GRUPO:
Bartira Pizarro
Ketiuce Zukeram
Ester Dália
Luis Filipe Medeiroos
Yasmim Aurora
Rogers et. al 2006. The Global distribution of
yellow fever and dengue
  Aprox. 2,5 bilhões de pessoas vivem em regiões
infectadas.
 Incidência é de 100 milhões de novos casos a cada ano.
 Infecção que pode levar a formas fatais: DHF (dengue
hemorragic fever) e DSS (dengue shock syndrome).
 Pertence a família Flaviridae.
 Genoma: RNA fita simples de senso positivo.
 Há 4 sorotipos com estruturas gênicas idênticas. Porém, ocorre
variação na sequência genética.
 Vírus Atenuado
Humanos
Falta Atenuação/Desequilíbrio.
 Vírus Quimera (YFV/DEN)
Replicação de híbridos.
 Plasmídeo de DNA
Potência baixa
 Vetores de Adenovírus
Informação antigênica
Único vetor
Vacinas u)lizadas  
CAdVax-DenTV = consitia em mix de porções iguais de CAdVaxDen12 e CAdVaxDen-34.
Para o controle;
  CAdVax‐C1 = virus da síndrome respiratória aguda   CAdVax‐C2 = vírus da hepa)te C. ( a construção do vetor é semelhante a da CAdVax‐DenTV) Animal u)lizado Macaco Rhesus (Macaca mulatta) de ambos os sexos,
tendo de 3 a 8 anos de idade.
  No estudo utilizou-se 48 animais que foram divididos em 2
grupos, grupo A e grupo B.
 
Vacinação Consis)ram em 2 doses (nos dias 1 e 57 ) de 1x 109 unidades infecciosas. A injeção foi intramuscular através do músculo deltóide. Principais métodos utilizados
Elisa- permite a detecção de anticorpos específicos no plasma
sanguíneo . Este teste é usado no diagnóstico de várias doenças que
induzem a produção de imunoglobulinas.
 
 
Determinou os anticorpos para adenovírus
Verificou a quantidade de imunoglobulina G de vírus-específicos para dengue
PRNT- Teste de neutralização de redução de placa- Ele tem uma maior
sensibilidade do que outros testes, como hemaglutinação e muitos comerciais
de imunoensaio enzimático , sem comprometer a especificidade. A
concentração de unidades formadoras de placa pode ser estimada pelo número
de placas. Dependendo do vírus nas unidades formadoras de placa são
medidos por observação microscópica, anticorpos fluorescentes ou corantes
específicos que reagem com as células infectadas
  Título de anticorpos neutralizados
Determinaram a resposta dos anticorpos para cada sorotipo do vírus da dengue
Determinar a cinética do anticorpo antivetor que foi inicialmente extraído pela vacinação inicial e os
efeitos do subsequente reforço da dose da vacina.
Depois de 4 semanas todos os animais deselvolveram anticorpos antivetor variando de 652 a 7680 .
Quando houve declínio dos títulos no dia 57, os animais receberam o reforço da vacina.
Como uma certa porcentagem das populações humanas estão em contato com o adenovírus, muitas
vacinas baseadas nesses vetores não são tão efecientes, devido aos anticorpos pre-existentes.
TESTE
DE NEUTRALIZAÇÃO DE REDUÇÃO DE
PLACAS
 
Técnica analisa um teste de neutralização por redução de placa
(PRNT). Esse teste é o ensaio sorológico mais sensível e específico
utilizado para o diagnóstico dos vírus dengue. É usado,
principalmente, para determinar o sorotipo do vírus dengue
responsável pela infecção e para medir a imunidade após a vacinação
contra vírus em geral.
 
4 semana após a 2° vacinação( dia 85 ) todos os 23 animais vacinados
tinham anticorpos tetravalente neutralizando o vírus.
 
Observou-se um menor número de anticorpos que neutralizaram vírus
dengue 2 em relação aos outros sorotipos.
Nos animais do grupo B houve um pequeno declínio no número de
anticorpos do dia 85 para o 253, porém, na dengue 3 o declínio foi muito
acentuado.
 
 
A leve redução de 3 dos 4 anticorpos correspondentes ao sorotipo de
dengue, indica que a longevidade da resposta dos anticorpos na
neutralização viral.
• Figura:4
• Tabela 2
• Tabela 3
DISCUSSÃO
 O
grande desafio para o desenvolvimento da vacina
contra a dengue - respostas para os quatro sorotipos
  Vacinas para dengue em fase de desenvolvimento:
http://veja.abril.com.br/assets/pictures/30051/vacina-dengue-20110222-size-598.jpg?1298380056
 . Vacinas
de vírus vivo atenuado;
 . Vacinas de engenharia genética – vacinas recombinantes (Vírus mutantes
ou quiméricos) e vacinas de DNA.
 Todas
estas abordagens exigem quatro vacinas monovalentes como
componentes da formulação final da vacina tetravalente.
DISCUSSÃO - VACINAS
 
Vacinas de vírus vivo atenuado apresentaram
problemas: reatogenicidade, dominância de
sorotipo, e competição
 
Solução: utilização de vetor de adenovirus não
replicativo em células-alvo capaz de abrigar DNA
estrangeiro de grande porte, tornando possível
criar construções multivalentes recombinantes.
DISCUSSÃO - RESULTADOS
  Eles
produziram duas construções bivalentes (CAdVax-Den12 e
CAdVax-Den34).
Resultado I : Em publicação anterior
- camundongos vacinados com vacinas bivalentes - bivalentes
respostas de anticorpos neutralizantes
Resultado II: Neste estudo testaram em
macacos Rhesus – altas titulações de anticorpos neutralizantes
contra os quatro sorotipos de vírus.
DISCUSSÃO - RESPOSTA IMUNE
 
Existem limitações técnicas em estudos de vacina polivalente
para demonstrar que cada antígeno individual expresso está
provocando uma específica resposta de anticorpos.
 
Se as respostas tetravalentes de anticorpos neutralizantes são
o resultado de neutralização cruzada – há títulos de declínio
para um ou mais sorotipos em 6 meses após a vacinação.  
Os títulos de anticorpos persistiram estáveis para os quatro
sorotipos do vírus dengue por 6 meses
 
– indica que a vacina CAdVax-DenTV está provocando
anticorpos específicos para os quatro sorotipos do vírus
dengue.
  Proteção
tipo1 e 3.
contra dengue
  Diminuição
dos dias de
viremia nos tipos 2 e 4.