Sistema LC/MS Agilent 6490 Triplo
Quadrupolo com
tecnologia iFunnel
Desempenho quantitativo ultra sensível
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Desempenho quantitativo sem comparações para
as análises mais exigentes
Sistema LC/MS Agilent 6490 Triplo Quadrupolo incorpora a
tecnologia iFunnel, dando novos níveis de sensibilidade às
analises quantitativas mais exigentes em aplicações farmacêuticas, clínicas, ambientais e de segurança alimentar. O
poder quantitativo do 6490 é aprimorado por uma variação
dinâmica linear estendida.
O 6490 Triplo Quadrupolo permite:
O novo sistema LC/MS 6490 triplo quadrupolo com
tecnologia iFunnel – desempenho quantitativo sem
comparação
• Aumento de 10 X na sensibilidade
• Até seis ordens variação dinâmica linear
• Alto desempenho e sólida operação
• Sensibilidade de zeptomol para as aplicações mais
exigentes
O 6490 triplo quadrupolo tem um design compacto de bancada, alcançado através do uso de cela de colisão curva. A
cela recentemente projetada também ajuda na identificação
de ruído de fundo, melhorando o valor geral sinal-ruído do
sistema. A eletrônica de alta frequência permite taxas de
varredura mais velozes para janelas mais estreitas de isolamento de massas.
O sistema iFunnel
Figura 1. Componentes da tecnologia iFunnel da Agilent: Agilent Jet Stream, capilar de amostragem de seis furos e funil de íons de estágio duplo
2
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Tecnologia avançada iFunnel
A tecnologia iFunnel com vaso capilar de seis furos recolhe
seis vezes mais gás carregado de íons que um vaso capilar de
furo individual, e o tempo de residência mais curto dos íons
no vaso capilar de seis furos permite ganhos ainda maiores
na intensidade do sinal. Ao comparar o 6490 Triplo Quadrupolo com o 6460 Triplo Quadrupolo (Figura 2), o 6490 Triplo
Quadrupolo com tecnologia iFunnel demonstra um ganho de
sete vezes na intensidade do sinal para massas de até 900
m/z e um ganho de até cinco vezes para massas maiores.
O LC/MS 6490 Triplo Quadrupolo alcança sua sensibilidade usando a tecnologia iFunnel, uma combinação de três inovações fundamentais:
• Tecnologia Jet Stream da Agilent: um pulverizador micro
usinado rodeia as gotículas do ESI com um recobrimento
de gás super aquecido, para dessolvatar e concentrar íons
perto da entrada MS, e assim obter amostras mais eficazes
Os aumentos na intensidade do sinal são ainda mais pronunciados para íons negativos como se mostra na Figura 3. O
ganho médio na intensidade do sinal foi de 10 vezes ao longo
de toda a variação de massas do 6490 Triplo Quadrupolo.
• Capilar de amostragem de seis furos: 6 furos independentes, e paralelos, permitem que uma fração muito maior
de íons formados na pena da pulverização de ESI ingresse
na óptica de íons do espectrômetro de massa
• Exclusivo funil de íons de estágio duplo: remoção eficiente de
grandes volumes de gás e transferência de íons à óptica Q1.
Um diagrama desta tecnologia se mostra na Figura 1.
6490
6490
7x
11x
7x
14x
7x
7x
5x
10x
5x
10x
6460
6460
622
118
922
322
1034
302
1222
113
200
400
600
800
1000
1200
200
1400
400
600
800
1000
1200
1400
m/z
m/z
Figura 2. Intensidades de sinal para padrões de calibragem em modo
ESI positivo do 6490 (acima, verde) e 6460 (abaixo, preto).
Figura 3. Intensidades de íons para íons de calibragem negativo do
6490 (acima, verde) e o 6460 (preto, abaixo).
3
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Sensibilidade de zeptomol e variação dinâmica
linear sem comparações
x101
O 6490 Triplo Quadrupolo com tecnologia iFunnel apresenta
uma sensibilidade pioneira. O primeiro exemplo de sensibilidade de subatomol se mostra na Figura 4 para uma injeção
de 200 zepto-4,5 mols de verapamil em coluna.
4,5
4.5
Resposta
Response
O 6490 Triplo Quadrupolo apresenta novos níveis de
sensibilidade e também uma variação dinâmica linear sem
comparações. É o primeiro sistema LC/MS triplo quadrupolo
a oferecer seis ordens de variação dinâmica linear como se
mostra na Figura 5. O excelente fator de correlação (valor R2
= 0,997) descreve a ampla variação de resposta linear.
4,4
4.4
4.3
4,2
4.2
0,1
0.1
0,2
0.2
0,3
0.3
0,4
0.4
0,5
0.5
0,6
0.6
0,7
0.7
0.8
0.9
Tempo
de aquisição
(minutos)
Acquisition
Time (min)
Figura 4. Cromatograma de íons de verapamil (transição MRM
455.3 → 164.9) para 100 atogramas (200 zeptomoles) injetados
em coluna usando um 6490 Triplo Quadrupolo SRM (azul). O
sinal vermelho mostra uma injeção em branco.
x106
7
6
Linear linear
fit
Ajuste
0.9976
RR22== 0.9976
Resposta
Response
5
4
3
2
1
0
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
Concentração (ng/mL)
(ng/ml)
Concentration
Figura 5. Resposta linear de verapamil a partir de 100 atogramas até 100 picogramas injetadas em-coluna.
4
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Melhoras significativas de desempenho para a
determinação de drogas em plasma
Tipicamente, são usados procedimentos de extração de fase
sólida (SPE), e de extração líquido-líquido, para concentrar
o elemento analisado e para eliminar os efeitos de matriz. A
extrema sensibilidade do 6490 elimina a necessidade do SPE
e LLE, permitindo a análise direta do plasma pulverizado após
uma diluição de 4 vezes em água. O método de diluir-disparar
utilizando o instrumento 6490 possui uma sensibilidade mais
do que adequada para o nível de calibragem mais baixo a 5
pg/ml, como se mostra na Figura 6. Isto representa somente
2,5 fentogramas injetados em-coluna, com um limite inferior
de detecção de só 1 fentograma.
O rendimento do 6490 Triplo Quadrupolo para a determinação
de drogas em plasma mostra melhoras significativas do
desempenho. A Figura 6 mostra fluticasona, um esteróide
sintético da família de drogas dos glicocorticóides, usados
para o tratamento de condições alérgicas.
Quando usada como inalador nasal ou spray, a medicação vai
diretamente para o revestimento epitelial do nariz, e muito
pouco é absorvido no resto do organismo. Devido a seus
níveis sistêmicos baixos, um ensaio LC/MS de alta sensibilidade é necessário para determinar as concentrações de
fluticasona no plasma humano.
x101
5,3
5.3
5.2
5,2
5,1
5.1
Abundância
Abundance
5
4.9
4,9
4,8
4.8
4,7
4.7
4.6
4,6
4.5
4,5
4.4
4,4
4,3
4.3
4,2
4.2
0,8
0.8
1
1,2
1.2
1,4
1.4
1,6
1.6
1,8
1.8
2
2,2
2.2
2,4
2.4
Tempo
de aquisição
[min]
Acquisition
Time [min]
Figura 6. Cromatograma de íons de propionato de fluticasona (transição MRM 501.2 → 293.1) de 2.5 fentogramas injetados em-coluna usando o instrumento 6490.
5
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Extraordinária solidez de ensaios de amostras em
matrizes biológicas complexas
A sensibilidade é importante – a robustez é crítica. A Figura 7
mostra a robustez do 6490 para 3000 injeções de verapamil
(20 fentogramas) em plasma de proteína precipitada para
mais se seis dias de operação contínua. Os dados mostram
uma resposta pico coerente com um desvio padrão relativo
para a área pico de menos de 6%. Normalmente, a estabilidade da área pico em plasma se mostra para quantidades
de picogramas injetadas em-coluna, porém o exemplo é em
níveis que são cem vezes menores ou mais.
1500
Área RSD < 5.9%
Resposta
1200
900
600
300
0
500
1,000
1,500
2,000
2,500
3,000
# Injeções
Figura 7. A resposta pico do 6490 Triplo Quadrupolo para 3000 injeções consecutivas de verapamil em
plasma (20 fentogramas injetados em-coluna).
6
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Quantificação de peptídeos superior com a
tecnologia iFunnel
Colunas padrão oferecem uma precisão maior de método
e rendimento total comparado com os sistemas nanoLC.
Os métodos de LC convencionais são preferíveis quando
milhares de amostras de plasma devem ser analisadas em
estudos rigorosos de validação do biomarcador. Para obter
resultados ultra sensíveis a partir de amostras limitadas, o
HPLC-Chip/MS com 6490 Triplo Quadrupolo oferece uma
alternativa forte ao LC/MS de nanofluxo para a quantificação
de peptídeos.
A quantificação de peptídeos também se beneficia do impacto
da tecnologia iFunnel. Por exemplo, um peptídeo de nove
resíduos (IEDIVTSEK) mostra uma linearidade excelente na
Figura 8 para o padrão de nível mais baixo. O volume injetado
numa coluna i.d. de 2 mm padrão na Figura 8 foi somente 28
atomoles. A forte intensidade do sinal e baixo ruído permitiu
um limite de detecção notável de aproximadamente 1 atomol
numa coluna padrão de 2 mm. A resposta foi linear durante
a variação da calibragem no estudo de 28 até 2,830 atomoles
e o coeficiente de correlação de 0,997 confirmou um bom
ajuste linear.
O novo espectrômetro de massas 6490 Triplo Quadrupolo com
tecnologia iFunnel redefine a sensibilidade, solidez e variação
dinâmica para as aplicações quantitativas mais exigentes. A
eficiência aprimorada de amostragem de íons é alcançada
com a combinação do Agilent Jet Stream, vaso capilar de seis
furos e o funil de íons de estágio duplo.
Abundância
28 amol em-coluna
Quantificador 476,2
476.2 → 734,3
734.3
12,5
12.5
13
13,5
13.5
14
14,5
14.5
15
15,5
15.5
Tempo de aquisição (minutos)
Figura 8. Cromatograma de íons extraído usando a transição de 476.2
para 734.3 m/z para 28 atomoles de peptídeo injetados em-coluna com
um sistema convencional LC/MS a 400 µl/min.
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Para obter mais informações
Saiba mais:
www.agilent.com/chem/qqq
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ou por danos incidentais ou consequenciais em relação com o fornecimento, desempenho ou uso deste material.
© Agilent Technologies, Inc. 2010
Publicado nos EUA, em 30.08.10
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