Von Willebrand Reagent
[VWF] [REAGENT]
OUBD G23 C0501 (876)
For the determination of ristocetin cofactor activity
Method
Intended Use and Application
Agglutination method
Dilute the plasma specimen with isotonic saline as shown in the following scheme:
In vitro diagnostic reagent for determination of the ristocetin cofactor
activity of von Willebrand factor in human plasma using the platelet agglutination method.
Summary and Explanation
Diagnosis of von Willebrand’s disease and of diseases with changes in
the ristocetin cofactor such as lesions and inflammations of the vascular
endothelium. Pre-operative screening of hemorrhagic diatheses: in patients with values below 40 % of the norm bleeding complications are to be
expected during dental extractions and surgical interventions.
Principle of the Method
500 µL 500 µL 500 µL 250 µL
Specimen or
dilution
Isotonic saline
Dilution step
Titre
–
50 µL
500 µL 500 µL 500 µL 250 µL
250 µL 950 µL 500 µL 500 µL 250 µL 250 µL
blank 1 : 20 1 : 40 1 : 80 1 : 120 1 : 160
–
20
40
80
120
160
Reagents
Onto each of the 6 fields of the enclosed glass plate pipette in succession
50 µL Plasma dilution or blank and
50 µL Reagent (shake vigorously before use)
and mix. Then agitate slowly for 1 minute (shaker device or by manual
agitation) and then leave to stand for 1 min. If the plates are shaken manually ensure that the test preparations are well mixed!
Assess the agglutination against a dark background with reference to
the blank.
Composition
The von Willebrand Reagent contains stabilized platelets, ristocetin and
EDTA in lyophilized form.
Preservative: sodium azide (max. 0.5 g/L).
Evaluation
The titre of the specimen is given by the dilution in which there is distinct
agglutination compared to the blank. The ristocetin cofactor content in % of
the norm is obtained by multiplying the titre of the specimen with the limit
of detection which is stated on the vial label. If the content needs to be
determined within narrower limits (e.g. in the decision range of 50 %) the
intervals between the dilutions have to be reduced to a corresponding
extent.
Stabilized platelets are agglutinated in the presence of von Willebrand
factor and the antibiotic ristocetin A.
Materials provided
[VWF] [REAGENT], [REF] OUBD
5 x l 2 mL [REAGENT], von Willebrand Reagent
1 glass plate
Warnings and Precautions
1. For in-vitro diagnostic use only.
2. Contains sodium azide (< 0.1 %) as a preservative. Sodium azide can
react with copper or lead pipes in drain lines to form explosive compounds. Dispose of properly in accordance with local regulations.
3. Each donor or donor unit was tested and found to be negative for human immunodeficiency virus (HIV) 1 and 2, hepatitis B virus (HBV) and
hepatitis C virus (HCV) using either tests found to be in conformance
with the In Vitro Diagnostic Directive in the EU or FDA approved tests.
Because no known test can offer complete assurance of the absence
of infectious agents, all human derived products should be handled
with appropriate caution.
Preparation of the Reagent
Agglutination method:
Resuspend the reagent in the labelled quantity of distilled water at
+15 to +25 °C by shaking (e.g. on an automatic shaker). The reagent is
immediately ready for use.
Mix carefully once more before using.
Storage and Stability
Store the reagent unopened at +2 to +8 °C and use by the expiry date
given on the label.
Stability after reconstitution:
at +2 to +8 °C
5 days
at +15 to +25 °C
8 hours
Materials required but not provided
Control Plasma N, [REF] ORKE
Control Plasma P, [REF] OUPZ
Isotonic saline
Specimens
To separate the plasma mix 1 part sodium citrate solution 0.11 mol/L with
9 parts venous blood, taking care to avoid the formation of foam. Centrifuge immediately at no less than 1,500 x g for at least 10 min, remove
the supernatant plasma and keep at +15 to +25 °C until required in the
assay, or store deep-frozen.
Stability of the specimens:
6 hours
at +15 to +25 °C
3 months
at ≤ -20 °C
OUBD G23 C0501 (876)
Edition May 2008
Internal Quality Control
Normal range: Control Plasma N
Pathological range: Control Plasma P
For each reagent filling, two controls (one in the normal range and one
in the pathological range) should be measured. The controls should be
treated like the samples. The results obtained must lie within the confidence
interval indicated for the controls in the lot-specific table of reference values.
If the measured control value lies outside the allowable confidence interval,
the reagent should be checked.
Limitations of the Procedure
Results of this test should always be interpreted in conjunction with the
patient’s medical history, clinical presentation and other findings.
Reference Interval
70 - 150 % of the norm1.
Each laboratory should determine its own reference range.
Bibliography
1. Schneppenheim R. von Willebrand factor (vWF). In: Thomas L, ed. Clinical
Laboratory Diagnostics. Frankfurt: TH Books Verlagsgesellschaft; 1998:
614-6.
Von Willebrand-Reagenz
[VWF] [REAGENT]
Zur Bestimmung der Ristocetin-Kofaktor-Aktivität
Anwendungsbereich
In vitro Diagnostikum zur Bestimmung der Ristocetin-Kofaktor-Aktivität des
von-Willebrand-Faktors in Humanplasma über die Plättchen-Agglutina­tion.
Diagnostische Bedeutung
Diagnose des von-Willebrand-Syndroms und von Erkrankungen mit
Veränderungen des Ristocetin-Kofaktors wie Gefäßendothel-Läsionen
und Entzündungen. Präoperatives Screening von Blutungsneigungen:
bei Werten unter 40 % der Norm ist bei Zahnextraktionen und operativen
Eingriffen mit Blutungskomplikationen zu rechnen.
Prinzip der Methode
Stabilisierte Plättchen werden in Anwesenheit des von-Willebrand-Faktors
und des Antibiotikums Ristocetin A agglutiniert.
Reagenzien
Inhalt der Handelspackung
[VWF] [REAGENT], [REF] OUBD
5 x l 2 ml [REAGENT], von Willebrand-Reagenz
1 Glasplatte
Zusammensetzung
Das von Willebrand-Reagenz enthält stabilisierte Human-Plättchen,
Ristocetin und EDTA in lyophilisierter Form.
Konservierungsmittel: Natriumazid (max. 0,5 g/l).
Warnungen und Vorsichtsmaßnahmen
1. Nur zur in-vitro diagnostischen Anwendung.
2. Enthält Natriumazid (< 0,1 %) als Konservierungsmittel. Natriumazid
kann mit kupfer- oder bleihaltigen Abflussrohren explosive Verbindungen eingehen. Entsorgen Sie bitte ordnungsgemäß entsprechend
den örtlichen Richtlinien.
3. Jede individuelle Blutspende wurde mit negativem Befund auf humane
Immundefizienz-Viren (HIV) 1 und 2, Hepatitis B-Viren (HBV) und
Hepatitis C-Viren (HCV) getestet. Die eingesetzten Teste entsprachen
entweder den Anforderungen der EU Richtlinie über In-vitro-Diagnostika
oder waren von der FDA zugelassen. Da kein Test mit völliger Sicherheit die Abwesenheit von Infektionserregern garantieren kann, sollten
alle Produkte mit humanen Bestandteilen mit angemessener Sorgfalt
behandelt werden.
Vorbereitung der Reagenzien
Agglutinationsmethode:
Das Reagenz wird mit der auf dem Etikett angegebenen Menge dest.
Wasser bei +15 bis +25 °C durch Schütteln (z. B. mit einem automatischen
Schüttler) resuspendiert und ist sofort gebrauchsfertig.
Vor Gebrauch noch einmal vorsichtig mischen.
Haltbarkeit und Lagerungsbedingungen
Das Reagenz ist ungeöffnet bei +2 bis +8 °C zu lagern und bis zu dem
auf dem Etikett angegebenen Verfallsdatum verwendbar.
Stabilität nach Rekonstitution:
bei +2 bis +8 °C
5 Tage
bei +15 bis +25 °C
8 Stunden
Zusätzlich benötigte Materialien
Kontroll-Plasma N, [REF] ORKE
Kontroll-Plasma P, [REF] OUPZ
Isotonische Kochsalz-Lösung
Untersuchungsmaterial
Zur Plasmagewinnung 1 Teil Natriumcitrat-Lösung 0,11 mol/l mit 9 Teilen
Venenblut sorgfältig unter Vermeidung von Schaumbildung mischen. Sofort
mindestens 10 min bei mindestens 1.500 x g zentrifugieren, überstehendes Plasma abheben und bis zum Test bei +15 bis +25 °C lagern oder
tiefgefroren aufbewahren.
Stabilität der Proben:
6 Stunden
bei +15 bis +25 °C
3 Monate
bei ≤ -20 °C
OUBD G23 C0501 (876)
Ausgabe Mai 2008
Methodik
Agglutinationsmethode
Die Plasmaprobe wird mit isoton. Kochsalz-Lösung entsprechend dem
nachfolgenden Schema verdünnt:
Probe bzw.
Verdünnung
Isoton. Kochsalz-Lösung
Verdünnungsstufe
Titer
500 µl
500 µl
500 µl
250 µl
–
50 µl
500 µl
500 µl
500 µl
250 µl
250 µl
950 µl
500 µl
500 µl
250 µl
250 µl
Leerwert 1 : 20
–
20
1 : 40
40
1 : 80 1 : 120 1 : 160
80
120
160
Auf die 6 Felder der beigefügten Glasplatte nacheinander je
50 µl Plasmaverdünnung bzw. Leerwert und
50 µl Reagenz (vorher kräftig schütteln)
pipettieren und mischen. Danach 1 min langsam schütteln (Schütteltisch
oder durch Handbewegung) und anschließend 1 min stehenlassen. Bei
manuellem Schütteln auf eine gute Durchmischung der Testansätze
achten!
Agglutination vor einem dunklen Hintergrund gegen den Leerwert ab­lesen.
Auswertung
Der Titer der Probe ist die Verdünnungsstufe, in der eine im Vergleich
zum Leerwert deutliche Agglutination zu beobachten ist. Den Gehalt an
Ristocetin-Kofaktor in % der Norm erhält man durch Multiplikation des
Titers der Probe mit der Nachweisgrenze, die auf dem Flaschenetikett
angegeben ist. Falls der Gehalt in engeren Grenzen bestimmt werden soll
(z. B. im Entscheidungsbereich von 50 %), sind die Verdünnungsschritte
entsprechend kleiner zu wählen.
Interne Qualitätskontrolle
Normalbereich:
Kontroll-Plasma N
Pathologischer Bereich: Kontroll-Plasma P
Für jede Abfüllung des Reagenzes sollten zwei Kontrollen (eine im Normalbereich und eine im pathologischen Bereich) gemessen werden. Das
Kontrollmaterial sollte wie die Proben behandelt werden. Der erhaltene
Analysenwert muss innerhalb des Vertrauensbereiches liegen, der für
die Kontrolle in der chargenspezifischen Sollwertetabelle angegeben ist.
Liegt der gemessene Kontrollwert außerhalb des zulässigen Vertrauensbereiches, sollte das Reagenz überprüft werden.
Einschränkungen der Testdurchführung
Resultate dieses Tests sollten stets in Verbindung mit der Vorgeschichte
des Patienten, dem klinischen Bild und anderen Untersuchungsergebnissen interpretiert werden.
Erwartete Werte
70 - 150 % der Norm1.
Jedes Labor sollte seinen eigenen Referenzbereich festlegen.
Literatur
siehe Seite 1
Réactif von Willebrand
[VWF] [REAGENT]
Pour la détermination de l’activité du cofacteur de la ristocétine
Stabilité des échantillons :
6 heures
à +15/+25 °C
3 mois
à ≤ -20 °C
Méthode
Méthode d’agglutination
Diluer les échantillons plasmatiques en solution saline isotonique selon
le schéma suivant:
Domaine d’utilisation
Réactif in vitro pour le dosage de l’activité cofacteur de la ristocétine du
facteur von Willebrand dans le plasma humain, par agglutination des
plaquettes.
Intérêt diagnostique
Le Réactif permet le diagnostic de la maladie de von Willebrand et des
maladies avec modification de l’activité cofacteur de la ristocétine, comme
les lésions de l’endothélium vasculaire ou les inflammations. Il permet
également un dépistage pré-opératoire des tendances au saignement :
si la valeur trouvée est inférieure à 40 % de la normale, il faut s’attendre
à des complications hémorragiques pour une extraction dentaire ou une
intervention chirurgicale.
Principe de la méthode
En présence du facteur von Willebrand et de l’antibiotique ristocétine A,
il y a agglutination des plaquettes stabilisées.
Réactifs
Conditionnement
[VWF] [REAGENT], [REF] OUBD
5 x l 2 ml [REAGENT], von Willebrand-Reagenz
1 plaque en verre
Composition
Le Réactif von Willebrand contient des plaquettes humaines stabilisées,
de la ristocétine et de l’EDTA, sous forme lyophilisée.
Agent de conservation : azide de sodium (max. 0,5 g/l)
Mises en garde et précautions d’emploi
1. Réservé à un usage de diagnostic in vitro.
2. Contient de l’azite de sodium (< 0,1 %) comme conservateur. L’ azite
de sodium peut réagir avec les tuyaux d’évacuation en cuivre ou en
plomb et former des composés explosifs. L’évacuer conformément aux
réglementations locales.
3. Chaque donneur ou donneur d’unité a été testée avérée négative pour
le virus d’immunodéficience humaine (HIV) 1 et 2, virus de l’hépatite B
(HBV) et virus de l’hépatite C (HCV) en utilisant soit un test en conformité
avec la directive diagnostique in vitro en vigueur en Europe ou les tests
approuvés par le FDA. Comme aucun test connu ne peut offrir l’assurance
complète de l’absence des agents infectieux, tous les produits dérivés
humains devraient être manipulés avec les précautions appropriées.
Préparation des réactifs
Méthode d’agglutination :
Reconstituer le réactif avec le volume d’eau distillée indiqué sur l’étiquette
à +15/+25 °C et l’agiter (à l’aide d’un agitateur automatique par ex.) pour
l’homogénéiser. Il est immédiatement prêt à l’emploi.
L’agiter de nouveau avec précaution avant emploi.
Stabilités et conditions de conservation
Conserver le réactif dans son emballage fermé entre + 2 et + +8 °C. Ne
pas utiliser après la date d‘expiration mentionnée sur l‘étiquette.
Stabilité après reconstitution :
à +2/+8 °C
5 jours
à +15/+25 °C
8 heures
Autres réactifs et matériel nécessaires
Plasma de contrôle N, [REF] ORKE
Plasma de contrôle P, [REF] OUPZ
Solution saline isotonique
Échantillons à tester
Pour obtenir les plasmas de patients, mélanger soigneusement 1 volume
de solution de citrate de sodium à 0,11 mol/l avec 9 volumes de sang
veineux en évitant la formation de mousse. Centrifuger aussitôt pendant
au moins 10 min à au moins 1 500 x g, prélever le plasma surnageant et
le conserver à +15/+25 °C ou le congeler jusqu’au test.
OUBD G23 C0501 (876)
Édition Mai 2008
Échantillon
Solution saline
isotonique
Dilution
Titre
500 µl
500 µl
500 µl
250 µl
500 µl
250 µl
–
50 µl
500 µl
500 µl
250 µl
blanc
–
950 µl
1 : 20
20
500 µl
1 : 40
40
500 µl 250 µl 250 µl
1 : 80 1 : 120 1 : 160
80
120
160
Sur les 6 champs de la plaque en verre jointe au coffret, distribuer successivement :
50 µl de Dilution plasmatique ou de blanc, puis
50 µl de Réactif (préalablement bien agité),
et mélanger. Agiter ensuite doucement pendant 1 min (à l’aide d’un agitateur ou manuellement), puis laisser reposer pendant 1 min. En cas d’agitation manuelle, veiller à une bonne homogénéisation des mélanges !
Lire l’agglutination par rapport au blanc, sur un fond sombre.
Exploitation des résultats Le titre correspond à la dilution où l’on observe une agglutination nette par
rapport au blanc. Pour obtenir l’activité cofacteur de la ristocétine en %
de la normale, multiplier le titre obtenu par le seuil de sensibilité indiqué
sur l’étiquette du flacon. Si l’activité doit être déterminée dans un domaine
plus étroit (par ex. dans un domaine de décision de 50 %), choisir des
dilutions plus petites.
Contrôle de qualité interne
Domaine normal :
Plasma de contrôle N
Domaine thérapeutique : Plasma de contrôle P
Introduire deux contrôles (un dans le domaine normal et un dans le domaine thérapeutique) à chaque changement de flacon de Réactif. Les traiter
comme des échantillons de patients. Les valeurs doivent être trouvées à
l’intérieur de leur domaine de confiance respectif, indiqué dans le tableau
des valeurs théoriques de chaque contrôle. Si les valeurs sont trouvées
en dehors des domaines de confiance, vérifier le Réactif.
Limites du test
Les résultats de ce test doivent toujours être interprétés en rapport avec
les antécédents médicaux du patient, les signes cliniques et autres
constatations.
Valeurs attendues
70 - 150 % de la normale1.
Chaque laboratoire doit déterminer son propre domaine de référence.
Littérature
Voir page 1
Reagente von Willebrand
[VWF] [REAGENT]
Per la determinazione dell’attività del cofattore della Ristocetina
Settori di impiego e funzione
Reagenti per uso diagnostico in vitro per la determinazione dell’attività del
cofattore della Ristocetina del fattore von Willebrand nel plasma umano
mediante agglutinazione delle piastrine.
Significato diagnostico
Diagnosi della sindrome di von Willebrand e delle malattie che comportano
modificazioni del cofattore della Ristocetina, come lesioni dell’endotelio vascolare e infiammazioni. Screening preoperatorio della diatesi emorragica:
con valori inferiori al 40 % della norma sono possibili complicazioni nell’
emostasi dopo estrazioni dentarie ed inerventi chirurgici.
Principio del metodo
Le piastrine stabilizzate agglutinano in presenza del fattore von Willebrand
e dell’antibiotico Ristocetina A.
Reagenti
Contenuto della confezione
[VWF] [REAGENT], [REF] OUBD
5 x l 2 mL [REAGENT], Reagente von Willebrand
1 piastra in vetro
Composizione
Il reagente von Willebrand contiene piastrine umane stabilizzate, ristocetina
e EDTA. Il prodotto è liofilizzato.
Conservante: sodio azide (max. 0,5 g/L).
Avvertenze e precauzioni
1. Solo per uso diagnostico in vitro.
2. Contiene azoturo di sodio (< 0,1 %) come conservante. L’azoturo
di sodio può reagire con le tubazioni in rame o piombo nelle linee di
scarico formando composti esplosivi. Provvedere allo smaltimento in
modo appropriato e secondo le normative locali.
3. Ogni donatore o unità di sangue da donatore è stato analizzato e trovato
negativo per il virus dell’immunodeficienza umana (HIV) 1 e 2, per il
virus dell’epatite B (HBV) e per il virus dell’epatite C (HCV) utilizzando
test conformi alla Direttiva per Diagnostici In Vitro in ambito europeo
oppure test approvati dalla FDA. Poiché nessun test noto può garantire
la totale assenza di agenti infettivi, tutti i prodotti di derivazione umana
devono essere manipolati con adeguate precauzioni.
Preparazione dei reagenti
Metodo di agglutinazione:
Ricostituire il reagente di von Willebrand con la quantità di acqua distillata
indicata in etichetta e agitando (ad es. con un agitatore automatico) alla
temperatura di +15/+25 °C. Il reagente è subito pronto per l’uso.
Conservazione e validità
Riporre il reagente nella confezione chiusa a +2/+8 °C e utilizzare entro
la data di scadenza indicata sull‘etichetta.
Stabilità dopo ricostituzione:
a +2/+8 °C
5 giorni
a +15/+25 °C 8 ore
Altro materiale necessario ma non fornito
Plasma di controllo N, [REF] ORKE
Plasma di controllo P, [REF] OUPZ
Soluzione isotonica salina
Campioni in esame
Per separare il plasma, miscelare 1 parte di soluzione di citrato di sodio
0,11 mol/L e 9 parti di sangue venoso, evitando la formazione di schiuma.
Centrifugare subito a non meno di 1.500 x g per almeno 10 minuti; rimuovere il plasma sovranatante e conservarlo a +15/+25 °C fino al momento
del test, oppure congelarlo immediatamente.
Stabilità dei campioni:
6 ore
a +15/+25 °C
3 mesi
a ≤ -20 °C
OUBD G23 C0501 (876)
Edizione Maggio 2008
Metodo
Metodo di agglutinazione
Diluire il campione di plasma con soluzione isotonica salina secondo il
seguente schema:
500 µL 500 µL 500 µL 250 µL
Campione e
diluizione
Sol. isotonica
salina
Diluizione
Titolo
–
250 µL
Bianco
–
50 µL
500 µL 500 µL 500 µL 250 µL
950 µL 500 µL 500 µL 250 µL 250 µL
1 : 20 1 : 40 1 : 80 1 : 120 1 : 160
20
40
80
120
160
Su ognuno dei 6 settori del vetrino accluso, pipettare in successione
50 µL di Plasma diluito o bianco e
50 µL di Reagente (agitare energicamente prima dell’uso)
e mescolare. Quindi agitare lentamente per 1 minuto (con agitatore o
manualmente), quindi lasciare riposare 1 minuto. Nel caso in cui il vetrino venga agitato manualmente, assicurarsi che il preparato sia ben
miscelato!
Valutare l’agglutinazione contro uno sfondo scuro con riferimento al
bianco.
Valutazione
Il titolo dei campioni in esame è dato dalla diluizione nella quale è evidente
un’agglutinazione, rispetto al bianco. Il contenuto di cofattore ristocetina
in % della norma viene ottenuto moltiplicando il titolo dei campioni in
esame per il limite di identificazione indicato sull’etichetta del flacone.
Se il contenuto deve essere determinato entro limiti più ristretti (ad es.
intervallo decisionale del 50 %), gli intervalli tra le due diluizioni devono
essere ridotti al limite corrispondente.
Controllo di qualità interno
Intervallo normale:
Plasma di controllo N
Intervallo patologico:
Plasma di controllo P
Per ogni flacone di reagente devono essere misurati due controlli (uno
nell’intervallo normale ed uno in quello patologico). I controlli devono essere
trattati come i campioni. I risultati ottenuti devono ricadere entro l’intervallo
di accettabilità indicato nella tabella dei valori di riferimento specifici del
lotto, del relativo controllo. Se il valore misurato si trova al di fuori dell’intervallo di accettabilità, il reagente deve essere esaminato.
Limitazioni della esecuzione del test
I risultati di questo test devono essere sempre interpretati alla luce della
anamnesi del paziente, della presentazione clinica e valutando contestualmente l’esito di altri accertamenti.
Intervallo di riferimento
70 - 150 % della norma1.
Ogni laboratorio dovrebbe determinare il proprio ambito di riferimento.
Bibliografia
Vedi pagina 1
Reactivo von Willebrand
[VWF] [REAGENT]
Para la determinación de la actividad del cofactor de la ristocetina
Campos de aplicación y objetivos
Reactivo de diagnóstico in vitro para determinar la actividad del cofactor
ristocetina del factor de von Willebrand, en plasma humano mediante la
aglutinación de plaquetas .
Significado diagnóstico
El diagnóstico del síndrome de von Willebrand y de enfermedades con
cambios del cofactor ristocetina como en lesiones del endotelio vascular
e inflamaciones. Screening pre operatorios con tendencias a las hemorragias: para valores bajo el 40 % de la norma se debe contar con complicaciones en extracciones dentales y en intervenciones operativas.
Principio del método
Las plaquetas estabilizadas se aglutinan en presencia del factor vonWillebrand y del antibiótico ristocetina A.
Reactivos
Contenido del envase comercial
[VWF] [REAGENT], [REF] OUBD
5 x l 2 ml [REAGENT], Reactivo de von Willebrand
1 placa de vidrio
Composición
El reactivo von-Willebrand contiene plaquetas humanas estabilizadas,
ristocetina y EDTA en forma liofilizada.
Agente de conservación: azida sódica (máx. 0,5 g/l).
Advertencias y medidas de seguridad
1. Sólo para ser utilizado en diagnósticos in vitro.
2. Contiene azida de sodio (< 0,1 %) como conservante. La azida de sodio
puede reaccionar con tuberías de cobre o de plomo en los conductos
de drenaje y formar compuestos explosivos. Elimine este producto de
forma apropiada conforme a la normativa local.
3. Cada donante o unidad de donación, ha sido analizada para detectar
la presencia del virus de inmunodeficiencia humana 1 y 2 (VIH), virus
de la hepatitis B (VHB) y virus de la hepatitis C (VHC), utilizando las
técnicas aprobadas por la directiva de diagnósticos in-vitro de la UE o
FDA. Para la elaboración del producto se han utilizado únicamente las
donaciones con resultados negativos. Como no hay ninguna prueba
que ofrezca la completa seguridad de ausencia de agentes infecciosos,
todos los productos obtenidos a partir de material de origen humano,
deben ser manipulados con las debidas precauciones.
Preparación de reactivos
Método de aglutinación:
Resuspender el reactivo con la cantidad de agua destilada indicada en
la etiqueta, mediante agitación (por ej., con un agitador automático) y
a una temperatura entre +15 y +25 °C. El reactivo se puede utilizar de
inmediato.
Antes de usar mezclar una vez más cuidadosamente.
Estabilidad y almacenaje
El reactivo, en su envase original aún cerrado y conservado entre +2 y +8 °C,
es utilizable hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta.
Material a investigar
Para obtener el plasma mezclar cuidadosamente 1 parte de solución de
citrato de sodio (0,11 mol/l) con 9 partes de sangre venosa, evitando la formación de espuma. Centrifugar inmediatamente a aprox. 1.500 x g durante
10 min. Separar el plasma sobrenadante y mantenerlo hasta comenzar el
ensayo a una temperatura entre +15 y +25 °C o congelado.
Estabilidad de las muestras:
6 horas
entre +15 y +25 °C
3 meses
a ≤ -20 °C
Método
Método de aglutinación
Las muestras de plasma se van a diluir con solución salina isotónica de
acuerdo al siguiente esquema:
Muestra o
dilución
Solución
isotónica de
cloruro de sodio
Índices de
dilución
Titulo
500 µl
500 µl
500 µl
250 µl
–
50 µl
500 µl
500 µl
500 µl
250 µl
250 µl
950 µl
500 µl
500 µl
250 µl
250 µl
testigo
1 : 20
1 : 40
1 : 80 1 : 120 1 : 160
–
20
40
80
120
En los 6 campos de la placa de vidrio incluida pipetear seguidamente
en cada uno
50 µl de la Dilución de plasma o del blanco y
50 µl de Reactivo (antes agitar fuertemente)
y mezclar. Después agitar lentamente (mesa agitadora o usando la mano)
durante 1 min. y finalmente dejar 1 min. en reposo. Al agitar manualmente
observar que haya una buena mezcla del preparado!
Leer la aglutinación usando un trasfondo oscuro comparando con el
blanco.
Valoración
El título de la muestra es la etapa de dilución en la cual al comparar con el
blanco se ve una aglutinación definida. El contenido de factor ristocetina
en % del valor normal se obtiene por multiplicación del título de la muestra
con el limite de detección, que viene dado en la etiqueta del frasco. En
caso de que el contenido se tenga que determinar muy cerca del límite
(por ej., rango de decisión del 50 %) se deben escoger las etapas de
dilución más pequeñas.
Control de calidad interno
Rango normal:
Plasma control N
Rango patológico:
Plasma control P
Con cada envase del reactivo se deben medir también dos controles (por
ej., uno en el rango normal y uno en el rango patológico). El material de
control se debe tratar como las muestras. El valor obtenido en el análisis
debe estar dentro del rango de confianza, que viene dado para el control
en la Tabla de valores teóricos dependiente del lotes. Si el valor medido
se encuentra por fuera del rango de confianza permitido, se debe comprobar el reactivo.
Limitaciones del Procedimiento
Los resultados de esta prueba deberán interpretarse siempre de acuerdo con la historia clínica del paciente, la sintomatologia clínica y otras
observaciones.
Valores esperado
Estabilidad después de la reconstitución:
entre +2 y +8 °C
5 días
entre +15 y +25 °C
8 horas
70 - 150 % de la norma1.
Cada laboratorio debe determinar su propio rango de referencia.
Materiales adicionales necesarios
Plasma de control N, [REF] ORKE
Plasma P de control, [REF] OUPZ
Solución salina isotónica
Bibliografía
OUBD G23 C0501 (876)
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Edición Mayo 2008
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Reagente de Von Willebrand
[VWF] [REAGENT]
Metodologia
Método de aglutinação
A amostra de plasma é diluída com solução salina isotónica de acordo
com o seguinte esquema:
Para determinação da actividade do cofactor da Ristocetina
Campo de aplicação
Amostra ou
Diagnóstico in vitro para determinação da actividade do cofactor da
Ristocetina do factor de von Willebrand no plasma humano, através da
aglutinação de plaquetas.
Solução salina
isotónica
250 µl
950 µl
Grau de
Espaço em
branco
1 : 20
diluição
Título
–
20
Significado diagnóstico
Diagnóstico da síndrome de von Willebrand e das doenças com alterações
do cofactor da Ristocetina, tais como as lesões e inflamações dos vasos
endoteliais. Screening pré-operatório das tendências hemorrágicas: com
valores inferiores a 40 % da norma há que contar com complicações hemorrágicas, em caso de extracção de dentes ou intervenções operatórias.
Princípio do metodo
Em presença do factor de von Willebrand e do antibiótico Ristocetina A,
as plaquetas estabilizadas aglutinam-se.
Reagentes
Conteúdo da embalagem comercial
[VWF] [REAGENT], [REF] OUBD
5 x l 2 ml [REAGENT], von Willebrand-Reagenz
1 placa de vidro
Composição
O reagente de von Willebrand contém plaquetas humanas estabilizadas,
Ristocetina e EDTA em forma liofilizada.
Conservante: Azida de sódio (máx. 0,5 g/l).
Advertências e medidas de precaução
1. Só para uso diagnóstico in vitro.
2. Contém azida de sódio (< 0,1 %) como conservante. A azida de sódio
pode reagir com os tubos de cobre ou de chumbo das canalizações de
esgotos formando compostos explosivos. Elimine este produto de forma
correcta e de acordo com as regulamentações locais.
3. Cada doador ou unidade de doação foi testada para detectar a presença
de vírus de imunodeficiências humana 1 e 2 (VIH), vírus de hepatite B
(VHB) e vírus de hepatite C (VHC) de acordo com as técnicas aprovadas
pelas directivas de diagnóstico in-vitro da EU ou FDA. Para a elaboração
deste produto foram utilizadas unicamente as unidades com resultados
negativos. Como não existe nenhum teste que ofereça a garantia completa de ausência de agentes infecciosos, todos os materiais obtidos a
partir de material de origem humana deverão ser manipulados com as
devidas precauções.
Preparação dos reagentes
Método de aglutinação:
O reagente é resuspenso com a quantidade de água destilada indicada
no rótulo, à temperatura entre +15 e +25 °C, agitando-o (p. ex., com um
agitador automático) e fica imediatamente pronto para uso.
Antes de usar, agitar mais uma vez cuidadosamente.
Estabilidade e condições de conservação
Conserve o reagente por abrir a +2 - +8 °C e utilize até à data de validade
indicada no rótulo.
Estabilidade após reconstituição:
À temperatura entre +2 e +8 °C
5 dias
À temperatura entre +15 e +25 °C
8 horas
Outros materiais necessários
Plasma de controlo N, [REF] ORKE
Plasma de controlo P, [REF] OUPZ
Solução salina isotónica
Amostras
Para a obtenção do plasma, misturar cuidadosamente 1 parte da solução de citrato de sódio 0,11 mol/l com 9 partes de sangue venoso,
evitando a formação de espuma. Centrifugar imediatamente durante 10
minutos, pelo menos, a 1.500 x g, no mínimo, remover o plasma sobrenadante e conservar à temperatura entre +15 e +25 ºC ou congelado
até à execução do teste.
Estabilidade das amostras:
6 horas à temperatura entre +15 e +25 ºC
3 meses à temperatura de ≤ -20 ºC
OUBD G23 C0501 (876)
Edição Maio 2008
–
50 µl
500 µl
500 µl
500 µl
250 µl
500 µl
500 µl
500 µl
250 µl
500 µl
500 µl
250 µl
250 µl
1 : 40
40
1 : 80 1 : 120 1 : 160
80
120
160
Pipetar, sucessivamente, sobre cada um dos 6 campos da placa de
vidro anexa
50 µl de Diluição de plasma ou espaço em branco
50 µl de Reagente (agitar, antes, energicamente)
e misturar. Depois agitar lentamente durante 1 minuto (mesa vibratória
ou através de movimento manual) e, deixar repousar, seguidamente,
durante 1 minuto. Em caso de agitação manual, prestar atenção a que
as preparações de teste fiquem bem misturadas!
Proceder à leitura da aglutinação em frente de um fundo escuro, contra
o espaço vazio.
Interpretação
O título da amostra é constituído pelo grau de diluição em que se pode
observar uma aglutinação nítida, por comparação com o espaço vazio.
O teor do factor de Ristocetina expresso em % da norma, obtém-se multiplicando o título da amostra pelo limite de detecção indicado no rótulo
do frasco. Se o teor tiver de ser definido com limites mais restritos (p. ex.,
no intervalo de decisão de 50 %), deverão ser seleccionados, respectivamente, passos de diluição menores.
Controlo de qualidade interno
Intervalo normal: plasma de controlo N
Intervalo patológico: plasma de controlo P
Para cada carga de reagente deverão ser medidos dois controlos (um no
intervalo normal e o outro no intervalo patológico). O material de controlo
deverá ser tratado como a amostra.
O valor de análise obtido deverá situar-se dentro do intervalo de confiança
indicado para o controlo na tabela de valores nominais específicos do lote.
Se o valor de controlo medido se situar fora do intervalo de confiança
permitido, o reagente deverá ser controlado.
Limitações do procedimento
Os resultados deste teste devem sempre ser interpretados em conjunto
com o histórico médico do doente, estado clínico e outros dados de
interesse.
Valores expectáveis
70 - 150 % da norma1.
Cada laboratório deverá determinar o seu intervalo de referência
próprio.
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