MONOGRAFIA:
EFEITO DA OUABAÍNA NA RECICLAGEM
DE VESÍCULAS SINÁPTICAS EM JUNÇÃO
NEUROMUSCULAR
Aluna: Luciana Ferreira Leite
Orientadora: Profª. Dra. Cristina Guatimosim Fonseca
Laboratório de Biologia da Neurotransmissão
JUNÇÃO NEUROMUSCULAR DE RÃ
http://academic.wsc.edu/faculty/jatodd1/351/ch6outline.html
RECICLAGEM DE VESÍCULAS SINÁPTICAS
Ca++
Abreu, B.J.
RECICLAGEM DE VESÍCULAS SINÁPTICAS
http://www.standford.edu/group/Urchin/GIFS/exocyt.gif
http://thalamus.wustl.edu/nonetlab/ResearchF/svcycle.html
RECICLAGEM DE VESÍCULAS SINÁPTICAS
http://www.neuro.ki.se/molsyn/B
rodin_home.html
http://www.erin.utoronto.ca
/~w3bio315/RME.htm
RECICLAGEM DE VESÍCULAS SINÁPTICAS
Royle and Lagnado, 2003
FM1-43 STAINING
+
Positive
head
bridges
Lypophilic tail
Abreu, B.J.
FM1-43 STAINING
Marcação com estímulo elétrico de 20Hz por 10 min
FM1-43 STAINING
Marcação com estímulo elétrico de 20Hz por 10 min
FM1-43 DESTAINING
Abreu, B.J.
COMPOSTOS QUE AFETAM A RECICLAGEM
• α-Latrotoxina (Ceccarelli & Hurlbut, 1980;
Henkel & Betz,1995)
COMPOSTOS QUE AFETAM A RECICLAGEM
• α-Latrotoxina (Ceccarelli & Hurlbut, 1980;
Henkel & Betz,1995)
• Propionato e Acidificação (Lindgren et al, 1996)
COMPOSTOS QUE AFETAM A RECICLAGEM
• α-Latrotoxina (Ceccarelli & Hurlbut, 1980;
Henkel & Betz,1995)
• Propionato e Acidificação (Lindgren et al, 1996)
• OUABAÍNA (Adam-Vizi & Ligeti, 1984; Haimann et al, 1985;
Prado et al, 1990; Prado et al, 1993; Lomeo et al, 2003).
OBJETIVOS
 Objetivo geral
- Investigar o efeito da ouabaína na reciclagem
de vesículas sinápticas “ in vivo”
OBJETIVOS
 Objetivos específicos
- Padronizar a técnica de marcação de terminais axônicos
com a sonda fluorescente FM1-43.
- Investigar o efeito da ouabaína na exocitose de vesículas
sinápticas.
- Investigar o efeito da ouabaína na endocitose de
vesículas sinápticas.
- Investigar se a ação da ouabaína é dependente de cálcio
extracelular.
RESULTADOS
Marcação e desmarcação dos terminais nervosos com
estímulo elétrico
A
C
D esm arcação evo cad a p o r estím u lo elétrico
B
F lu o re s c ê n c ia (% )
120
100
80
60
40
0
2
4
6
8
T em p o (m in )
1 terminação / 6 spots
10
12
RESULTADOS
Efeito da ouabaína na marcação de terminais nervosos
Estímulo elétrico
Ouabaína
RESULTADOS
Efeito da ouabaína na exocitose de vesículas sinápticas
D e s m a rc a ç ã o e vo c a d a p e la o u a b a ín a
F lu o re s c ê n c ia (% )
120
100
80
60
40
0
10
20
30
40
50
60
70
T e m p o (m in )
Q u e d a se m e stím u lo
D e sm a rca çã o co m 1 0 0 µ M d e o u a b a ín a
34 spots 6 terminações
RESULTADOS
O efeito da ouabaína na exocitose de vesículas sinápticas é
dependente de cálcio extracelular?
D e s m a rc a ç ã o c o m O u a b a ín a
F lu o re s c ê n c ia (% )
120
100
80
60
40
0
10
20
30
40
50
60
70
T e m p o (m in )
D e s m a rc a ç ã o s e m e s tím u lo
O u a b a ín a e m R in g e r N o rm a l
O u a b a ín a e m 0 C á lc io + E G T A (2 m M )
68 spots 12 terminações
RESULTADOS
Efeitos da ouabaína:
RESULTADOS
Efeitos da ouabaína:
• Bloqueia a endocitose
RESULTADOS
Efeitos da ouabaína:
• Bloqueia a endocitose
• Promove a exocitose
RESULTADOS
Efeitos da ouabaína:
• Bloqueia a endocitose
• Promove a exocitose
• O efeito da ouabaína é independente de cálcio
extracelular
PERSPECTIVAS...
AGRADECIMENTOS ...
OBRIGADA
PELA
ATENÇÃO!