Ensaios de Pureza
- Impurezas Orgânicas
- Impurezas Inorgânicas
Ensaios de Pureza
Pureza = qualidade do que é puro
Termos farmacêuticos : Impureza é definida como toda substância
diferente ao fármaco / excipiente, originada de seu processo de
obtenção, acondicionamento, conservação ou manipulação.
Fonte de impurezas: Processo de obtenção (solventes utilizados,
purificação), instabilidade química do fármaco, recipientes
utilizados, contaminação atmosférica.
Farmacopéias: Fornecem limites máximo de impurezas , sendo
específico para cada MP
Ensaios de Pureza
Impurezas Orgânicas – São relativamente específicas/
particulares para cada produto / insumo farmacêutico. Cada
monografia descreve a metodologia a ser aplicada na determinação
de impurezas e seus limites.
Intrínsecas
Formas de
contaminação
Extrínsecas
Intrínsecas: Decorrente do processo de decomposição. Por ex. Ác.
salicílico – Ác. Acetil salicílico
Extrínsecas: decorrem de contaminação ambiente, falhas no
processo , estando associadas aos processos de obtenção dos
produtos. Ex. processo de purificação
Ensaios de Pureza
Metodologias empregadas na determinação de impurezas
orgânicas:
Métodos Instrumentais : Os métodos de separação são os mais
aplicados.
- HPLC / CLAE
- CCD
Métodos eletroanalíticos:
- Potenciometria
- Condutometria
Ensaios de Pureza
Metodologias empregadas na determinação de impurezas
orgânicas:
HPLC / CLAE :
- A pureza da amostra será determinada em função do perfil do
cromatograma.
- Observa-se a quantidade de picos e também sua intensidade
- Quando as impurezas são frequentes e bem estabelecidas,
pode-se utilizar padrões específicos e quantificá-las.
Ensaios de Pureza
Lamivudina
Figure 1: HPLC chromatogram of lamivudine and its related impurities
Monographs for antiretrovirals
Lamivudina: Fármaco indicado para o tratamento de infecção por HIV, tipos 1 e 2.
Ensaios de Pureza
Fig.1 show the UV and MS chromatograms of Erythromycin A oxime
(Ery-AO) which is a macrolide antibiotic produced by a strain of bacteria
known as Saccaropolyspora erythraea. Some impurities are indicated.
FIGURA 2: Cromatogramas obtidos em análises de piridoxina em geléia real por
CLAE. A= padrão de piridoxina (VITAMINA B6) e B= amostra de geléia real.
Utilizou-se a metodologia de cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE), em
sistema isocrático composto por bomba, auto-injetor e detector de fluorescência
(padrão piridoxina Sigma P-5669).
Ensaios de Pureza
Ensaios de Pureza
Metodologias empregadas na determinação de impurezas
orgânicas:
CCD ( Cromatografia em camada Delgada)
-Técnica simples e de baixo custo
- Pode ser utilizada na avaliação de pureza de uma determinada
amostra.
- Estima-se o grau de pureza em função do número de manchas
na placa e sua intensidade.
Ensaios de Pureza
Metodologias empregadas na determinação de impurezas
orgânicas:
Outros métodos utilizados:
- Faixa de Fusão (Ponto de Fusão)
- Rotação Óptica
- Determinação de pH
Observação: Métodos descritos em ensaios de identificação.
Ensaios de Pureza
Metodologias empregadas na determinação de impurezas
Inorgânicas:
Podem ser :
a) Quantitativos
b) Semi-quantitativos
Contaminantes inorgânicos mais comuns: Água, íons metálicos,
cloretos, sulfatos e outros ânions.
Ensaios de Pureza
Metodologias empregadas na determinação de impurezas
Inorgânicas:
Métodos Quantitativos
-
São essencialmente gravimétricos ( determinação da massa
/separação e pesagem)
Exceções: Método de Karl fisher (volumétrico)
1)
2)
3)
4)
5)
6)
Teor de Umidade (Aquametria)
Teor de substâncias voláteis e não voláteis
Determinação de substâncias solúveis e insolúveis totais
Teor de cinzas
Teor de cinzas sulfatadas
Teor de cinzas insolúveis e ácido clorídrico
Ensaios de Pureza
Metodologias empregadas na determinação de impurezas
Inorgânicas:
Métodos Semiquantitativos
- Baseados em reações químicas, as quais produzem turbidez
ou mudança de cor visualmente detectáveis.
1)
2)
3)
4)
5)
6)
Ensaio limite para Cloretos
Ensaio limite para Sulfatos
Ensaio limite para amônia
Ensaio limite para Ferro
Ensaio limite para Metais pesados
Ensaio limite para Arsênio
Ensaios de Pureza
Metodologias empregadas na determinação de impurezas
Inorgânicas:
Métodos Quantitativos
1) Teor de umidade ( Aquametria)
a) Métodos Físicos – Método Gravimétrico
b) Balança semi-analítica com Infravermelho
c) Métodos Químicos – Karl Fisher (Volumétrico)
Ensaios de Pureza
Metodologias empregadas na determinação de impurezas
Inorgânicas:
Métodos Quantitativos
1) Teor de umidade - Método Gravimétrico
- Determina a porcentagem de água na amostra após a secagem
da amostra em determinadas condições de T e t, conforme
monografia.
- Utilizar pesa filtro de fundo chato, previamente dessecado e
tarado. Pesar aprox. 1g – 2g da amostra.
- Secagem do Fármaco até peso constante.
- Secagem em estufa (usual 105ºC – 2horas) : Produtos
termoestáveis.
- Produtos termolábeis: secagem em T mais baixas, abaixo do
Ponto de Fusão.
- Resfriar em dessecador
-A porcentagem de água na amostra é determinada pela
pesagem da amostra antes e após a secagem.
% Umidade : Pa – Ps / Pa
Ps: Peso amostra seca
Pa: Pesa – filtro com amostra
Dessecador
É usado para guardar
substâncias em ambiente com
pouco teor de umidade
Pesa filtro com fundo
chato
- Pode -se também determinar a umidade através de balança
acoplada com secador Infra vermelho
Balança semi-analítica acoplada a secador por infra-vermelho permitem
obter medições de umidade de alta precisão.
Ensaios de Pureza
Metodologias empregadas na determinação de impurezas
Inorgânicas:
1) Teor de umidade - Karl Fisher (Método volumétrico)
- Baseia-se na reação quantitativa entre água e reagente Karl
Fisher (iodo+ dióxido de enxofre+ piridina+ metanol).
- Reação de Titulação ( O I2 é reduzido a I )
- Ponto final da reação: quando acaba toda a água da amostra, a
reação cessa e o ponto final pode ser visto visualmente ( mudança
de tom amarelo para amarronzado).
Teor de umidade: V.T / TE
V:Volume do titulante
T: Titulo do reagente de Karl Fisher
TE: quantidade da amostra
Figura: Aparelho de Karl-Fischer
Aparelhos de Karl-Fischer automáticos determinam diretamente
a porcentagem de água presente na amostra.
Ensaios de Pureza
Metodologias empregadas na determinação de impurezas
Inorgânicas:
2) Teor de substâncias voláteis e não voláteis
- Mesmo princípio gravimétrico de aquametria, de acordo com a
monografia.
3) Teor de substâncias solúveis e insolúveis
- Pesar a amostra e diluir em solvente conforme monografia.
- Filtrar em funil de vidro sinterizado previamente tarado
- Levar o funil à estufa e secar até peso constante.
% solúveis: Pa – Pp/ Pa x 100
% Insolúveis: Pp / Pax100
Pp: Peso precipitado seco Pa: Peso amostra
Funil de vidro que possui uma placa de vidro sinterizado, capaz de
reter as partículas
Ensaios de Pureza
Metodologias empregadas na determinação de impurezas
Inorgânicas:
4) Teor de cinzas
- Determina resíduos de sólidos inorgânicos metálicos
- Pesar 3g de amostra
- Incinerar a 450º C até peso constante (Mufla)
Ensaios de Pureza
Metodologias empregadas na determinação de impurezas
Inorgânicas:
5) Teor de cinzas sulfatadas
- Determina resíduos de sólidos inorgânicos metálicos
- Adiciona-se H2SO4
- Pesar 1g de amostra e Adicionar H2SO4 SR ( solução reagente)
- Aquecer até a carbonização e desprendimento de gases
Incinerar a 800ºC, resfriar , add 1 mL de H2SO4 SR, carbonizar e
reincinerar .
- Resfriar, adicionar carbonato de amônia e incinerar até peso cte.
Ensaios de Pureza
Metodologias empregadas na determinação de impurezas
Inorgânicas:
6) Teor de cinzas insolúveis e Ácido clorídrico
- Determina resíduos de sólidos inorgânicos metálicos
- Utiliza-se Ácido clorídrico (Elimina interferência de sais de metais
de sódio e potássio ) e a cinza obtida no processo anterior.
- Aquecer em 25 mL de HCl
- Lavar a quente e incinerar a 500 C até peso cte.
% = ( Pr – Pa) x 100, onde Pa = peso amostra e P r :peso do
resíduo
Ensaios de Pureza
Metodologias empregadas na determinação de impurezas
Inorgânicas:
Métodos Semiquantitativos
1) Ensaios limites para Cloretos
- Visa determinar se a amostra ultrapassa um valor máximo de
íons Cloreto.
- Reação com Nitrato de Prata .
Cl + AgNO3
AgCl + NO 3
-Comparação com a turbidez observada em tubo de Nessler.
( Tubo com amostra e tudo com concentração padrão de cloreto)
Observação : Esquema demonstrativo. Lembrando que
para Ensaio de Cloretos é verificada a TURBIDEZ.
Padrão
Amostra
Ensaios de Pureza
Metodologias empregadas na determinação de impurezas
Inorgânicas:
Métodos Semiquantitativos
2) Ensaios limites para Sulfatos
- Visa determinar se a amostra ultrapassa um valor máximo de
íons Sulfatos
- Reação com Cloreto de Bário em meio clorídrico.
SO4 + Ba Cl2
Ba SO4 + 2 Cl
-Comparação com a turbidez observada em tubo de Nessler.
( Tubo com amostra e tudo com concentração padrão de cloreto)
Ensaios de Pureza
Metodologias empregadas na determinação de impurezas
Inorgânicas:
Métodos Semiquantitativos
3) Ensaio limite para Amônia
- Visa determinar se a amostra ultrapassa um valor máximo de
Amônia na amostra.
- Reação de coloração. Compara-se a cor do tubo com
concentração padrão de amônia com o tubo contendo a amostra.
Ensaios de Pureza
Metodologias empregadas na determinação de impurezas
Inorgânicas:
Métodos Semiquantitativos
4) Ensaio limite para Ferro
- Visa determinar se a amostra ultrapassa um valor máximo de
Ferro na amostra.
- Baseia-se em reações de complexação com ácido glicólico ou
Tiocianato de Potássio.
- Reação de coloração.
- A cor do tubo contendo a amostra não deve ser mais forte que a
do padrão.
Ensaios de Pureza
Metodologias empregadas na determinação de impurezas
Inorgânicas:
Métodos Semiquantitativos
5) Ensaio limite para Metais pesados
- Visa determinar se a amostra ultrapassa um valor máximo de
metais pesados na amostra – Pb
- Baseia-se em reações colorimétricas.
- Reação colorimétrica entre impurezas metálicas e sulfato.
- A cor do tubo contendo a amostra não deve ser mais forte que a
do padrão.
Ensaios de Pureza
Metodologias empregadas na determinação de impurezas
Inorgânicas:
Métodos Semiquantitativos
5) Ensaio limite para Arsênio
- Conversão de arsênio em Arsina ( AsH3)
- Compara-se visualmente a cor obtida pela amostra com a cor
do padrão
ou realiza-se leitura em espectrofotômetro ou
colorímetro.