3M Petrifilm
TM
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Placa para Contagem de E.coli e Coliformes
Placa para Contagem de Coliformes
Guia de
Interpretação
3M Petrifilm
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Placa para Contagem de E.coli e Coliformes
Este guia apresenta resultados das Placas 3MTM PetrifilmTM para Contagem de
E.coli e Coliformes. Para maiores informações, contate o representante de
produtos microbiológicos da 3M do Brasil Ltda.
As Placas 3M™ Petrifilm™ para Contagem de E.coli e Coliformes (EC) contêm nutrientes do meio Vermelho Violeta Bile (VRB),
um agente geleificante solúvel em água fria, um indicador de atividade glicuronidásica e um indicador que facilita a enumeração
da colônia. A maioria das E.coli (cerca de 97%) produz beta-glicuronidase na qual forma um precipitado azul associado a
colônia. O filme superior retém o gás formado pelos coliformes e E.coli que são fermentadores de lactose. Cerca de 95% das
E.coli produzem gás indicadas pelas colônias azuis a vermelho-azuladas, associadas ao gás retido na Placa Petrifilm EC (dentro
de, aproximadamente, o diâmetro de uma colônia).
AOAC INTERNATIONAL e U.S FDA Bacteriological Analytical Manual (BAM) definem coliformes como bacilos gram-negativos
produtores de ácido e gás a partir da lactose durante a fermentação metabólica. Colônias de coliformes que crescem na Placa
Petrifilm EC produzem ácido, fazendo com que o indicador de pH torne a cor do gel vermelho mais escuro.
O gás retido ao redor das colônias vermelhas de coliformes indica coliformes confirmados.
A identificação de E.coli pode variar para
cada país (veja a seção Instruções de Uso
para tempos e temperaturas de incubação):
Método validado pela AOAC INTERNATIONAL
E.coli = 49 (colônias azuis com gás)
Coliformes Totais = 87 (colônias vermelhas
e azuis com gás).
1
Não use esta placa para a detecção de E.coli 0 157. Como a maioria dos outros meios para E.coli e Coliformes, esta placa
não indicará, especificamente, a presença de qualquer cepa 0 157.
1
2
Sem crescimento = 0
Observe as mudanças na cor do gel nas figuras de
2 a 8. Quando a contagem de E.coli ou coliformes
aumenta, a cor do gel se torna vermelha escura ou
roxo-azulada.
Iluminação
de Fundo
1
Iluminação
Frontal
3
Contagem de E.coli = 13
Contagem de Coliformes Totais = 28
A faixa de contagem para a população total na
Placa Petrifilm EC é de 15 a 150.
Não conte as colônias que aparecem na barreira de
espuma, pois elas não estão sob a influência seletiva
do meio. Veja o círculo 1.
2
4
Contagem de E.coli = 3
Qualquer azul na colônia (azul a vermelho-azulado)
indica a presença de E.coli. Iluminação frontal
realçará a detecção do precipitado azul formado
pela colônia.
O círculo 1 mostra uma colônia vermelho-azulada
contada usando iluminação de fundo. O círculo 2
mostra a mesma colônia com iluminação frontal.
O precipitado azul é mais evidente no círculo 2.
5
Contagem de E.coli = 17
Contagem estimada de Coliformes Totais = 150
A área circular de crescimento é aproximadamente
20 cm2. Estimativas podem ser feitas nas placas
contendo mais de 150 colônias, através da contagem
do número de colônias em um ou mais quadrados
representativos e determinando o número médio por
quadrado. Multiplique o número médio por 20 para
determinar a contagem estimada por placa.
INC (Incontáveis) Para obter uma contagem mais precisa, dilua a amostra
6
7
Contagem atual ~ 10 6
Contagem atual ~ 10 8
Placas Petrifilm EC que são incontáveis têm uma ou
mais das seguintes características: muitas colônias
pequenas, muitas bolhas de gás, e uma alteração da
cor do gel de vermelho para roxo-azulada.
Altas concentrações de E.coli podem tornar a área
de crescimento roxa-azulada.
8
Contagem de E.coli presuntiva ~8
Contagem de Coliformes Totais estimada ~ 10 8
Quando altos níveis de coliformes estão presentes
(>10 8 ), algumas cepas de E.coli podem produzir
menos gás e colônias azuis podem ser menos
definitivas. Conte todas as colônias azuis sem gás e/ou
zonas azuis como E.coli presuntiva. Pegue colônias
azuis sem gás e confirme, se necessário.
9
Contagem atual ~ 10 8
Quando altos números de organismos não-coliformes,
tais como Pseudomonas, estão presentes nas Placas
Petrifilm EC, o gel pode se tornar amarelo.
Bolhas
1
3
2
10
11
Contagem de Coliformes Totais = 3
Contagem Total de Coliformes = 78
Partículas de alimentos têm formatos irregulares e
não estão associadas as bolhas de gás.
As bolhas podem variar. O gás pode romper a
colônia de forma que a colônia contorne a bolha.
Veja os círculos 1 e 2.
Bolhas artificiais podem resultar de uma inoculação
inadequada ou do ar retido na amostra. Elas são
irregulares e não estão associadas a colônia.
Veja o círculo 3.
3
1
4
2
5
8
6
9
7
10
12
Os exemplos de 1 a 10 mostram várias bolhas
associadas as colônias produtoras de gás.
Todas devem ser enumeradas.
3M Petrifilm
TM
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Placa para Contagem de Coliformes
Este guia apresenta resultados das Placas 3M™ Petrifilm™ para Contagem de
Coliformes. Para maiores informações, contate o representante de produtos
microbiológicos da 3M do Brasil Ltda.
As Placas 3M™ Petrifilm™ para Contagem de Coliformes (CC) contêm nutrientes do meio Vermelho Violeta Bile (VRB), um agente
geleificante solúvel em água fria e um indicador tetrazólico que facilita a enumeração das colônias. O filme superior retém o gás
formado pelos coliformes fermentadores de lactose.
AOAC INTERNATIONAL e U.S FDA Bacteriological Analytical Manual (BAM) definem coliformes como bacilos gram-negativos
produtores de ácido e gás a partir da lactose durante a fermentação metabólica. Colônias de coliformes que crescem na Placa
Petrifilm CC produzem ácido, fazendo com que o indicador de pH torne a cor do gel vermelho mais escuro. O gás retido ao redor
das colônias vermelhas de coliformes indica coliformes confirmados.
A identificação de coliformes pode variar
para cada país (veja a seção Instruções
de Uso para tempos e temperaturas de
incubação):
Método validado pela AOAC INTERNATIONAL
Coliformes Totais = 69 (colônias com gás).
1
1
2
3
Sem crescimento = 0
Contagem de Coliformes Totais = 79
Observe as mudanças na cor do gel nas figuras de
2 a 8. Quando a contagem de coliformes aumenta,
a cor do gel escurece.
A faixa de contagem para a população total na
Placa Petrifilm CC é de 15 - 150.
Não conte as colônias que aparecem na barreira
de espuma, pois elas não estão sob a influência
o seletiva do meio. Veja o círculo 1.
Bolhas de fundo são características do gel e não
indicam crescimento de coliformes.
4
Contagem Estimada de Coliformes Totais = 220
A área circular de crescimento é aproximadamente
20 cm2. Estimativas podem ser feitas nas placas
contendo mais de 150 colônias, através da contagem
do número de colônias em um ou mais quadrados
representativos e determinando o número médio por
quadrado. Multiplique o número médio por 20 para
determinar a contagem estimada por placa. Diluição
posterior da amostra é recomendada para uma
contagem mais precisa.
5
INC
Placas Petrifilm CC que são incontáveis têm uma
ou mais das seguintes características: muitas
colônias pequenas, muitas bolhas de gás e um
escurecimento da cor do gel.
7
6
Contagem atual = 4
Contagem de Coliformes Totais = 2
Quando altos números de organismos não-coliformes,
tais como Pseudomonas estão presentes nas Placas
Petrifilm CC, o gel pode se tornar amarelo.
Partículas de alimentos têm formatos irregulares e
não estão associadas as bolhas de gás.
1
3
3
1
4
2
2
5
8
6
9
7
10
9
8
Contagem de Coliformes Totais = 8
As bolhas podem variar. O gás pode romper a
colônia de forma que a colônia contorne a bolha.
Veja os círculos 1 e 2.
Bolhas artificiais podem resultar de uma inoculação
inadequada ou do ar retido na amostra. Elas são
irregulares e não estão associadas a colônia.
Veja o círculo 3.
Os exemplos de 1 a 10 mostram várias bolhas
associadas as colônias produtoras de gás.
Todas devem ser enumeradas.
3M Petrifilm
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Instruções de Uso
Placa para Contagem de E.coli e de Coliformes
Para informações detalhadas sobre PRECAUÇÕES, REJEIÇÃO DE GARANTIAS/RECURSO LIMITADO, RESTRIÇÕES DE
RESPONSABILIDADE DA 3M, ARMAZENAMENTO E DESCARTE E INSTRUÇÕES DE USO veja a bula do produto.
Armazenamento
Petrifilm
Petrifilm
Petrifilm
1
Refrigere os pacotes fechados a < 8°C.
Use antes da data de vencimento impresso
na embalagem. Em áreas de alta umidade
onde a condensação pode ser um problema,
deixe os pacotes atingirem a temperatura
ambiente antes de abrí-los.
2
Para selar os pacotes abertos, dobre a
extremidade e sele com fita adesiva.
3
Mantenha os pacotes re-selados a
< 25ºC e < 50% UR. Não refrigere os
pacotes abertos. Use as Placas
Petrifilm em um mês, após abertos.
Preparo da Amostra
4
Prepare uma diluição 1:10 ou superior
da amostra. Pese ou pipete a amostra
num recipiente adequado, como saco
para homogeneização, frasco de
diluição ou outro recipiente estéril.
5
Adicione a quantidade adequada de um dos
diluentes estéreis a seguir: tampão fosfato
de Butterfield, água peptonada 0,1%,
diluente salina peptonada (método ISO 6887),
água peptonada tamponada
(método ISO 6887-1), solução salina
(0,85-090%), caldo letheen sem
bissulfito ou água destilada.
Não use tampões contendo citrato,
bissulfito ou tiossulfato; eles
podem inibir o crescimento.
6
Misture ou homogeneíze a amostra
utilizando métodos de rotina.
• para a placa de E.coli, ajuste o pH
da amostra diluída entre 6,5 e 7,5
• para a placa de Coliformes, ajuste
o pH da amostra diluída entre 6,6 e 7,2
• para produtos ácidos use NaOH1 1N
• para produtos alcalinos use HCI 1N
Inoculação
7
Coloque a Placa Petrifilm em uma
superfície plana. Levante o
filme superior.
8
Com a pipeta posicionada
perpendicularmente à Placa
Petrifilm, coloque 1 ml da amostra
no centro do filme inferior.
9
Cuidadosamente DESÇA o filme
superior de forma a evitar a
formação de bolhas de ar. NÃO
deixe o filme superior cair.
Lado côncavo
Lado liso
10
Com o lado LISO para baixo,
coloque o difusor no filme superior
sobre o inóculo.
11
DELICADAMENTE pressione o
difusor para distribuir o inóculo na
área circular antes do gel se formar.
Não gire nem arraste o difusor.
12
Retire o difusor. Espere um minuto,
no mínimo, para o gel solidificar.
Interpretação
Incubação
<70°F
13
Incube as placas com a face
transparente para cima, em pilhas de
até 20 placas. Pode ser necessário
umidificar a estufa para minimizar a
perda de umidade.
14
As Placas Petrifilm podem ser
contadas em um contador de
colônias comum ou outro sistema
de amplificação. Consulte o Guia
de Interpretação para a leitura
dos resultados.
15
As colônias podem ser isoladas
para identificação futura. Levante o
filme superior e retire a
colônia do gel.
O tempo e a temperatura de incubação variam de acordo
com o método. Os métodos aprovados mais comuns são:
Placa para Contagem de E.coli e Coliformes (EC)
Método Oficial AOAC 991.14
Para coliformes: incube 24h ± 2h a 35°C ± 1°C
Para E.coli: incube 48h ± 2h a 35°C ± 1°C
Método Oficial AOAC 998.08
Para E.coli (carnes, aves e pescados):
incube 24h ± 2h a 35°C ± 1°C
Método NMKL (147.1993)
Para coliformes: incube 24h ± 2h a 37°C
Para E.coli: incube 48h ± 2h a 37°C
Placa para Contagem de Coliformes (CC)
Coliformes Totais
• Métodos Oficiais AOAC 986.33 e 989.10
(leite, leite cru, outros produtos lácteos)
incube 24h ± 2h a 32°C ± 1°C
• Método Oficial AOAC 991.14 (alimentos)
incube 24h ± 2h a 35°C ± 1°C
• Método NMKL (147.1993)
incube 24h ± 2h a 37°C ± 1°C
• Métodos validados AFNOR 3M 01/2 –
09/89A e B (todos os tipos de alimentos
exceto ostra)
incube 24h ± 2h a 30°C ± 1°C
Coliformes Termotolerantes
• Método validado AFNOR
3M 01/2 – 09/89C (todos os tipos
de alimentos)
incube 24h ± 2h a 44°C ± 1°C
• Umidificação da estufa
é necessária nesta temperatura
elevada.
Abril/09 Bretas
Microbiologia
3M do Brasil Ltda.
Via Anhanguera, km 110
13181-900 - Sumaré - SP