FeSBE 2012
Resumo: 06.001
OXIDATIVE STRESS MARKERS AND ANTIOXIDANT DEFENSES DURING INSECT DIAPAUSE
1
Autores
MOREIRA, D. C. 1, SABINO, M. A. T. C. 2, SILVA, G. C. 2, PAULA, D. P. 1, HERMES-LIMA, M. 1
Biologia Celular - UnB, 2 Lab Ecologia Molecular - Embrapa
Apoio Financeiro:
Resumo
Objetivos
The sunflower caterpillar, Chlosyne lacinia (Lepidoptera, Nymphalidae), is the main sunflower defoliator in Brazil. This
species completes its life cycle from egg hatching to the adult death within 35 days. However, these animals are able to
stop its development entering in diapause, a physiological adaptation to overcome an adverse environment. Animals in
diapause endure up to six months without feeding. Despite the importance of diapause to the insect survival, studies about
the relationship between free radical metabolism and diapause are scarce. Our aim is to identify particularities of the
antioxidant apparatus between diapausing and non-diapausing larvae in a temporal scale (20, 40 and 60 days).
Métodos
Eggs were collected from leaves of the wild sunflower (Tithonia diversifolia, Asteraceae), and after hatching, the caterpillars
were maintained at 25±2°C, 55±10% R.H. in plastic cages. Larvae were fed daily with fresh wild sunflower leaves until
reach the third instar when they were divided in four groups (in March 2010): non-diapausing (control), diapause larvae of
20 days, 40 days and 60 days. Whole body homogenates from a pool of four larvae were used in each assay, enzymatic
activities (n=3), oxidative stress markers (n=4) and glutathione parameters (n=4). One-way ANOVA and Tukey's multiple
comparison test were performed to compare groups.
Resultados
Citrate synthase activity decreased 51% in 20 day-diapausing larvae and remained lower than control in 40 and 60 daydiapausing insects. Carbonyl protein (indicator of protein oxidation) levels were similar in all groups. Moreover, TBARS
(indicator of lipid peroxidation) and total glutathione levels were reduced in diapausing C.lacinia by 59% and 70%,
respectively. Glucose 6-phosphate dehydrogenase activity was constant in all experimental groups. Catalase activity
dropped by 56% in 20 day-diapausing insects and remained reduced after 60 days of diapause. During diapause, there was
a 70% decrease in the concentration of GSH, while the amount of GSSG decreased 81%. The ratio GSSG/GSH-eq was
unaltered. GST activity increased by 32% at the 20th day and by 40% at the 60th day of diapause; these levels (3 – 5 U/mg
ptn) were higher than those found in most mammalian tissues.
Conclusão
Previous results demonstrated that the free radical metabolism and oxidative stress markers along with oxidative
metabolism are reduced in 20-day diapausing larvae. The present work suggests that an overall reduction of antioxidant
defenses and aerobic metabolism lasts for at least 60 days of diapause. However, GST activity showed an opposite
behavior, increasing during diapause. This agrees with other study in which higher levels of GST were observed in
diapausing 2nd instar larvae of the lepidopteran Choristoneura fumiferana (Insect Biochem. Mol. Biol. 29:779, 1999).
Elevated GST may be related to the modulation of redox signaling and the management of oxidative stress, resulting in high
stress tolerance during diapause. This enzyme family may have an important role during awakening from diapause when
food intake and oxidative metabolism are resumed.
FeSBE 2012
Resumo: 06.002
Autonomic control of heart rate during orthostasis in the serpent Python molurus.
1,4
ARMELIN, V. A. 1,4, BRAGA, V. H. D. S. 1, SILVA, V. R. R. 2,4, ABE, A. S. 3,4, RANTIN, F. T. 1,4,
FLORINDO, L. H. 1 Department of Zoology and Botany - UNESP / IBILCE, 2 Department of Zoology
Autores
- UNESP / IB, 3 Department of Physiological Sciences - UFSCAR / CCBS, 4 INCT - Comparative
Physiology - INCT / FisC
Apoio Financeiro:
CNPq / FAPESP (through National Institute of Science and Technology in
Comparative Physiology)
Resumo
Objetivos
Gravity is a force that is constantly interfering in the physiological parameters of animals, especially in the cardiovascular
system, yet, life beings have developed some physiological adaptations during the evolution, overcoming the gravity effects
with some adjustments – however, the regulation of these adjustments remains unknown, so the objective of the present
study was to investigate the autonomic regulation of heart during orthostasis, and quantify it by calculating the cholinergic
(Cho) and adrenergic (Adr) tones during these situations.
Métodos
The experiments were approved by UNESP/IBILCE Ethical Committee for Animal Research (prot. n o . 041/2011 CEUA).
Were used specimens of Python molurus (n = 4) of both sexes and mass ranging between 6 and 8 Kg. The experimental
protocol consisted in collect carotid pulse waves ( P < sub>C – amplitude in mV – directly proportional to carotid blood
pressure) and heart rate (ƒH, in bpm) profiles with the animals head-up positioned at 0 o , 30 o and 60 o (without and with
orthostatic stress respectively). Immediately after the acquisition of control data, the parasympathetic influence on heart was
abolished via an intraperitoneal injection of atropine (2,5 mg/kg), and the tilts were performed again. Hereafter, a bolus
injection of propranolol (3,5 mg/kg) was administered in the caudal vein, characterizing a complete autonomic blockade on
the heart, after that, the animals were tilted one more time. The autonomic tones were calculated from R-R intervals,
through the equations proposed by Altimiras et al. (Comp. Biochem. Physiol. 118A:131, 1997). The placebo tests were
performed 20 days after the experiments, the tilting protocol was repeated, but instead of drugs, the vehicle (isotonic saline)
was administered to confirm the results.
Resultados
Control = 0 o ƒH: 23,4±1; 30 o ƒH: 35,1±0,5; 60 o ƒH: 36,3±1; 0 o P < sub>C: 0,27±0,02; 30 o P < sub>C: 0,17±0,012; 60 o P
< sub>C: 0,17±0,014. Complete autonomic block = 0 o ƒH: 18,6±0,1; 30 o ƒH: 19±0,9; 60 o ƒH: 18,9±0,8; 0 o P < sub>C:
0,59±0,07; 30 o P < sub>C: 0,26±0,02; 60 o P < sub>C: 0,23±0,06. Placebo = 0 o ƒH: 24,2±0,8; 30 o ƒH: 35,7±0,6; 60 o ƒH:
35,9±1; 0 o P < sub>C: 0,26±0,03; 30 o P < sub>C: 0,18±0,05; 60 o P < sub>C: 0,17±0,02. Autonomic tonus on the heart =
0 o Cho: 23,9±4,2; 0 o Adr: 43,7±0,6; 30 o Cho: 3,5±0,4; 30 o Adr: 49,2±3; 60 o Cho: 1,5±0,7; 60 o Adr: 49,6±3. Results
compared with ANOVA one-way for repeated measures with Tukey post hoc (shown in Mean ± SEM).
Conclusão
When the animals were positioned at 30 o and 60 o the P < sub>C drastically decreased, indicating a reduction of blood
flow to the brain and an accumulation of blood in the caudal region. The caudal blood pooling reduces the venous return
and the cardiac output, to compensate this reduction, an increase in ƒ H has occurred at the inclinations, maintaining the
brain blood flow. The results also showed that the autonomic nervous system have an important role on the regulation of ƒH
during orthostasis, rising this parameter primarily by lowering the cholinergic tone. No differences were detected between
control and placebo groups.
FeSBE 2012
Resumo: 06.003
MIDAZOLAM AS AN AUXILIARY AGENT OF PHYSICAL RESTRAINT AND ITS INFLUENCE ON
HEART RATE IN Python molurus
1,2
ARMELIN, V. A. 1,2, BRAGA, V. H. D. S. 1, SANCHES, L. 1, LOPES, I. G. 3,2, ABE, A. S. 1,2,
Autores FLORINDO, L. H. 1 Department of Zoology and Botany - UNESP / IBILCE, 2 INCT - FisC - INCT FisC, 3 Department of Zoology - UNESP / IB
Apoio Financeiro:
CNPq / FAPESP (through National Institute of Science and Technology in
Comparative Physiology)
Resumo
Objetivos
Several times in comparative physiology studies, the investigators require that animals remain tranquil during the
experiments. Due to this, some scientists anesthetize them, but generally anesthetics change many physiological
parameters, invalidating the results. Furthermore, depending of the objectives of the research, a sedative would be more
appropriate for the situation, because the parameters may differ among conscious and unconscious animals. So, the aim of
this research is to evaluate the sedative midazolam as an agent of physical restraint and determine its influence on the
heart rate in the snake Python molurus.
Métodos
This investigation was a precondition for the development of other researches that is being performed in this laboratory, this
major researches is registered in UNESP/IBILCE Ethical Committee for Animal Research under the protocol n o . 41/2011
CEUA. Were used specimens of Python molurus (n = 5) of both sexes and mass ranging between 5 and 8 Kg. The
experimental protocol consisted in collect the heart rate (ƒH, in bpm) of the animals for 2 hours; the serpents were
accommodated in plastic boxes in a room with absolute silence. After the acquisition of control data (CT), the animals were
sedated by an intramuscular injection of midazolam (0,35 mg/kg) (M1) and the 2 hours measurements were performed
again. After 15 days, the 2 hours measure of heart rate was performed one more time, but with an application of 0,75 mg/kg
of midazolam (M2). The ƒH was compared between control and experimental groups in the following moments: after 30, 60,
90 and 120 minutes.
Resultados
CT30: 26,75±3,6; CT60: 24,5±1,3; CT90: 24,25±1,5; CT120: 22,75±2,6; M130: 22,75±1; M160: 19,75±4; M190: 14,5±0,6;
M1120: 12,75±0,9; M230: 21±3,5; M260: 17±4; M290: 13,5±4,3; M2120: 12,25±2. Results compared with ANOVA one-way for
repeated measures with Tukey post hoc. Data in Mean ± SEM.
Conclusão
There were no significant differences between the four moments analyzed in the control group, yet, the CT30 seems to be
overestimated, probably due to the stress of handling that had occurred recently. The M 130 and M230 groups do not showed
any differences when compared with any control groups, indicating that these midazolam dosages do not interfere on fH in
30 minutes. M160 haven’t differed from CT60 control group, but M260 is clearly minor than CT60, so, in 60 minutes
midazolam may interfere in ƒH. M190, M1120, M290 and M2120 are absolutely minor than CT90 and CT120, showing that in
these times midazolam certainly will reduce ƒH. For the two dosages analyzed, 5 minutes were sufficient to cause sedation
in all animals. Therefore, it can be concluded that midazolam is a good agent of physical restraint for experiments that
consider heart rate, but only for protocols that take 30 minutes or less.
FeSBE 2012
Resumo: 06.004
THE ROLE OF PROSTAGLANDINS IN HEMODYNAMIC ADJUSTMENTS TO GRAVITATIONAL
STRESS IN Python molurus
1,3
BRAGA, V. H. S. 1,3, ARMELIN, V. A. 1, SILVA, V. R. R. 2,3, ABE, A. S. 1,3, FLORINDO, L. H. 1
Autores Department of Zoology and Botany - UNESP / IBILCE, 2 Department of Zoology - UNESP / IB, 3
INCT - Comparative Physiology - INCT - FisC
Apoio Financeiro:
CNPq / FAPESP (through National Institute of Science and Technology in
Comparative Physiology)
Resumo
Objetivos
Gravity has been an evolution modulator since life appeared on earth, that’s the reason why life beings shows the most
diverse kinds of circulatory adaptations when facing gravity stress, without these adaptations life as we know, particularly
big plants and animals would be impossible to exist, considering these adaptations, snakes show a good experimental
model, because their cylindrical body consist a perfect hemodynamic pattern, as they don’t have external appendices, their
body is highly susceptible to blood pooling and low blood flow depending on body position. The objective of the present
study was to investigate the role of prostaglandins on the regulation of blood pressure and heart rate of Python molurus
under effect of imposed gravitational stress.
Métodos
The UNESP/IBILCE Ethical Committee for Animal Research approved the experiments under the protocol n o . 041/2011
CEUA as follow: Were used 4 specimens of Python molurus of both sexes (mass = 7 Kg ± 1). The carotid pulse waves ( P <
sub>C – amplitude in mV – directly proportional to carotid blood pressure) and heart rate (ƒH, in bpm) profiles were
measured with the animals head-up positioned at 0 o , 30 o and 60 o (without and with imposed gravitational stress
respectively), the tilt sequence were: 0 o , 30 o , 0 o , 60 o and then 0 o . After the acquisition of the data of control group,
diclofenac (4,0 mg.kg -1 ) was administrated intramuscularly and it was given a hour to the drug to block the prostaglandin
synthesis, then the drug group data was acquired. The saline tests were performed 20 days after the experiments, the tilting
protocol was repeated, but saline isotonic solution was administrated instead of the drug.
Resultados
Control = 0 o ƒH:23,4±0,7; 30 o ƒH:37,6±0,6; 60 o ƒH:38,1±0;5o 0 o P < sub>C:0,18±0,01; 30 o P < sub>C:0,11±0,01; 60 o P
< sub>C:0,10±0,01.With prostaglandins synthesis blocked = 0 o ƒH:21,5±2,1; 30 o ƒH:33,5±2,2; 60 o ƒH:35,7±1,8; 0 o P <
sub>C:0,27±0,08; 30 o P < sub>C:0,11±0,005; 60 o P < sub>C:0,11±0,006. Placebo = 0 o ƒH:24,2±0,8; 30 o ƒH:35,7±0,6;
60 o ƒH:35,9±1; 0 o P < sub>C:0,026±0,03; 30 o P < sub>C:0,18±0,05; 60 o P < sub>C:0,17±0,02. Results compared with
ANOVA one-way for repeated measures with Tukey post hoc.
Conclusão
When under the effect of inclination the animals P < sub>C drastically decreased, indicating a reduction of blood flow to the
head and a possible caudal blood pooling. This accumulation decreases the venous return and the cardiac output, so the
increased ƒH has occurred to compensate this reduction. The results also showed that the P < sub>C difference of
prostaglandin group not seemed to differ from the control group, this suggests that these hormones can have a lower
participation on hemodynamic regulation, at least in these animals. No differences were detected between control and
saline groups, demonstrating that the drugs vehicle does not produce any effect.
FeSBE 2012
Resumo: 06.005
Sequenciamento do gene da matriz do vírus Influenza A pH1N1 de amostras do Rio Grande do
Sul
1
OLIVEIRA, L. S. 1, CORRÊA, L. T. 1, BISOGNIN, C. Z. 1, TEIXEIRA, K. P. 1, MATIAS, F. 1,
Autores FILHO, N. A. K. 1, SANT’ANNA, F. H. 1, IKUTA, N. 1, D’AZEVEDO, P. A. 1, VEIGA, A. B. G. D. 1
Ciências Básicas da Saúde - UFCSPA
Apoio Financeiro:
FAPERGS, CAPES
Resumo
Objetivos
O vírus influenza A é responsável por causar epidemias de gripe todos os anos em humanos. Um subtipos frequente nas
gripes sazonais é o H1N1. Em 2009, um novo subtipo de H1N1 (pH1N1) causou uma pandemia em humanos, denominada
Gripe A; durante esse episódio, o Rio Grande do Sul (RS) foi o estado brasileiro mais afetado.Objetivos: caracterizar
genotipicamente e filogeneticamente o gene da matriz do vírus influenza A pH1N1 do ano de 2009, proveniente de
amostras coletadas no Rio Grande do Sul e compará-las com sequências deste vírus depositadas em bancos de dados
genômicos.
Métodos
RNA viral foi extraído de amostras de aspirado de nasofaringe de pacientes com Gripe A do RS e submetidos à RT-PCR
para amplificação de uma sequência do gene M do influenza A pH1N1. Os produtos de amplificação foram sequenciados e
as sequências foram comparadas com 11.636 sequências depositadas no banco de dados do influenza até onze de
outubro de 2010 (Influenza Research Database). Primeiramente foi construída uma árvore guia com todas as sequências
utilizando o programa on line MAFFT Rough Tree das quais foram escolhidos os galhos onde as amostras do Rio Grande
do Sul se inseriam. Os galhos selecionados foram utilizados para o alinhamento através dos programas Bioedit e MEGA 5,
e construção da árvore filogenética.
Resultados
Foram analisadas, até o momento, sete sequências do gene M, as quais se distribuíram em três clados, sendo duas
amostras relacionadas filogeneticamente com amostras provenientes do lado oriental do globo terrestre, uma amostra mais
relacionada com amostras provenientes do lado ocidental do globo e quatro amostras formando um clado à parte
(exclusivamente de amostras provenientes do RS).
Conclusão
Os resultados revelam indícios de um padrão de diferenciação do vírus pandêmico na população do estado do Rio Grande
do Sul, podendo esses dados servir como base para o delineamento de estudos mais aprofundados, os quais estão sendo
desenvolvidos pelo nosso grupo, juntamente com a análise de outras regiões do genoma viral.
FeSBE 2012
Resumo: 06.006
EXPRESSÃO DE ZIF268 NO CÉREBRO DO LAGARTO TROPICAL Tropiduris hispidus APÓS
EXPOSIÇÃO A UM AMBIENTE ENRIQUECIDO
1
APOLINÁRIO, G. K. S.* 1, SANTOS, J. R.** 5, FREIRE, M. A. M. 4, PEREIRA, C. 1, LEMOS, N.
A.** 2, FABER, J. 1, SOARES, B. L. 3, MARCHIORO, M. 2, RIBEIRO, S. 1 Departamento de
Autores
Fisiologia - UFRN, 2 Departamento de Neurociência - UFRN, 3 Departamento de Fisiologia - UFS, 4
Departamento de Biologia Celular - UNIFESP, 5 Departamento de Nutrição - UNP
Apoio Financeiro:
CAPES, CNPq e FINEP.
Resumo
Objetivos
Verificar se a proteína zif268 encontra-se presente no cérebro do lagarto tropical Tropidurus hispidus e estudar o efeito do
ambiente enriquecido na expressão dessa proteína nas diferentes áreas telencefálicas do lagarto.
Métodos
Nesse estudo foram utilizados 13 animais machos do lagarto Tropidurus hispidus, coletados no campus da Escola
Agrotécnica Federal do Rio Grande do Norte, sob a licença do SISBIO/ICMBIO (n. 19561-1) e da Comissão de Ética para
Avaliação de Uso e Cuidados de Animais em Pesquisa da Associação Alberto Santos Dumont de Apoio à Pesquisa (n.
04/2008). Três animais tiveram seus cérebros removidos a fresco e submetidos a Western blot com anticorpo para a
proteína zif-268, cuja expressão é induzida por despolarização neuronal. Os animais restantes foram separados em dois
grupos distintos (n=5 por grupo). Animais do grupo 1 foram expostos a um ambiente novo enriquecido com diversas pistas
espaciais, a fim de induzir a exploração espacial. Os animais do grupo 2 (grupo controle) permaneceram no ambiente em
que já estavam habituados, induzindo quiescência. Os animais de ambos os grupos, 90 minutos após o início da exposição
ao ambiente, foram perfundidos intracardíacamente com paraformaldeído a 4% (em PB pH=7,5). Os cérebros foram
crioprotegidos com sacarose a 20% e congelados, sendo posteriormente seccionados a 20 µm, montados em lâminas e
submetidos à técnica de imunohistoquímica para zif-268.
Resultados
Os resultados obtidos em Western blot com anticorpo para a proteína zif-268 de mamífero mostram sua grande
conservação em répteis. Esse trabalho é o primeiro que demonstra a presença dessa proteína no cérebro de lagartos. A
análise imunohistoquímica revelou a presença de células imunorreativas à proteína zif-268 nos córtices medial, dorsal e
lateral, áreas consideradas homólogas ao hipocampo reptliano. O grupo 1 (exploração do ambiente enriquecido)
apresentou um maior número de células reativas nos córtices medial (G1 = 80,4 ± 6,8 e G2 = 145,9 ± 11,3), dorsal (G1 =
92,5 ± 9,3 e G2 = 160,9 ± 10,1) e dorsomedial (G1 = 85,2 ± 7,4 e G2 = 140,7 ± 8,3), além de áreas como núcelos
amigdaloides (G1 = 75,8 ± 6,4 e G2 = 134,5 ± 8,3), estriado (G1 = 73,2 ± 5,9 e G2 = 110,5 ± 7,3) e septum (G1 = 79,1 ±
10,4 e G2 = 125,5 ± 5,9) do que o grupo controle G2 (* p < 0,01), enquanto que no córtex lateral não há diferença
estatística entre os dois grupos analisados (G1 = 113,4 ± 12,4 e G2 = 125,9 ± 17,1).
Conclusão
A proteína em questão encontra-se conservada em relação à proteína homóloga em ratos, ocorre em regiões
telencefálicas do lagarto e apresenta aumento dos níveis de expressão em áreas do hipocampo reptiliano quando os
animais exploram um ambiente novo. Esses dados, possivelmente, indicam uma função primitiva de áreas hipocampais
relacionadas à exploração espacial de vertebrados.
FeSBE 2012
Resumo: 06.007
ANÁLISE DA INFECÇÃO NATURAL EM FLEBOTOMÍNEOS CAPTURADOS EM ÁREA URBANA
DE CAMPO GRANDE.
1
Autores
LIMA, E. S. 1, NETO, E. R. 1, ESPINDOLA, A.S. 1, SANTOS, M. F. D. C. 1 biologia molecular UNIDERP
Apoio Financeiro:
Anhanguera Uniderp, UFMS, CAPES, Fundect.
Resumo
Objetivos
Detectar a infecção natural de flebotomíneos capturados na área urbana de Campo Grande, mais especificamente na
região Centro- Oeste, através da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) realizada no ano de 2011.
Métodos
A captura e identificação dos flebotomíneos foram realizadas segundo metodologia de Oliveira et. al. (2008) em pontos
estratégicos da vigilância entomológica do município. Os insetos capturados foram identificados e as fêmeas de L.
longipalpis separadas para as análises moleculares. Estas passaram pelo processo de extração do DNA, onde foram
triturados com em 300 μl da solução de resina Chelex® a 5%. A solução foi misturada com ajuda de vortex por 15s e em
seguida centrifugados por 20s a 13000 rpm. Foram colocados em banho-maria a 80ºC por 30 min e após este tempo o
procedimento foi repetido. O sobrenadante foi retirado, e depois congelado a – 20ºC. Foi utilizada uma reação em cadeia
de polimerase (PCR) para amplificação da sequência desejada, 12S rDNA mitocondrial. Os oligonucleotídeos iniciadores
utilizados foram: LITSR e L5.8S. O volume total para reação foi de 25 µL, sendo destes 5,5 µL de água, 1 µL de LITSR, 1
µL de L5.8S, 12,5 µL de GoTaq e 5 µL de DNA. A reação foi levada ao termociclador e após a amplificação dos
fragmentos, foi realizada eletroforese em gel de agarose a 1%, corado com Gel Red® e visualizado com auxílio de luz UV.
Resultados
A região Centro-Oeste foi escolhida por ser a área mais endêmica de Campo Grande e concentrar grande área de mata
fechada. Foram analisadas 160 amostras de fêmeas de Lutzomyia longipalpis, todas negativas para infecção por
leishmania. O baixo número de insetos coletados contribuiu para o resultado negativo da taxa de infecção, visto que o
número de insetos é pequeno para esse tipo de estudo já que a taxa de infecção natural costuma ser muito baixa, menos
de 1%. No ano de 2011 na região de Campo Grande o clima foi atípico, em períodos habituais de maior abundância da
fauna flebotomínea ocorreram longos períodos de estiagem precedidos por períodos prolongados de intensas chuvas.
Ambas as condições climáticas extremas foram prejudiciais na coleta, pois os flebotomíneos apresentam uma distribuição
sazonal associada aos índices pluviométricos e de umidade.
Conclusão
Mesmo com a alta especificidade e sensibilidade da PCR não foi possível identificar flebotomíneos naturalmente
infectados, devido ao baixo número de insetos. Apesar de não haver a presença de infecção natural, a alta densidade de
flebotomíneos na área urbana da capital juntamente com o crescente número de casos da doença, evidenciam o potencial
vetorial do Lutzomyia longipalpis. Sabe-se que a taxa de infecção de Leishmania no vetor é considerada baixa na natureza,
mesmo em áreas endêmicas para Leishmaniose Visceral (LV), mas baseado no alto grau de antropofilia e capacidade
vetorial de L. longipalpis, no registro de casos autóctones de LV e na abundância e distribuição espacial desta espécie
coincidente com a área de ocorrência da doença, podemos sugerir sua participação no ciclo de transmissão da LV no
município.
FeSBE 2012
Resumo: 06.008
ANÁLISE FILOGENÉTICA DO SEGMENTO HA PARCIAL DO VÍRUS INFLUENZA A (H1N1)
PANDÊMICO DO ANO DE 2009.
1
CORRÊA, L. T. 8, MATIAS, F. 2, FILHO, N. A. K. 7, SANT'ANNA, F. H. 1, D'AZEVEDO, P. A. 1,
VEIGA, A. B. G. D. 8, BISOGNIN, C. Z. 1, GOSHIYAMA, A. M. 1, TEIXEIRA, K. P. 1 Ciências
básicas da saúde - UFCSPA, 2 Ciências básicas da saúde - UFCSPA, 3 Ciências básicas da saúde Autores
UFCSPA, 4 Ciências básicas da saúde - UFCSPA, 5 Ciências básicas da saúde - UFCSPA, 6 Ciências
básicas da saúde - UFCSPA, 7 Ciências básicas da saúde - UFCSPA, 8 Ciências básicas da saúde UFCSPA, 9 Ciências básicas da saúde - UFCSPA
Apoio Financeiro:
FAPERGS, CAPES, CNPq
Resumo
Objetivos
O vírus Influenza A é responsável por causar epidemias de gripe, todos os anos, em humanos. Em 2009 foi observada
uma grande incidência do vírus influenza A (H1N1) 2009 pandêmico (pH1N1). O envelope do vírus consiste de uma
bicamada lipídica da qual se projetam as glicoproteínas de superfície, hemaglutinina (HA) e neuraminidase (NA). No caso
da HA, esta se liga a moléculas de ácido N-acetilneuramínico (AS) do receptor presente na membrana de células epiteliais
do trato respiratório do hospedeiro, promovendo a fusão do vírus com a célula. Por ser um determinante para a entrada do
vírus na célula, com papel importante na interação patógeno-hospedeiro, a HA sofre pressão seletiva; ou seja, mutações
na HA podem contribuir para o fitness do vírus, tornando-o capaz de driblar o sistema imunológico do hospedeiro. Essas
mutações são comuns, sendo a HA um bom parâmetro para análises filogenéticas. Objetivos: Avaliar as sequências
parciais da proteína HA do genoma do vírus Influenza A (H1N1)2009 de pacientes do Rio Grande do Sul e compará-las
com as sequências depositadas no banco de dados do Influenza Research Database.
Métodos
Amostras de aspirado de nasofaringe positivas para pH1N1 foram fornecidas pelo Laboratório Central do Estado (LACENRS). O RNA total foi extraído e transformado em cDNA através de RT-PCR. O cDNA foi utilizado para amplificação parcial
do segmento HA com posterior sequenciamento. As sequências obtidas foram comparadas às sequências depositadas no
banco de dados utilizando-se os programas de bioinformática MAFFT online, Bioedit e MEGA 5.
Resultados
O segmento da proteína HA teve suas sequências distribuídas em quatro clados, sendo que um era formado apenas por
amostras do Rio Grande do Sul, e os demais contendo amostras de outras regiões geográficas. A existência de um clado
separado de amostras do Rio Grande do Sul é uma observação relevante, uma vez que o grupo distinto indica menor
verossimilhança, possivelmente devido a novas mutações no RNA do segmento HA em pacientes do Rio Grande do Sul.
Conclusão
A partir dos resultados obtidos, percebe-se um padrão de diferenciação do vírus pandêmico nos pacientes do Rio Grande
do Sul, dados que deverão ser confirmados com análise completa do segmento em um número maior de amostras.
FeSBE 2012