Transformação genética com Agrobacterium rhizogenes para
obtenção de linhagens transformadas e caracterização destas
linhagens
Joel Antonio Cordeiro de Abreu
PIBITI/CNPq
Eliane Cristina Gruszka Vendruscolo
Introdução e Objetivos
Brugmansia suaveolens é uma planta pertencente
á família das solonacea que produz alcalóides,
como a hiociamina e a escopolamina, de grande
importância na indústria farmacêutica. A produção
desses metabólitos ocorre na raiz, e é grande o
interesse de seu cultivo em biofábricas. O objetivo
deste trabalho foi estabelecer um protocolo e
avaliar o crescimento radicular in vitro, visando o
aumento da produção desses alcalóides.
Métodos
Sementes de B. suaveolens sem tegumento
passaram por processo de assepsia e em seguida
foram acondicionadas em meio B5 sólido para
germinação. Após 60 dias, 0,2g de raízes foram
coletadas e acondicionadas em 24 erlenmeyers
contendo 30 mL de meio B5 líquido cada um,
suplementado com CaCl2 0,1 M; e em meio de
cultivo B5, o qual foi considerado o tratamento
controle. A massa fresca foi avaliada com 7,14 e 21
dias, cada tratamento teve 8 repetições
Referência bibliográfica
ROBINS R. J., et al. Studies on the biosynthesiof tropane alkaloids
in Datura stramonium L. transformed root cultures. 1. The kinetics
of alkaloid production and the influence of feeding intermediat
e metabolites. Planta, 183 : 185 – 195, 1991
Resultados
Os resultados indicaram uma redução na massa das
raízes cultivadas nos diferentes períodos avaliados. A
média de massa fresca no tratamento controle foi de
0,184g após 7 dias, 0,153g após 14 dias e 0,156g para 21
dias, entretanto, as diferenças não foram significativas
estatisticamente entre os períodos avaliados. A média de
massa fresca no tratamento com CaCl2 0,1M foi de 0,123g
após 7 dias, 0,144g após 14 dias e 0,137g para 21 dias,
entretanto, as diferenças não foram significativas
estatisticamente entre os períodos avaliados. Quando
comparado ao controle, apenas no período de 7 dias as
amostras elicitadas com CaCl2 0,1 M apresentaram-se
estatisticamente menores. As amostras foram congeladas
em freezer para posterior avaliação quantitativa da
concentração de hiosciamina e escopolamina por métodos
cromatográficos.
Conclusões
Os resultados indicaram que os tratamentos com CaCl2
0,1M não foram capazes de induzir o crescimento radicular
de Brugmansia suaveolens. Deverão ser extraídos
escopolamina e hiosciamina das raízes elicitadas e
submetidos a cromatografia para quantificar esses
metabólitos. Novos elicitores deverão ser testados.