54º Congresso Brasileiro de Genética
Resumos do 54º Congresso Brasileiro de Genética • 16 a 19 de setembro de 2008
Bahia Othon Palace Hotel • Salvador • BA • Brasil
www.sbg.org.br - ISBN 978-85-89109-06-2
Avaliação da estabilidade citogenética
de linhagens de células tronco
da polpa dental in vitro
Kulikowski, LD1; Duailibi, MT2; Duailibi, SE2; Vacanti, JP3; Yelick, PC4; Smith, MAC1; Melaragno, MI1; Lipay, MVN1
1
Universidade Federal of São Paulo, Departamento of Morfologia e Genetica, São Paulo
Universidade Federal de São Paulo, Departmento de Cirurgia Plastica, UNIFESP-CINTERGEN, Centro Interdisciplinar de Terapia Genica, São Paulo
4
Tufts University, Department of Oral and Maxillofacial Pathology, Boston, U.S.A
3
Laboratory for Tissue Engineering and Organ Fabrication, Massachusetts General Hospital and Department of Surgery, and Harvard Medical School,
Boston, Massachusetts, U.S.A
[email protected]
2
Palavras-chave: células-tronco, estabilidade genômica, aberração cromossômica, FISH, cariótipo
Introdução: As células-tronco adultas representam uma importante fonte de tipos celulares para uso em terapias
regenerativas. Por serem facilmente obtidas, podem ser isoladas e expandidas in vitro, sem maiores problemas éticos.
Contudo, sua aplicação em humanos ainda requer muitas investigações, destacando-se a caracterização citogenética
das células progenitoras e de suas linhagens, fator capaz de determinar a viabilidade e a segurança da reconstrução
funcional de tecidos e órgãos. O alto potencial replicativo e a necessidade de expansão in vitro dessas células podem
representar um risco para a estabilidade citogenética (Hoffman e Carpenter, 2005). Objetivo: Investigar a estabilidade
citogenética de linhagens de célula tronco obtidas de polpa dental, utilizando bandamento G e hibridação in situ por
fluorescência (FISH). Material e Métodos: As células foram obtidas da polpa dental do terceiro molar de voluntários
hígidos, segundo as normas estabelecidas pelo Comitê de Ética (CONEP – 13083). O material da polpa foi separado
da coroa e digerido. As células foram isoladas e cultivadas sem suplementação, até a confluência. Em seguida, uma
parte das células cultivadas foi utilizada para a análise cariotípica, acrescentando-se 0,1µg/mL de colchicina (Kariomax
-Colcemid) ao meio de cultura,com um período de incubação de 4h. As lâminas para análise foram confeccionadas
por bandamento G, em resolução de 550 bandas (Seabright, 1971). Um total de 200 intérfases foram analisadas pela
técnica de FISH, utilizando-se sondas centroméricas (Vysis, Chicago) para o cromossomo X e para o cromossomo
10. Resultados: A análise por bandamento G revelou células com diferentes perdas autossômicas, que incluíam os
cromossomos 2, 3, 5, 6, 7, 8, 9 e o 16, células com cromossomos em anel, e células poliplóides. A análise por FISH
com a sonda centromérica para o cromossomo X e para o cromossomo 10 detectou a presença de sinais em quantidade
normal para a maioria das células. Discussão e conclusão: Células portadoras de cromossomos normais em número
e estrutura são essenciais para a manutenção da estabilidade genômica. Nossos resultados indicam que as linhagens
estudadas exibem, em sua maioria, cariótipo heterogêneo e anormal, evidenciando instabilidade cromossômica. A
literatura mostra que, para células diferenciadas, o cromossomo X é mais susceptível do que os autossomos a perdas, in
vitro (Roschke et al, 2002). Todavia, essa susceptibilidade não se confirma no presente estudo. Os resultados destacam
a necessidade da realização de análise citogenética antes da utilização dessas células para fins terapêuticos.
Apoio: CAPES, FAPESP.
Os resultados foram analisados em microscópio de fluorescência (Axiosplan 2 -Zeiss, Göttingen, Germany) e as
imagens foram registradas utilizando o programa ISIS (MetaSystems, Altlussheim, Germany).
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