Espectrofotômetro
Faculdade de Biomedicina
Disciplina de Instrumentação Laboratorial
Exemplo de laudo de glicemia:
Glicemia
190 mg/dL
valor de referência
70 a 99 mg/dL
Onda de luz
T = transmitância
Po = quantidade de luz monocromática incidente
A = Absorbância
P = quantidade de luz monocromática transmitida
Lei de Lambert-Beer
Componentes do
Espectrofotômetro
• Fonte de luz estável
• Filtro que permite a passagem de um
comprimento de onda específico
• Cubeta de leitura da amostra
• Fotodetector
• Processador
• Tela de leitura das medidas
Componentes
Fonte de luz
• Tungstênio:
• Deutério:
• Xenônio:
fornece luz no espectro visível
fornece luz na faixa de UV.
forncece luz no espectro visível e UV.
Filtros
Pré-amostra
O filtro está posicionado entre a fonte de luz a e
amostra.
Pós-amostra
O filtro ou prisma está posicionado entre a amostra e o
fotodetector.
Prisma
Cubetas de leitura
Devem ser de material transparente para os
comprimentos de onda utilizados.
Para o espectro UV (que lê comprimentos de onda <
350 nm) as cubetas devem ser feitas de sílica ou
quartzo. Para os comprimentos de ondas visíveis
pode ser de material plástico ou vidro.
Normalmente tem 1 cm de largura (path length).
Devem ser muito bem limpas e secas após o uso.
Cubetas para leitura
Cubetas
Fotodetector
• Fotomultiplicador
Fótons da onda eletromagnética do comprimento de onda
estudado excitam os elétrons da última camada dos
metais presentes no fotomultiplicador, criando uma
corrente elétrica que pode ser amplificada e quantificada.
Fotomultiplicador
Espetrofotômetro
Espectrofotômetro
Espectrofotômetro cobas modular
(Roche)
GeneQuant para amostras de
DNA e RNA
Espectrofotômetro Nanodrop para
amostras de DNA e RNA
Gráfico de uma análise
espectrofotométrica de DNA
Quantificação de DNA ou
RNA
Por definição, uma unidade de absorbância a 260 nm
equivale a uma concentração de 50 ug de DNA por mL.
Para RNA uma unidade de absorbância em 260nm
equivale a uma concentração de 40 ug/mL