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Uso del aceite de citronela de Java (Cymbopogon winterianus Jowitt) (Panicoidideae)
como acaricida frente a la garrapata Boophilus microplus Canestrini (Acari:Ixodidae).
1
2
MARTINS, R.M. ; GONZÁLEZ, F.H.D.
1
Departamento de Ciências Biomédicas do Centro de Ciências Biológicas e da Saúde da Universidade de Caxias
2
do Sul, R. Francisco Getúlio Vargas, 1130, Caxias do Sul/RS, Brasil. CEP: 95070-560 Laboratório de Análises
Clínicas Veterinárias da Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Rua Bento Gonçalves, 9090, Porto Alegre/
RS, Brasil. e-mail: [email protected]
RESUMEN: En este trabajo son descritos dos experimentos in vivo de una nueva alternativa de
control de la garrapata Boophilus microplus Canestrini. Fue utilizado el aceite esencial de la
gramínea Cymbopogon winterianus Jowitt (Citronela de Java), aplicado puro en la línea dorsal del
animal (vía pour on) o utilizado por vía de aspersión del aceite diluido en alcohol en la proporción
de 1/10. Los resultados obtenidos indicaron que las dos alternativas de control fueron eficientes
en el control del ácaro, no fueron tóxicas para los bovinos y pueden tornarse un tratamiento
complementario para el control de cepas de garrapatas resistentes a los productos químicos.
Aún sin ser objetivo del trabajo, el tratamiento con Citronela de Java indicó ser repelente de la
Mosca del Cuerno de los bovinos (Haematobia irritans L.).
Palabras clave: Aceite de citronela de Java, Cymbopogon winterianus, acaricida, garrapata,
Boophilus microplus
RESUMO: Uso do óleo de citronela de Java ( Cymbopogon winterianus Jowitt )
(Panicoidideae) como acaricida frente ao carrapato (Boophilus microplus Canestrini)
(Ixodidae). Neste trabalho são descritos dois experimentos “in vivo” de uma nova alternativa de
controle do carrapato Boophilus microplus Canestrini. Foi utilizado o óleo essencial da gramínea
Cymbopogon winterianus Jowitt (Citronela de Java), aplicado puro na linha dorsal do animal (via
pour on) e por via de aspersão do óleo diluído em álcool na proporção de 1/10. Os resultados
indicaram que estas duas alternativas de controle foram eficientes no controle do ácaro, não
foram tóxicas para os bovinos e podem se tornar em tratamento complementar para o controle de
cepas de carrapatos resistentes a produtos químicos. Mesmo não sendo objeto do trabalho, o
tratamento com citronela de Java indicou ser repelente da Mosca do Chifre dos bovinos
(Haematobia irritans L.).
Palavras-chave: Óleo de citronela de Java, Cymbopogon winterianus, acaricida, carrapato,
Boophilus microplus
INTRODUCCIÓN
Los acaricidas comerciales empleados para
controlar las infestaciones de Boophilus microplus
Canestrini (Acari:Ixodidae), además de no resolver
definitivamente el problema, son también tóxicos para
los bovinos y para el propio ser humano. Las pérdidas
pueden ser momentáneamente disminuidas por el
empleo de estos acaricidas químicos, pero la
resistencia del B. microplus ha sido una constante a
lo largo de los años (Nolan & Schnitzerling, 1986;
Kunz & Kemp, 1994; Benevides et al., 1999; Martins
& Furlong, 2001). La resistencia ocurre por que
genotipos resistentes son seleccionados por el uso
inadecuado de los acaricidas. Estas características
transmitidas a la descendencia, generan cepas
resistentes a los acaricidas (Whitten et al., 1982).
Por otro lado, Clark & Sanches (1983) relataron la
intoxicación de animales sometidos a consecutivos
baños de acaricidas químicos, que sumados al estrés
Recebido para publicação em 10/01/2006
Aceito para publicação em 03/03/2007
Rev. Bras. Pl. Med., Botucatu, v.9, n.4, p.1-8, 2007.
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físico del tratamiento, predisponen los bovinos a otras
enfermedades.
Un control alternativo de esta garrapata fue
buscada por algunos investigadores que defienden el
control biológico por hongos (Bittencourt et al.,1989)
y bacterias (Brum et al., 1991) y también la utilización
de inmunizaciones (Kemp et al., 1986), creación de
razas resistentes de bovinos (Penna, 1990), uso de
formas híbridas estériles de garrapatas (Losburn &
Knipling, 1982) y cultivo de pastos repelentes a las
garrapatas (Sutherst & Wilson, 1986). En la
bibliografía existen también algunas citaciones sobre
el uso de extractos vegetales para control de las
garrapatas. Encontramos citaciones sobre este tema,
en trabajos de Porter et al. (1995), Johnson et al.
(1997), Chungsamarnyart & Jansawan (1996),
Williams & Mansingh (1996), Sivaramakrishnan et al.
(1996), Vatsya & Singh (1997), y Williams et al.
(1997).
Los extractos de la gramínea citronela de Java
(Cymbopogon winterianus Jowitt) (Andropogoneae:
Panicoideae) han sido descritos en la literatura como
controladores de hongos (Dikshit & Husain, 1984),
nemátodos (Sangwain et al., 1985) e insectos
coleópteros y lepidópteros (Srivastava et al., 1988;
Singh & Chaudhary 1988; Roychoudhury et al., 1989;
Marimuthu et al.,1997). Más recientemente, Alves et al.
(2000) cita que la “Mosca del Cuerno” (Haematobia
irritans Linnaeus), fue controlada por el uso de
extractos de la Citronela de Java. Sin embargo, no
fueron encontradas citas sobre el uso de extractos
de esta planta en el control del B. microplus. La
Citronela de Java es oriunda de Sri Lanka (antiguo
Ceilán) y fue obtenida a partir de la selección de una
variedad inferior en producción de aceite, el
Cymbopogon nardus Rendle (Virmani et al., 1979).
La utilización de aceites esenciales para
diversos fines terapéuticos no es una práctica reciente
(Ahmad et al., 1993). Para el tratamiento de parásitos
de los animales, Banerjee (1997) presenta varias
alternativas del uso de fitoterápicos. Para validar
acaricidas químicos, además de las pruebas in vitro
descritas por Drummond et al. (1973), se utilizan
pruebas de establo, según protocolo originalmente
descrito por Roulston et al. (1968). Sin embargo, estos
testes son muy caros y necesitan de animales sin
previo contacto con la garrapata, lo que es muy raro
de encontrar.
El objetivo de este trabajo fue probar, bajo
condiciones de campo, un producto natural y no
contaminante del medio ambiente para controlar la
infestación de la garrapata B. microplus. Fue también
objetivo del trabajo, saber si este tratamiento sería
tóxico para los bovinos. Finalmente, esta investigación
buscó una alternativa de escape para el fenómeno de
resistencia de las garrapatas a los productos químicos
convenciona.
MATERIAL Y MÉTODO
Aceite de citronela de Java
El aceite de citronela de Java utilizado en
los experimentos fue producido en los laboratorios
de la División de Aceites Esenciales del Instituto de
Biotecnología de la Universidad de Caxias do Sul,
RS, Brasil. Las plantas para la extracción fueron
producidas en una finca del municipio de Santo
Antonio da Patrulha/RS, Brasil. El método de
extracción del aceite utilizado fue el de arrastre de
vapor de agua con calderas automatizadas que
permiten que la presión y la temperatura del vapor
que entra en contacto con las hojas, puedan ser bien
controladas. El agua utilizada fue previamente tratada
evitando, no solamente la corrosión, sino también
permitiendo que el aceite extraído mantuviera su
pureza y características.
Las principales características del aceite de
Citronela de Java utilizado en cuanto a sus
compuestos principales fueron: Citronelal (41,15%);
Geraniol (17,90%) y Citronelol (17, 28%). La densidad
relativa es de 0,881, el índice de refracción de 1,470
y el desvío polarimétrico de cero.
Garrapatas y larvas de Boophilus microplus
(Canestrini)
Las larvas y teleoginas de B. microplus
utilizados en esta investigación procedían de bovinos
estabulados e infestados con la cepa CPVDF,
resistentes a productos organo-fosforados (Centro de
Pesquisas Veterinaria Desidério Finamor – FEPAGRO
/RS – Brasil).
Después de la cosecha diaria por tres días,
las teleoginas fueron transportadas al laboratorio y
lavadas con una solución de hipoclorito de sodio al
2,5% para prevenir contaminaciones bacterianas y
fúngicas, siendo escogidos individuos adultos,
aparentemente saludables y del mismo tamaño. Las
teleoginas fueron encubadas a 27ºC con 70% de
humedad para el desove y eclosión de las larvas, para
posterior uso el los Experimentos.
Experimentos
Fueron utilizadas para los experimentos 60
bovinos hembras de raza mestiza europea, con 3 años
de edad y peso alrededor de 350 kg, con una
desviación estandar de 23 kg, los cuales fueron
mantenidos en el campo durante todo los
experimentos.
Fueron hechos dos experimentos con la
finalidad de observar la potencialidad acaricida del
aceite estudiado. En el día cero, 60 bovinos fueron
infestados con aproximadamente 20.000 larvas de B.
microplus en cada animal. Las larvas eran oriundas
de huevos previamente incubadas. En el día 20 los
animales fueran tratados con Citronela de Java, como
Rev. Bras. Pl. Med., Botucatu, v.9, n.4, p.1-8, 2007.
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se describe posteriormente. En los animales se
hicieron tomas de sangre en el día 14 y 28 con el
objeto de hacer pruebas bioquímicas de función
metabólica. A partir del día 22 de la infestación y en
días alternados, las garrapatas encontradas en el
cuerpo de los animales fueron contadas hasta el día
28. Este periodo fue elegido por ser, en el ciclo
biológico, el de más grande número de ácaros en el
animal. El conteo de las garrapatas fue hecho en
ácaros con aproximadamente 0,5 cm o más de largo
en la mitad del cuerpo del animal y después
multiplicado por dos para estimarse el número total
de parásitos en cada bovino. Los animales fueron
marcados, divididos en dos lotes de 30 y sueltos en
dos potreros distintos. Durante los experimentos y
hasta 30 después, los animales fueron acompañados
para la observación de alguna alteración.
Experimento I: Aleatoriamente, 15 animales
del potrero 1 fueron tratados tópicamente con 40 mL
de aceite puro de citronela de Java en la línea dorsal
de los animales (vía pour on) en el día 20 después de
la infestación. Otros 15 animales fueron tratados con
el mismo volumen de placebo (aceite de girasol) y
quedaron de control.
Experimento II: Aleatoriamente, 15 animales
del potrero 2 fueron tratados tópicamente con aceite
de citronela de Java por vía de aspersión en el día 20
después de la infestación. El tratamiento fue hecho
con 2000 mL por animal (200 mL de citronela de Java
y 1800 mL de etanol 95%) de forma que todo el cuerpo
del animal fuera mojado. Otros 15 animales quedaron
de control y recibieron el mismo volumen de
tratamiento con placebo (aceite de girasol diluido en
etanol 95% en la proporción de 1:10).
Pruebas Bioquímicas: Con los sueros
sanguíneos de los animales de los Experimentos I y
II, fueron hechas pruebas bioquímicas para detectar
alguna posible alteración hepática del animal,
provocada por el tratamiento con el aceite de Citronela
de Java. Fueron hechas pruebas para analizar
albúmina, aspartato transaminasa (AST), bilirrubina,
colesterol, gama glutamil transferasa (GGT), proteína
total y globulinas. Estos testes detectan intoxicación
hepática del animal por uso de medicamentos
(Kaneko et al.,1997. Las pruebas fueron realizadas
en espectrofotómetro semiautomático (Metrolab 1600,
Argentina) utilizando técnicas específicas de kits
diagnósticos (Labtest, Brasil).
Análisis Estadística
De los Experimentos: Los datos fueran
descritos por promedio y dosis patrón, con un
presunto de igualdad en el conteo de las garrapatas
(p>0,05). Los grupos de intervención fueron
comparados por análisis de varianza para un criterio
de clasificación (ANOVA ONE-WAY) con el teste
post-hoc de Tukey (Zar, 1996). El nivel de significancia
usado fue = 0,05. Los datos fueran procesados
con el auxilio del programa SPSS, versión 12.0.
De las Pruebas Bioquímicas: Para los
cálculos estadísticos de las pruebas bioquímicas, fue
considerado un grado mínimo de confiabilidad de 95%
en el teste T de Student, con relación a su control.
Fueron analizadas muestras de sangre de los 60
animales de los Experimentos I y II.
RESULTADO
Los resultados de la acción acaricida del
aceite de citronela de Java frente a la garrapata B.
Microplus, utilizado por vía tópica en la línea dorsal
del animal o por vía de aspersión diluido en alcohol,
se mostraran satisfactorios, cuando comparados a
sus respectivos controles (Tabla 1). Todos los
resultados fueran de p<0,001, de tal forma que los
TABLA 1. Número promedio de garrapatas por animal en los Experimentos I y II y su Desviación Estándar.
Rev. Bras. Pl. Med., Botucatu, v.9, n.4, p.1-8, 2007.
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grupos fueran distintos entre si por el teste de posthoc de Tukey. Se observó que en el día 24 hubo un
número más grande de garrapatas en los animales
tratados y controles, lo que es normal en el ciclo
biológico del ácaro, razón porque el conteo individual
de las garrapatas fue hecho entre los días 22 y 28
después de la infestación. En este periodo, ocurrió
una diferencia significativa entre el conteo total de
las garrapatas en los animales tratados en relación a
sus respectivos controles, indicando que los
tratamientos con Citronela de Java, fueron eficientes
para el control de la garrapata B. microplus.
Cuanto a las pruebas bioquímicas, los
resultados demostraron que los metabolitos de los
animales del Experimento I se encuentran dentro de
la normalidad según Kaneko et al. (1997) y que las
únicas alteraciones observadas fueron una pequeña
disminución en las concentraciones de colesterol (p
= 0,049), proteína total (p = 0,033) y globulinas (p =
0,041) de los animales tratados en comparación
a sus controles (Tabla 2). Estas alteraciones, sin
TABLA 2. Resultados promedios de metabolitos séricos de 30 bovinos del Experimento I, antes y después de los
tratamientos con citronela de Java (Experimento I).
Rev. Bras. Pl. Med., Botucatu, v.9, n.4, p.1-8, 2007.
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embargo, cuando comparadas con valores normales,
no caracterizan alteraciones, indicando que el
tratamiento tópico en la línea dorsal no fue
hepatotóxico para los animales.
En las análisis de las muestras de sangre
de los bovinos del Experimento II, los resultados
demostraran que tampoco hubo diferencias
estadísticamente significativas entre los niveles de
metabolitos de los animales tratados y los animales
controles, indicando que el tratamiento tópico por
aspersión en las dosis utilizadas, no fue hepatotóxico
para los bovinos (Tabla 3).
TABLA 3. Resultados promedios de metabolitos séricos de 30 bovinos del Experimento II, antes y después de los
tratamientos con citronela de Java (Experimento II).
Rev. Bras. Pl. Med., Botucatu, v.9, n.4, p.1-8, 2007.
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También fue observado que en los animales
tratados con el aceite de citronela de Java, no hubo
la presencia de la Mosca del Cuerno durante la
realización de los Experimentos y que por
acompañamiento clínico, ningún animal tuvo
enfermedad transmitida por las garrapatas hasta 30
días después del inicio de los tratamientos.
DISCUSIÓN
La propuesta de la presente investigación
tuvo dos objetivos. El primero fue investigar la
posibilidad del uso del aceite de citronela de Java,
como un producto natural para el control del B.
Microplus y el segundo fue buscar un tratamiento
alternativo no tóxico para los animales y eficiente para
controlar las cepas resistentes de este ácaro a
productos químicos convencionales. Los resultados
demostraran que estos objetivos fueron plenamente
alcanzados en las dos formas de tratamiento, o sea,
por vía pour on del producto puro o por vía de aspersión
del aceite diluido en alcohol en la proporción de 1/10.
Otra ventaja de este tratamiento alternativo es que
permite una infestación moderada de B. microplus
(hasta 20 garrapatas por animal), y que por lo tanto
puede conferir al animal una inmunidad natural contra
las enfermedades transmitida por esta garrapata. Los
animales tratados no enfermaron de Babesiosis o
Anaplasmosis después de los Experimentos.
Los principales compuestos del aceite de
citronela de Java (Citronelol, Citrinelal y Geraniol)
parecen tener una acción sinérgica contra la
garrapata, según experimentos in vitro anteriormente
descritos (Martins, 2006). Esta característica no
favorece la aparición de nuevas cepas resistentes por
tratarse de un conjunto de substancias con estructuras
moleculares muy complejas. Esta característica,
según Whitten et al. (1982), dificulta la selección de
genotipos resistentes. Otro factor que posiblemente
participe de este hecho es que la citronela de Java,
por ser volátil y de rápida absorción, tiene bajo poder
residual lo que no es favorable al surgimiento de cepas
resistentes ya que, según Gonzales (2002), los
productos con mayor poder residual son favorables a
la selección natural de los individuos más fuertes y
una situación de super población de garrapatas,
determina la aparición de cepas resistentes a los
acaricidas.
El uso tópico del aceite de citronela de Java,
tanto en la línea dorsal del animal (vía pour on) como
la dilución en alcohol del producto en la proporción
de 1:10, aplicada en forma de aspersión individual,
además de simples manejo, puede funcionar también
como repelente de otros insectos como la Mosca del
Cuerno, una vez que en nuestros experimentos los
animales tratados con Citronela de Java no
presentaran esta infestación durante los
experimentos. Alves et al. (2000) anteriormente
también describen esta observación. Este hecho, sin
embargo, no fue objetivo inicial de la presente
investigación, tratando-se de una observación paralela.
Los tratamientos con la citronela de Java no
presentaran toxicidad para el hígado de los animales.
Las pruebas bioquímicas no mostraron disminución
significativa de albúmina, colesterol, proteína total y
globulinas así como tampoco mostraron un aumento
significativo de AST, GGT o bilirrubina, indicadores
de problemas de intoxicación o daño hepático
(Kaneko et al.,1997).
Por otro lado, tratamientos que no erradican
las garrapatas también son importantes, ya que para
otros seres de la naturaleza, la garrapata está
presente en su dieta, como es el caso de ratones,
sapos, arañas, hormigas, insectos y diversas aves
silvestres, participando como importante fuente de
proteína. La erradicación de las garrapatas por uso
indiscriminado de acaricidas químicos, puede quebrar
este equilibrio, según Gonzales (2002).
Para que el aceite de citronela de Java pueda
ser utilizado como acaricida en nivel de campo, falta
todavía un largo camino de investigación. Deben ser
estudiadas otras variables tales como efectos
climáticos, poder residual, posibles efectos en la
gestación, presencia del producto en la carne y en la
leche, además de ser probado frente a nuevas cepas
de garrapatas resistentes a otros productos químicos.
La ventaja es que la citronela de Java, además de
poder tornarse una alternativa complementaria
interesante para ser probada, también es degradable
en la naturaleza y por lo tanto no debe contaminar el
medio ambiente (Virmani et al. 1979). La propuesta
de esta alternativa no pretende ser la solución final,
pero si un estudio nuevo que puede tornarse una forma
útil de tratamiento, especialmente en el surgimiento
de cepas resistentes de garrapatas a los productos
químicos.
Finalmente, el uso de la citronela de Java
como fue propuesto en este estudio, es un acaricida
con buenas posibilidades para ser usado en pequeñas
propiedades rurales, principalmente en fincas de
ganado lechero con un pequeño número de animales
y que no disponen de instalaciones especiales para
tratamientos de inmersión o aspersión. Esta opinión
está basada en el hecho de que los ganaderos de
leche en América del Sur, generalmente tienen este
perfil (Fonte et al., 1998) y por no tener muchos
recursos económicos, buscan soluciones sencillas
para sus problemas de sanidad animal.
CONCLUSIONE
1a) El uso del aceite de Citronela de Java
empleado en la línea dorsal del animal (vía pou ron) o
por vía de aspersión, es una alternativa natural,
eficiente e inédita para ser utilizado en el control del
ácaro B. microplus, principalmente como tratamiento
Rev. Bras. Pl. Med., Botucatu, v.9, n.4, p.1-8, 2007.
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complementario frente a cepas resistentes a productos
químicos.
2a) El tratamiento con el aceite de Citronela
de Java en las dosis utilizadas no fue hepatotóxico
para los bovinos.
AGRADECIMIENTO
Al Dr. João Ricardo de Sousa Martins por
suministrar las cepas de garrapatas, al Dr. Augusto
Cunha por suministrar los animales, al Veterinário
Claudio Chiminazzo y Sr. Juvenal Grigoleti por la
ayuda en los trabajos de campo, a la Dra Luciana
Serafini por suministrar el aceite de citronela de Java,
al Dr. Mario Wagner por la ayuda con los cálculos
estadísticos y al Dr. João Carlos Gonzales por la
ayuda con la bibliografía.
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