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Avaliação da estabilidade da enzima
glicose oxidase livre e imobilizada
na produção de ácido xilônico
Julia Aparecida C. Fagundes1, Thályta F. Pacheco2 e Dasciana S. Rodrigues2
Introdução
ĐŝĚŽdžŝůƀŶŝĐŽ͕ƵŵĚŽƐƉƌŽĚƵƚŽƐĚĞŵĂŝŽƌǀĂůŽƌĂŐƌĞŐĂĚŽƐĞŐƵŶĚŽŽĞƉĂƌƚĂŵĞŶƚŽĚĞ
ŶĞƌŐŝĂ ĚŽƐ h͕ƚĞŵĂƉůŝĐĂĕĆŽŶĂ ƉƌŽĚƵĕĆŽ ĚĞĚŝǀĞƌƐŽƐ ƋƵşŵŝĐŽƐ ŶĂƐ ĄƌĞĂƐĂůŝŵĞŶơĐŝĂ͕
ĨĂƌŵĂĐġƵƟĐĂ Ğ ŶĂ ĂŐƌŝĐƵůƚƵƌĂ ;Z'h^<^ Ğƚ Ăů͕͘ ϮϬϬϲͿ͘ ǀŝĂďŝůŝĚĂĚĞ ĚŽ ĞƚĂŶŽů
ůŝŐŶŽĐĞůƵůſƐŝĐŽĚĞƉĞŶĚĞƚĂŵďĠŵĚŽĂƉƌŽǀĞŝƚĂŵĞŶƚŽĞĮĐŝĞŶƚĞĚĂĨƌĂĕĆŽŚĞŵŝĐĞůƵůſƐŝĐĂĚĂ
ďŝŽŵĂƐƐĂ͕ ĐŽŶƐƟƚƵşĚĂ ŵĂũŽƌŝƚĂƌŝĂŵĞŶƚĞ ĚĞ džŝůŽƐĞ Ğ ĐŽƌƌĞƐƉŽŶĚĞŶƚĞ Ă ĂƚĠ ϰϬй ĚĂ ŵĂƐƐĂ
ƐĞĐĂĚŽŵĂƚĞƌŝĂů͘hŵĂĚĂƐƉŽƐƐşǀĞŝƐƵƟůŝnjĂĕƁĞƐĚĂdžŝůŽƐĞ ĠĂƉƌŽĚƵĕĆŽĚĞĄĐŝĚŽdžŝůƀŶŝĐŽ͘
ƐƚĞ ƉŽĚĞ ƐĞƌ ƉƌŽĚƵnjŝĚŽ Ă ƉĂƌƟƌ ĚĂ ŽdžŝĚĂĕĆŽ ĚĂ džŝůŽƐĞ͕ ĐĂƚĂůŝƐĂĚĂ ƉĞůĂ ĞŶnjŝŵĂ džŝůŽƐĞ
ĚĞƐŝĚƌŽŐĞŶĂƐĞ͘ƐƚĞƉƌŽĐĞƐƐŽƌĞƋƵĞƌĂƵƟůŝnjĂĕĆŽĚĞĐŽĨĂƚŽƌĞƐĐŽŵŽEн͘KĄĐŝĚŽdžŝůƀŶŝĐŽ
ƚĂŵďĠŵƉŽĚĞƐĞƌŽďƟĚŽƉĞůĂĂĕĆŽĚĂĞŶnjŝŵĂŐůŝĐŽƐĞŽdžŝĚĂƐĞŶĂĐŽŶǀĞƌƐĆŽĚĂdžŝůŽƐĞ͕ƐĞŵ
ĚĞƉĞŶĚġŶĐŝĂĚĞĐŽĨĂƚŽƌĞƐ;>/hĞƚĂů͕͘ϮϬϭϮ͖h,ZdĞƚĂů͕͘ϭϵϴϲͿ͘
ŝŵŽďŝůŝnjĂĕĆŽĚĞĞŶnjŝŵĂƐĂƉƌĞƐĞŶƚĂǀĂŶƚĂŐĞŶƐĞŵƌĞůĂĕĆŽĂŽƵƐŽĚĞƐƚĂƐƐŽůƷǀĞŝƐ͕ƚĂŝƐ
ĐŽŵŽ͗ƉŽƐƐŝďŝůŝĚĂĚĞĚĞƌĞƵƟůŝnjĂĕĆŽĞĚĞŽƉĞƌĂĕĆŽĞŵŵŽĚŽĐŽŶơŶƵŽ͕ŵĂŝŽƌĨĂĐŝůŝĚĂĚĞĚĞ
ƐĞƉĂƌĂĕĆŽĚŽƉƌŽĚƵƚŽĮŶĂů͕ŵĞůŚŽƌŝĂŶŽĚĞƐĞŵƉĞŶŚŽĐĂƚĂůşƟĐŽĞƌĞĚƵĕĆŽĚĂŝŶĂƟǀĂĕĆŽƉŽƌ
ĚŝƐƚŽƌĕĆŽĚĞƐƵĂĞƐƚƌƵƚƵƌĂŶĂƟǀĂ͘
EĞƐƚĞĐŽŶƚĞdžƚŽ͕ĞƐƚĞƚƌĂďĂůŚŽƚĞŵŽŽďũĞƟǀŽĚĞĂǀĂůŝĂƌĂĂĕĆŽĚĂĞŶnjŝŵĂŐůŝĐŽƐĞŽdžŝĚĂƐĞ
ŶĂƉƌŽĚƵĕĆŽĚĞĄĐŝĚŽdžŝůƀŶŝĐŽ͕ĞŵƉƌĞŐĂŶĚŽdžŝůŽƐĞĐŽŵŽƐƵďƐƚƌĂƚŽ͘^ĞƌĄĂǀĂůŝĂĚĂĂĂƚƵĂĕĆŽ
ĚĂĞŶnjŝŵĂůŝǀƌĞĞƐŽďƚƌġƐƚĠĐŶŝĐĂƐĚĞŝŵŽďŝůŝnjĂĕĆŽ;ĞŶƚƌĞĐƌƵnjĂŵĞŶƚŽ͕ůŝŐĂĕĆŽĐŽǀĂůĞŶƚĞĞŵ
ƌĞƐŝŶĂ ĂŐĂƌŽƐĞͲĂŵŝŶŽ ĞůŝŐĂĕĆŽ ĐŽǀĂůĞŶƚĞĞŵƋƵŝƚŽƐĂŶĂͿ͕ ǀŝƐĂŶĚŽ ƐƵĐĞƐƐŝǀĂƐ ƌĞƵƟůŝnjĂĕƁĞƐ
sem perda de estabilidade.
DĠƚŽĚŽƐ
ĐŽŶǀĞƌƐĆŽ ĚĞ džŝůŽƐĞ Ğŵ ĄĐŝĚŽ džŝůƀŶŝĐŽ ĨŽŝ ƌĞĂůŝnjĂĚĂ ƵƟůŝnjĂŶĚŽ Ă ĞŶnjŝŵĂ ĐŽŵĞƌĐŝĂů
glicose oxidase de ͘ ŶŝŐĞƌ͘ WƌŝŵĞŝƌĂŵĞŶƚĞ͕ ĨŽŝ ĨĞŝƚĂ Ă ĂǀĂůŝĂĕĆŽ ĚŽ ĐŽŵƉŽƌƚĂŵĞŶƚŽ ĚĂ
ĞŶnjŝŵĂůŝǀƌĞĞŵdžŝůŽƐĞƉƵƌĂĞĚĞƚĞƌŵŝŶĂĕĆŽĚĂĐŽŶĐĞŶƚƌĂĕĆŽĚĞĞŶnjŝŵĂĂƐĞƌĞŵƉƌĞŐĂĚĂ
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ĞŶƚƌĞĐƌƵnjĂŵĞŶƚŽ͕ĨŽŝƵƟůŝnjĂŶĚŽĄůĐŽŽůŝƐŽͲƉƌŽƉşůŝĐŽĐŽŵŽĂŐĞŶƚĞƉƌĞĐŝƉŝƚĂŶƚĞĞŐůƵƚĂƌĂůĚĞşĚŽ
ϭഩhŶŝǀĞƌƐŝĚĂĚĞĚĞƌĂƐşůŝĂʹhŶ͕/ŶƐƟƚƵƚŽĚĞYƵşŵŝĐĂ͖
ϮഩŵďƌĂƉĂŐƌŽĞŶĞƌŐŝĂ͕WƋ͕ǀ͘tϯEŽƌƚĞ;ĮŶĂůͿ͕ƌĂƐşůŝĂͬ&͕ƌĂƐŝů͕ϳϬϳϳϬͲϵϬϭ
ΎũƵůŝĂ͘ĨĂŐƵŶĚĞƐΛĐŽůĂďŽƌĂĚŽƌ͘ĞŵďƌĂƉĂ͘ďƌ͖ĚĂƐĐŝĂŶĂ͘ƌŽĚƌŝŐƵĞƐΛĞŵďƌĂƉĂ͘ďƌ
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ĐŽŵŽ ĂŐĞŶƚĞ ĚĞ ĞŶƚƌĞĐƌƵnjĂŵĞŶƚŽ͘ ƵĂƐ ƚĠĐŶŝĐĂƐ ĚĞ ŝŵŽďŝůŝnjĂĕĆŽ ƉŽƌ ůŝŐĂĕĆŽ ĐŽǀĂůĞŶƚĞ
ĨŽƌĂŵĂǀĂůŝĂĚĂƐ͘EĂƉƌŝŵĞŝƌĂĚĞůĂƐĨŽŝƵƟůŝnjĂĚĂƌĞƐŝŶĂĂŐĂƌŽƐĞͲĂŵŝŶŽĐŽŵŽƐƵƉŽƌƚĞ͘WĂƌĂ
a segunda técnica, a imobilização da enzima em quitosana, primeiramente foi realizada a
ĂƟǀĂĕĆŽĚĂƋƵŝƚŽƐĂŶĂƵƟůŝnjĂŶĚŽŽŵĠƚŽĚŽĚĞƐĐƌŝƚŽƉŽƌƵĚƌŝĞŶĞĞƚĂů͘;ϮϬϬϱͿ͘ŽŵŽĂŐĞŶƚĞ
ůŝŐĂŶƚĞĨŽŝƵƟůŝnjĂĚŽŐůƵƚĂƌĂůĚĞşĚŽ͘WĂƌĂĂƐƚƌġƐƚĠĐŶŝĐĂƐ͕ŽƐſůŝĚŽƌĞƐƵůƚĂŶƚĞĚĂŝŵŽďŝůŝnjĂĕĆŽ
ĨŽŝůĂǀĂĚŽĞĐĞŶƚƌŝĨƵŐĂĚŽĂƚĠƋƵĞŶĆŽŚŽƵǀĞƐƐĞƉĞƌĚĂĚĞƉƌŽƚĞşŶĂŶŽƐŽďƌĞŶĂĚĂŶƚĞ͘dŽĚĂƐ
ĂƐ ƐŽůƵĕƁĞƐ ĚĞ ĞŶnjŝŵĂ Ğ ƐŽďƌĞŶĂĚĂŶƚĞƐ ƟǀĞƌĂŵ ƐĞƵ ƚĞŽƌ ĚĞ ƉƌŽƚĞşŶĂ ƋƵĂŶƟĮĐĂĚŽ ƉŽƌ
ƌĂĚĨŽƌĚ ƉĂƌĂ ĚĞƚĞƌŵŝŶĂĕĆŽ ĚĂ ĞĮĐŝġŶĐŝĂ ĚĞ ŝŵŽďŝůŝnjĂĕĆŽ͘ ĐŽŶǀĞƌƐĆŽ ĚĞ džŝůŽƐĞ Ă ĄĐŝĚŽ
džŝůƀŶŝĐŽĞŵƉƌĞŐĂŶĚŽĂƐĞŶnjŝŵĂƐůŝǀƌĞĞŝŵŽďŝůŝnjĂĚĂƐĨŽŝĂǀĂůŝĂĚĂĞŵƌĞĂƚŽƌĞŶĐĂŵŝƐĂĚŽĂ
ϯϱΣ͕ĐŽŵĂŐŝƚĂĕĆŽĐŽŶƐƚĂŶƚĞ͕ĞŵƉƌĞŐĂŶĚŽƐŽůƵĕĆŽĚĞϭϬŐͬ>ĚĞdžŝůŽƐĞ͘&ŽƌĂŵĐŽůĞƚĂĚĂƐ
ĂŵŽƐƚƌĂƐƉĞƌŝŽĚŝĐĂŵĞŶƚĞƉĂƌĂĐŽŶƐƚƌƵĕĆŽĚŽƐƉĞƌĮƐĚĞĐŽŶǀĞƌƐĆŽĚĞdžŝůŽƐĞĂĄĐŝĚŽdžŝůƀŶŝĐŽ͘
K ĄĐŝĚŽ džŝůƀŶŝĐŽ ƉƌŽĚƵnjŝĚŽ ĨŽŝ ƋƵĂŶƟĮĐĂĚŽ ƉŽƌ ŵĠƚŽĚŽ ĐŽůŽƌŝŵĠƚƌŝĐŽ ĚĞƐĐƌŝƚŽ ƉŽƌ >ŝĞŶ
;ϭϵϱϵͿ͘KƐĞdžƉĞƌŝŵĞŶƚŽƐĨŽƌĂŵƌĞĂůŝnjĂĚŽƐĞŵƚƌŝƉůŝĐĂƚĂ͕ƐĞŶĚŽĂƉƌĞƐĞŶƚĂĚĂƐĂƐŵĠĚŝĂƐĚŽƐ
ǀĂůŽƌĞƐŽďƟĚŽƐ͘
ZĞƐƵůƚĂĚŽƐĞŽŶĐůƵƐƁĞƐ
EĂ ĂǀĂůŝĂĕĆŽ ĚĂ ĞŶnjŝŵĂ ůŝǀƌĞ͕ ƋƵĂŶĚŽ ƵƟůŝnjĂĚŽƐ Ϯ͕Ϭ ŵŐ ĚĂ ĞŶnjŝŵĂ ŐůŝĐŽƐĞ ŽdžŝĚĂƐĞ
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ĚĞϭϬŐͬ>͕ŚŽƵǀĞĨŽƌŵĂĕĆŽĚĞϬ͕ϴϵŐͬ>ĚĞĄĐŝĚŽdžŝůƀŶŝĐŽĞŵĚƵĂƐŚŽƌĂƐ͘YƵĂŶĚŽŽĨĞƌĞĐŝĚŽƐ
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ŚŽƵǀĞƉƌŽĚƵĕĆŽĚĞϮ͕ϬϮŐͬ>ĚĞĄĐŝĚŽdžŝůƀŶŝĐŽĞŵϮŚŽƌĂƐ͘ŽŵϲŚŽƌĂƐĚĞƌĞĂĕĆŽ͕ĨŽƌĂŵ
ĨŽƌŵĂĚŽƐϵ͕ϬϮŐͬ>ĚĞĄĐŝĚŽdžŝůƀŶŝĐŽ͕ŽƋƵĞĐŽƌƌĞƐƉŽŶĚĞĂϴϭ͕ϱϱйĚŽƌĞŶĚŝŵĞŶƚŽƚĞſƌŝĐŽĚĞ
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ĂǀĂůŝĂĕĆŽ ĚĂƐ ŝŵŽďŝůŝnjĂĕƁĞƐ͘ EĂƐ ĐŽŶĚŝĕƁĞƐ ĚĞ ŵĂŝŽƌ ĞĮĐŝġŶĐŝĂ͕ ŚŽƵǀĞ Ă ŝŵŽďŝůŝnjĂĕĆŽ ĚĞ
ϲϱ͕ϲйĚĂƉƌŽƚĞşŶĂŶĂƚĠĐŶŝĐĂĚĞĞŶƚƌĞĐƌƵnjĂŵĞŶƚŽ͕Ϯϴ͕ϰйŶĂůŝŐĂĕĆŽĐŽǀĂůĞŶƚĞĐŽŵƌĞƐŝŶĂ
ĂŐĂƌŽƐĞͲĂŵŝŶŽĞϭϲ͕ϭйŶĂůŝŐĂĕĆŽĐŽǀĂůĞŶƚĞĞŵƋƵŝƚŽƐĂŶĂ͘ƐŵĂƐƐĂƐƌĞƐƚĂŶƚĞƐĚĞƉƌŽƚĞşŶĂ
ĨŽƌĂŵƉĞƌĚŝĚĂƐŶŽƐƐŽďƌĞŶĂĚĂŶƚĞƐ͕ŽƵƐĞũĂ͕ŶĆŽƐĞŝŵŽďŝůŝnjĂƌĂŵ͘ŵϲŚŽƌĂƐĚĞƌĞĂĕĆŽ͕ĂƐ
ƚĠĐŶŝĐĂƐĚĞŝŵŽďŝůŝnjĂĕĆŽƉŽƌĞŶƚƌĞĐƌƵnjĂŵĞŶƚŽ͕ůŝŐĂĕĆŽĐŽǀĂůĞŶƚĞĞŵĂŐĂƌŽƐĞͲĂŵŝŶŽĞĞŵ
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ĐŽƌƌĞƐƉŽŶĚĞŶĚŽĂϭϰ͕ϱй͕ϭϰ͕ϭйĞϮϴ͕ϴйĚĂĐŽŶǀĞƌƐĆŽƚĞſƌŝĐĂĚĞdžŝůŽƐĞĂĄĐŝĚŽdžŝůƀŶŝĐŽ͘
Žŵ Ϯϰ ŚŽƌĂƐ ĚĞ ƌĞĂĕĆŽ͕ ŽďƚĞǀĞͲƐĞ͕ ƉĂƌĂ ĂƐ ŝŵŽďŝůŝnjĂĕƁĞƐ ƉŽƌ ĞŶƚƌĞĐƌƵnjĂŵĞŶƚŽ͕ ůŝŐĂĕĆŽ
ĐŽǀĂůĞŶƚĞ Ğŵ ĂŐĂƌŽƐĞͲĂŵŝŶŽ Ğ Ğŵ ƋƵŝƚŽƐĂŶĂ͕ ƌĞŶĚŝŵĞŶƚŽƐ ĚĞ Ϯϭ͕ϵй͕ ϮϮ͕ϳй Ğ ϳϰ͕ϵй ŶĂ
ĐŽŶǀĞƌƐĆŽ Ă ĄĐŝĚŽ džŝůƀŶŝĐŽ͕ ƌĞƐƉĞĐƟǀĂŵĞŶƚĞ͘ KƐ ƌĞƐƵůƚĂĚŽƐ ŽďƐĞƌǀĂĚŽƐ ĂƚĠ Ž ŵŽŵĞŶƚŽ
ƉĞƌŵŝƚĞŵĐŽŶĐůƵŝƌƋƵĞĂŝŵŽďŝůŝnjĂĕĆŽĞŵƋƵŝƚŽƐĂŶĂ͕ƋƵĞƚĞǀĞĂŵĞŶŽƌĂĚĞƐĆŽĚĂĞŶnjŝŵĂ
ĂŽƐƵƉŽƌƚĞ͕ƌĞƐƵůƚŽƵŶŽŵĂŝŽƌƌĞŶĚŝŵĞŶƚŽĚĞĐŽŶǀĞƌƐĆŽĚĞŶƚƌĞĂƐŝŵŽďŝůŝnjĂĕƁĞƐĂǀĂůŝĂĚĂƐ͘
WŽƐƐŝǀĞůŵĞŶƚĞ͕ ĂůĠŵ ĚĂ ƉĞƌĚĂ ĚĞ ĞŶnjŝŵĂ ŶĂƐ ůĂǀĂŐĞŶƐ ;ƉĂƌĐĞůĂ ŶĆŽ ŝŵŽďŝůŝnjĂĚĂͿ͕ ŽĐŽƌƌĞ
ƉĞƌĚĂĚĂĂƟǀŝĚĂĚĞĚĂĨƌĂĕĆŽŝŵŽďŝůŝnjĂĚĂ͕ĚĞǀŝĚŽăƐĐŽŶĚŝĕƁĞƐĚĞŝŵŽďŝůŝnjĂĕĆŽĚĞĐĂĚĂƵŵĂ
ĚĂƐƚĠĐŶŝĐĂƐ͘ƚĠŽŵŽŵĞŶƚŽ͕ĂŝŵŽďŝůŝnjĂĕĆŽƉŽƌůŝŐĂĕĆŽĐŽǀĂůĞŶƚĞĞŵƋƵŝƚŽƐĂŶĂƐĞƋƵĂůŝĮĐĂ
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ĐŽŵŽŽŵĞůŚŽƌŵĠƚŽĚŽƉĂƌĂŝŵŽďŝůŝnjĂĕĆŽĚĂĞŶnjŝŵĂŐůŝĐŽƐĞŽdžŝĚĂƐĞ͕ƉŽŝƐĐŽŶǀĞƌƚĞŵĂŝŽƌ
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ŝŵŽďŝůŝnjĂĕĆŽƉĂƌĂĐĂĚĂƵŵĂĚĂƐƚĠĐŶŝĐĂƐĚĞǀĞŵƐĞƌĂǀĂůŝĂĚĂƐ͕ĚĞŵĂŶĞŝƌĂĂĞůĞǀĂƌĂƚĂdžĂĚĞ
ŝŵŽďŝůŝnjĂĕĆŽĞĞǀŝƚĂƌĂƉĞƌĚĂĚĞĂƟǀŝĚĂĚĞĚĂĞŶnjŝŵĂĚƵƌĂŶƚĞŽƉƌŽĐĞƐƐŽ͘
Apoio Financeiro
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ŚĞŵŝƐƚƌLJ͕tĂƌƐĂǁ͕ǀ͘ϯ͕Ŷ͘ϭ͕Ɖ͘ϵϱͲϭϬϱ͕ϮϬϬϱ͘
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ĨƌŽŵͲdžLJůŽƐĞƵƐŝŶŐĞŶŐŝŶĞĞƌĞĚƐĐŚĞƌŝĐŚŝĂĐŽůŝ. ŝŽƌĞƐŽƵƌĐĞdĞĐŚŶŽůŽŐLJ͕ƐƐĞdž͕ǀ͘ϭϭϱ͕Ɖ͘ϮϰϰͲϮϰϴ͕ϮϬϭϮ͘