
Esterilize as mãos.
2.
Remova um recipiente descartável da caixa. Preste atenção para não tocar nem
dentro nem na beira superior do recipiente. Coloque o recipiente na garrafinha.
3.
Despeje pelo menos 75 ml da amostra da água (ou uma diluição) no recipiente
descartável.
4.
Com pinça, submirja a arruela de metal em álcool e a coloque sobre uma chama
até que o álcool pegue fogo. Espere até o álcool parar de queimar na arruela (pode ser
que algum líquido tenha sobrado na arruela, uma vez que o próprio álcool às vezes é
diluído em água),
5.
Usando pinças, coloque o anel de metal em cima do recipiente descartável que irá
receber a água
6.
Esterilize as mãos (certifique-se de fazê-lo pelo menos uma vez a cada teste,
preferencialmente antes de abrir a embalagem filtro)
7.
Abra o embalagem do filtro, descobrindo pelo menos metade do filtro, dobrandoo sobre si mesmo, usando a própria embalagem para segurar o filtro. Não toque nem no
filtro, nem na parte interna da embalagem ou em qualquer outro dispositivo de
proteção do filtro
3
8.
Esterilize as pontas das pinças, como no passo número 4
9.
Usando as pinças, retire o filtro de dentro da embalagem, e coloque-o com o lado
quadriculado voltado para baixo em cima do anél de metal. Certifique-se de que o filtro
esteja centralizado o melhor possível.
10.
Esterilize a malha de metal imergindo-a em álcool e inserindo-a na chama
11. Coloque a malha encima do filtro de papel. Centre a malha o melhor possível
(use duas pinças estéreis). Quanto melhor a malha estiver centrada, melhor a tampa
poderá ser lacrada.
12.
13.
Esterilize a arruela de borracha imergindo-a em álcool e inserindo-a na chama.
Centralize a arruela de borracha em cima da malha.
4
14. Coloque a tampa furada e a tampa com rosca em cima da arruela de borracha e
parafuse apertado para selar tudo.
15. Inverta a garrafinha e, se possível, prenda-a de cabeça para baixo.
16. Retire a água do recipiente descartável puxando a seringa até que toda água tenha
saído (até que nenhuma água possa ser vista em cima do filtro de papel.) Tente
evitar com que o recipiente descartável se desmorone sobre o papel do filtro.
17. Se muito ar passar quando puxar a água com a seringa, vire a garrafinha de
cabeça para cima de novo e, cuidadosamente, desatarraxe e atarraxe a tampa mais
uma vez. Se isso não funcionar, desatarraxe a tampa e tente centrar novamente os
quatro elementos no todo da garrafinha com 2 pinças estéreis. Tente perder o
mínimo de água possível durante estes ajustes. Caso esses passos não resolvam o
problema, tente cortar a malha de metal para que ela fique menor. Faça isso com
uma tesoura afiada e assegure de que as bordas fiquem bem feitinhas, o que
impediria o fechamento da rosca.
18. Quando toda água passar através do papel do filtro, coloque a garrafinha de pé,
desenrosque a tampa, e cuidadosamente remova a tampa furada, assegurando que
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tanto o filtro de papel, quanto a malha (que estarão juntas) permaneçam no topo
da garrafinha e não caiam.
19. Abra uma placa de Petri para que o filtro de papel seja colocado dentro dela.
20. Com pinças esterilizadas, remova o filtro (talvez você precise utilizar uma pinça
para segurar a malha, e outra para remover o filtro). Insira (cuidadosamente no
centro) o filtro com a face que filtrou para cima e faça movimentos em círculos
(para evitar o acumulo de bolhas abaixo do papel). Assegure que o papel esteja
completamente ajustado. Caso uma extremidade do papel esteja acima da borda
da placa de Petri, ajuste-a com as pinças esterilizadas. Procure tocar apenas na
extremidade do filtro. Feche a placa de Petri.
21. Repita os passos 1-20 para cada amostra. (nunca reuse o recipiente descartável a
menos que o primeiro teste seja um teste em branco).
22. Durante o processo de preparação das amostras, procure a cada pelo menos 20
minutos colocar as placas de Petri que já estiverem prontas umas em cima das
outras formando uma pilha. Certifique-se de que as placas estejam bem lacradas
e de que todas a placas de uma mesma pilha estejam na mesma direção. Passe
uma fita para prender as todas as placas juntas e coloque a pilha de cabeça para
baixo (com a parte escrita para cima) na incubadora já preparada (deste modo,
quando condensarem, as gotas cairão sem afetarem as colônias de bactérias).
23. Remova as placas de Petri da incubadora depois do tempo especificado (24 horas
se usado o alimento mColiBlue-24) e conte o número de colônias.
24. Para descartar as amostras já utilizadas, abra as amostras e adicione uma solução
de 10% de cloro (pode-se diluir água sanitária) dentro das placas, reponha a
tampa, e coloque as placas no recipiente de descarte.
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