Biofísica
Espectroscopia de proteínas
Prof. Dr. Walter Filgueira de Azevedo Jr.
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BIOFÍSICA
Resumo
Lei de Beer-Lambert
Absorção de proteínas em água
Ponte dissulfeto
Absorção da Lisozima
Absorção da Concanavalina A
Absorção da Papaína
Referências
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BIOFÍSICA
Lei de Beer-Lambert
I0
It
Amostra
L
I0 : Intensidade incidente
It : Intensidade detectada
L : Caminho ótico
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A = log I0 =  c L
It
BIOFÍSICA
Lei de Beer-Lambert
I0
It
Amostra
L
Coeficiente de extinção
Molar (M-1cm-1)
A = log I0 =  c L
It
Absorbância
Caminho ótico(cm)
Concentração(M)
Lei de Beer-Lambert
Coeficiente de extinção
Molar (M-1cm-1)
A=cL
Absorbância
Caminho ótico(cm)
Concentração(M)
Obs: O coeficiente de extinção molar é também conhecido como coeficiente de
Absorção molar.
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BIOFÍSICA
Coeficiente de extinção molar
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BIOFÍSICA
Coeficiente de extinção molar
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BIOFÍSICA
Absorção de proteínas em água
(280nm) = 5500.NTrp +1490.NTyr + 125.NCis
 (280nm): Coeficiente de extinção molar (M-1cm-1);
NTrp: Número de resíduos de triptofano presentes na proteína;
NTyr: Número de resíduos de tirosina presentes na proteína;
NCis: Número de pontes dissulfeto presentes na proteína.
Fonte: Pace et al., Protein Science (1995), 4:2411-2423
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BIOFÍSICA
Ponte dissulfeto
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Absorção da Lisozima
KVFGRCELAAAMKRHGLNNYRGYSLGNWVCAAKFESNFNTQATNRNTDGS
TDYGILQINS RWWCNDGRTPGSRNLCNIPCSALLSSDITASVNCAKKIVSDG
NGMNAWVAWRNRCKGTDVQAWIRGCRL
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Absorção da Lisozima
4 cistinas
Código de acesso pdb: 1KXY
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BIOFÍSICA
Absorção da Lisozima
NTrp = 6
NTyr = 3
Ncis = 4
(280nm) = 5500.NTrp +1490.NTyr + 125.NCis
(280nm) = 5500.6 + 1490.3 + 125.4 = 37970 M-1cm-1
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BIOFÍSICA
Absorção da Lisozima
(280nm) = 37970 M-1cm-1 (Valor previsto)
(280nm) = 37646 M-1cm-1 (Valor observado)
Desvio % = Valor previsto – Valor observado = 0,86%
Valor observado
Fonte: Pace et al., Protein Science (1995), 4:2411-2423
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Absorção da Concanavalina A
ADTIVAVELDTYPNTDIGDPSYPHIGIDIKSVRSKKTAKWNMQNGKVGTA
HIIYNSVDKRLSAV VSYPNADSATVSYDVDLDNVLPEWVRVGLSASTGL
YKETNTILSWSFTSKLKSNSTHETNALHFMFNQFSKDQKDLILQGDATT
GTDGNLELTRVSSNGSPQGSSVGRALFYAPVH IWESSAVVASFEATFT
FLIKSPDSHPADGIAFFISNIDSSIPSGSTGRLLGLFPDAN
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Absorção da Concanavalina A
0 cistinas
Código de acesso pdb: 1APN
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BIOFÍSICA
Absorção da Concanavalina A
NTrp = 4
NTyr = 7
Ncis = 0
(280nm) = 5500.NTrp +1490.NTyr + 125.NCis
(280nm) = 5500.4 + 1490.7 + 125.0 = 32430 M-1cm-1
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BIOFÍSICA
Absorção da Concanavalina A
(280nm) = 32430 M-1cm-1 (Valor previsto)
(280nm) = 35034 M-1cm-1 (Valor observado)
Desvio % = Valor previsto – Valor observado = -7,43%
Valor observado
Fonte: Pace et al., Protein Science (1995), 4:2411-2423
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BIOFÍSICA
Absorção da Papaína
IPEYVDWRQKGAVTPVKNQGSCGSCWAFSAV VTIEGIIKIRTGNLNEYSE
QELLDCDRRSYGCNGGYPWSALQLVAQYGIHYRNTYPYEGVQRYCRSR
EKGPYAAKTDGVRQVQPYNEGA LLYSIANQPVSV VLEAAGKDFQLYRGG
IFVGPCGNKVDHAVAAVGYGPNYILIKNSWGTGWGENGYIRIKRGTGNSY
GVCGLYTSSFYPVKN
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BIOFÍSICA
Absorção da Papaína
3 cistinas
Código de acesso pdb: 1PPN
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BIOFÍSICA
Absorção da Papaína
NTrp = 5
NTyr = 19
Ncis = 3
(280nm) = 5500.NTrp +1490.NTyr + 125.NCis
(280nm) = 5500.5 + 1490.19 + 125.3 = 56185 M-1cm-1
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BIOFÍSICA
Absorção da Papaína
(280nm) = 56185 M-1cm-1 (Valor previsto)
(280nm) = 57628 M-1cm-1 (Valor observado)
Desvio % = Valor previsto – Valor observado = -2,5%
Valor observado
Fonte: Pace et al., Protein Science (1995), 4:2411-2423
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Referências
Pace, C. N., Vajdos, F., Fee, L., Grimsley, G., Gray. T. How to measure
and predict the molar absorption coefficient of a protein. Protein
Science (1995), 4:2411-2423
http://www.scienceofspectroscopy.info/
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