MTBAC
Indicações:
MTBAC é um kit composto de quatro testes efetivos, simples e de fácil execução, permitindo a identificação das micobactérias do
complexo Mycobacterium tuberculosis (M.tuberculosis, M.bovis, M.bovis BCG e M.africanum) com grande margem de segurança.
Características dos componentes:
O sistema MTBAC contém no laminocultivo o meio Lowenstein Jensen (LJ) na face larga da lâmina e os meios Agar Lowenstein
Jensen com PNB e Agar Lowenstein Jensen com TCH na face dividida da lâmina. Acompanham o produto um tubo de Agar
Lowenstein Jensen e as fitas para as provas de Niacina e Nitrato.
Resistência ao ácido para-nitrobenzóico (PNB): A incorporação desta droga ao meio de LJ colabora eficientemente para
separar o complexo M.tuberculosis das outras micobactérias, pois as espécies do complexo são sensíveis ao PNB e não crescem
no meio que contém esta droga.
Resistência a hidrazida do ácido tiofeno-2-carboxílico (TCH): Importante prova adicional para a diferenciação do M.tuberculosis
das outras espécies do complexo, pois é o único dentro do complexo a apresentar resistência a esta droga. Outras micobactérias
fora do complexo também podem crescer no meio LJ que contém TCH.
Produção de Niacina (ácido nicotínico): Este teste, descrito inicialmente por Konno e posteriormente modificado por Kilburn e
Kubica em versão de tira de papel impregnada com reagentes específicos, contribui substancialmente para a identificação, uma
vez que M.tuberculosis é uma das poucas espécies deste gênero que libera esta substância em quantidade detectável no meio de
cultura.
Redução do nitrato: O teste em fita para determinação da enzima nitrato-redutase complementa as demais provas e assegura,
através de um resultado positivo, a diferenciação do M.tuberculosis das outras micobactérias do complexo.
Procedimento:
1. Direto da amostra clínica
.Descontaminar a amostra.
.Embeber um "swab" na suspensão e semear o LJ em tubo para o teste da niacina. A seguir, semear a parte larga do laminocultivo
e a superfície menor direita (a lâmina vista com a tampa para cima), que contém o PNB. Com auxílio de outro "swab", semear a
superfície esquerda, que contém o TCH.
2. Semeadura a partir de outro LJ ou meio seletivo específico:
.Preparar uma suspensão equivalente ao número 1 da escala de MacFarland a partir do primo-cultivo.
.Embeber um "swab" na suspensão e semear o LJ em tubo para o teste da niacina. A seguir, semear a parte larga do laminocultivo
e a superfície menor direita (a lâmina vista com a tampa para cima), que contém o PNB. Com auxílio de outro "swab", semear a
superfície esquerda, que contém o TCH.
.Incubar os meios semeados em estufa a 37ºC, por um período de 4 semanas.
Interpretação do resultado:
A interpretação do resultado deverá ser feita de acordo à tabela somente quando a cultura no meio largo do MTBAC indicar
crescimento acima de 15 colônias. Se o crescimento for menor a 15 colônias, a amostra deverá ser ressemeada em outro MTBAC
de acordo com o item 1 do Procedimento deste manual de instrução.
*Resistência ao PNB e/ou TCH:
Após as 4 semanas de incubação, realizar a leitura do laminocultivo. Um crescimento compatível com o controle, no meio
contendo droga, indicará teste positivo.
*Teste do nitrato:
A) Preparar uma suspensão com duas alçadas do crescimento bacteriano presente no lado controle do laminocultivo, em 0,8 mL
de água destilada estéril. Usar tubos de 90 x 120 mm, com tampa de rosca.
B) Introduzir na suspensão a fita de nitrato, mantendo a parte plástica para cima. Tampar o tubo e incubar a 37º C por 2 horas, em
posição vertical.
C) Retirar o tubo da estufa e agitá-lo suavemente 6 vezes, permitindo que a solução cubra toda a superfície da fita.
D) Uma coloração azul na extremidade da fita indicará resultado positivo.
*Teste da niacina:
A) Adicionar 1,0 mL de água destilada estéril no tubo de LJ com 4 semanas de crescimento, fazendo alguns cortes no meio com
auxílio da alça, a fim de favorecer a liberação da niacina.
B) Deixar o tubo em posição horizontal durante 10 minutos, e após este período, transferir 0,6 mL desta solução para um tubo com
tampa de rosca, de 90 x 120 mm.
C) Introduzir a fita de niacina na suspensão, com a parte plástica para cima. Agitar suavemente o tubo na vertical, mantendo-o
nesta posição durante 20 minutos.
D) Realizar a leitura, observando a mudança de coloração na suspensão: o aparecimento de coloração amarela indicará teste
positivo.
SOMENTE PARA USO DIAGNÓSTICO “IN VITRO”
PROBAC DO BRASIL Produtos Bacteriológicos Ltda.
Rua Jaguaribe, 35 – Sta.Cecília - São Paulo – SP - CEP: 01224-001
Fone: 55 11 3367-4777 - Fax: 55 11 3223-8368
CNPJ 45.597.176/0001-00 - Insc. Est. 110.485.842.111
Site: www.probacbrasil.com E-mail: [email protected]
Rev.: 01
Tabela para Interpretação:
Micobactérias
TCH
PNB
Niacina
+
+
M.tuberculosis
M. bovis
v
M. africanum
+
+
- (*)
MOTT (#)
(+): Teste positivo, (-): Teste negativo, (v): Teste variável, (#): Micobactérias não do complexo M. tuberculosis,
* M. simiae e M. chelonae podem apresentar niacina positiva.
Nitrato
+
v
v
Considerações importantes:
- Niacina: O teste da niacina deve ser realizado em tubo hermeticamente fechado, a fim de evitar a saída de cloreto de cianogênio,
que é um gás volátil e constitui um dos principais elementos da reação.
Algumas espécies de M.simiae e M.chelonae podem produzir quantidades detectáveis de niacina pelo método padrão. No entanto,
se diferenciam facilmente do M.tuberculosis por apresentarem características de tempo de crescimento (M.chelonae),
fotocromogenidade (M.simiae) e resistência ao PNB (ambas), incompatíveis com as do agente clássico da tuberculose.
Caso se tenha niacina negativa em 30 dias, e resultados dos demais testes compatíveis com M.tuberculosis (PNB -, TCH + e
nitrato +), esta cepa poderá ser considerada como tal.
-Nitrato: O teste da detecção da enzima nitrato-redutase deve ser realizado sempre com culturas em fase Log de crescimento (30
dias). Caso contrário, poderão ser observados resultados falso-negativos.
Precauções:
Após o uso, o produto deverá ser descartado conforme as recomendações vigentes para resíduos de serviços de saúde.
Apresentação:
O MTBAC é fornecido em caixas contendo: 10 laminocultivos, 10 LJ em tubo para teste de niacina e 20 "swabs".
Acompanham esta caixa: - Pote com 10 fitas impregnadas com os reagentes para o teste de detecção da niacina (Niacinabac).
- Pote com 10 fitas impregnadas com reagentes para detecção da enzima nitrato-redutase (Nitratobac).
Conservação:
Meios de Cultura: Manter em lugar fresco e seco, a temperatura ambiente entre 10ºC e 25ºC. Não refrigerar.
Fitas de niacina e nitrato: Manter em geladeira (2 a 8ºC).
Validade: 4 meses.
Referências Bibliográficas:
1.- David, H., Levi-Frebault, V., Thorel, M. : Metthodes de Laboratoire pour Mycobacteriologie Clinique. Commission des
laboratoires de Reference et d'Expertise de l'Institute Pasteur. Institute Pasteur, Paris, 1989.
2.- Kubica, G.P., 1984, Clinical Microbiology in the Mycobacteria, Part A (G.P.Kubica and L.G.Wayne, eds.) pp.133-175. Dekker,
New York.
3.- Ministério da Saúde. Programa de Controle da Tuberculose. Manual de Bacteriologia da Tuberculose. Brasilia, 1980, 82 p.
4.- Sommers, H.M., Good, R.C., 1986, Mycobacterium in: Manual of Clinical Microbiology, 4th. ed., (Lennette, E.H., Balows, A.,
Hausler Jr. W.J. and Shadomy, H.J. eds.), pp.216-248, American Society for Microbiology. Washington D.C.
5.- Vestal, A.L., 1975, Procedures for the isolation and identification of Mycobacteria. D.H.E.W.N. (CDC) 75-8230. Center for
Disease Control. Atlanta, Georgia.
6. Murray, P.R. et al. – Manual of Clinical Microbiology, 8th ed., ASM Press, Washington, DC, 2003.
7. Koneman, E. W.; Allen, S. D. et al : Color Atlas and Textbook of Diagnostic Microbiology, 6th Edition. J. B. Linpcott
Company, Philadelphia, 2006.
SOMENTE PARA USO DIAGNÓSTICO “IN VITRO”
PROBAC DO BRASIL Produtos Bacteriológicos Ltda.
Rua Jaguaribe, 35 – Sta.Cecília - São Paulo – SP - CEP: 01224-001
Fone: 55 11 3367-4777 - Fax: 55 11 3223-8368
CNPJ 45.597.176/0001-00 - Insc. Est. 110.485.842.111
Site: www.probacbrasil.com E-mail: [email protected]
Rev.: 01