Instrução de Uso – Esperma Contagem Celular A Contagem Espermática é realizada no esperma humano líquido estabilizado com conservante. O resultado deve ser reportado em milhões/mL. Seguem instruções relacionadas às câmaras de Makler e Neubauer. Contagem (Câmara de Makler) A câmara de Makler possui uma profundidade de 0.01 mm e 2 uma marcação graduada de 100 quadrados (área total de 1 mm 3 e volume de 0,01 mm = 0,01 µL) . Assim, o volume compreendido na área de 10 quadrados após a colocação da 3 lamínula é de 0.001 mm ou 0,001 µL . 1. Devem ser contados apenas os espermatozóides intactos, ou seja, aqueles que possuem cabeça e cauda. 2. A contagem será realizada nos 10 quadrados, o que corresponde a um volume de 0,001 µL. Portanto, o número de espermatozóides contados por campo do microscópio deverá ser multiplicado por um milhão (1.000.000) para que o resultado corresponda a milhões/mL: Concentração de espermatozóides (milhões/mL) = número de espermatozóides contados no campo do microscópio x 1.000.000 Observação: Os termos “concentração de espermatozóides” e “número total de espermatozóides” não são sinônimos. O número total de espermatozóides é o número total de espermatozóides ejaculados enquanto a concentração de espermatozóides é o número de espermatozóides por uma unidade de volume de sêmen. Contagem (Câmara de Neubauer) 2 A área da câmara dentro do círculo é de 1,0 mm e contém 25 quadrados grandes com 16 quadrados menores em cada um. A câmara de Neubauer possui a espessura de 0,1 mm e volume (dos 25 quadrados grandes) de 0,1 3 mm = 0,1 µL. A contagem de um quadrado grande multiplicado por 25 corresponde a 0,1µL, que ao ser multiplicado por 10.000 resulta em milhões/mL. 1. Devem ser contados apenas os espermatozóides intactos, ou seja, aqueles que possuem cabeça e cauda. 2. Critério de Seleção dos Espermatozóides a serem Contados: Segundo a Organização Mundial de Saúde, para determinar se um espermatozóide deve ou não ser contado deve ser verificada a posição de sua cabeça,uma vez que a orientação de sua cauda não possui relevância. Um quadrado grande é limitado pela linha central das três que o demarca, conforme destacado em negrito na figura 1. Um espermatozóide deverá ser contado quando: - Encontrar-se no interior do quadrado grande, Página 1/2 – Out/2012 Instrução de Uso – Esperma Contagem Celular 3. - Se a maioria de sua cabeça encontrar-se entre as duas linhas internas que o delimitam, conforme exemplificado através dos círculos brancos da figura 1. - Caso a maioria de sua cabeça esteja em uma linha central, este só deve ser contado se estiver sobre o “L” formado entre o lado esquerdo e o lado inferior do quadrado grande, conforme exemplificado através dos círculos brancos da figura 2. Um espermatozóide não deverá ser contado quando encontrar-se entre as duas linhas exteriores que delimitam o quadrado. Caso esteja sobre a linha central, para que este seja desconsiderado na contagem deve estar fora da região “L” descrita anteriormente, conforme exemplificado pelos círculos pretos das figuras 1 e 3. Figura 1 Figura 2 Figura 3 Concentração de espermatozóides (milhões/mL) = número de espermatozóides contados no campo do microscópio x 250.000 x fator diluição Obs. O fator de diluição deve ser considerado na fórmula acima apenas quando diluições forem realizadas no momento da análise do material. Referências Bibliográficas • Laboratory Manual for the Examination and processing of Human Semen World Ministry of Healthy, WHO. 5ª Edição, 2010. • PEREIRA, O. S. & JANINI J.B.M. Atlas de Morfologia Espermática , Editora Atheneu, 2001. • PIVA, S. Espermograma. Laboratório São Camilo, 2001. • GALBA E.S.MORAES. Espermocitologia – Espermograma em Critério Estrito, 2ª edição, Editora Educs , 2007. • ALBUQUERQUE, C., MENDES, M.E. Gestão da Fase Analítica do Laboratório: como assegurar a qualidade na prática. ControlLab, Vol 1., 2010. • ALBUQUERQUE, C., MENDES, M.E. Gestão da Fase Analítica do Laboratório: como assegurar a qualidade na prática. ControlLab, Vol 2., 2011. • ALBUQUERQUE, C., MENDES, M.E. Gestão da Fase Analítica do Laboratório: como assegurar a qualidade na prática. ControlLab, Vol 3., 2012. • http://www.controllab.com.br/din2/pdf/WHO_laboratory_manual_for_the_Examination_and_processing_of_human_semen_FIFTH_EDITION.pdf • http://www.control-lab.com.br/din2/pdf/WHO_reference_values_for_human_semen_characteristics.pdf Página 2/2 – Out/2012