Avaliação da expressão gênica de citocinas e polimorfismo da IL-28B em
voluntários sadios após administração de IFN- peguilado
Andrea Marques Vieira da Silva, Bio-Manguinhos/ FIOCRUZ
INTERFERON ALFA PEGUILADO
Terapia Padrão da HCC
IFN-α PEG
+
RBV
IFN-α PEG
X
Tempo
RVS
não detectável do RNA / HCV
24 semanas após o final do tratamento
Andrea Marques Vieira da Silva,
Bio-Manguinhos-FIOCRUZ
TAXA DE RESPOSTA VIROLÓGICA SUSTENTADA
Distribuição dos genótipos do
HCV no Brasil
 Genótipo 1 e 4
em torno de 50%
 Genótipos 2 e 3
em torno de 75 e 90%
Andrea Marques Vieira da Silva,
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MECANISMO DE AÇÃO DO IFN- CONTRA HCV
Genes
OAS1, 2 e 3
ISG15
RIG-1
TICAM
RNAsel
IFRN9
STING
IFR7
IFNAR
STAT2
IRF9
Hoofnagle, JH & Seeff, LB. 2006
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FATORES PREDITIVOS DE RVS AO TRATAMENTO
RVR
Não detecção do RNA –HCV (< 50UI/mL)
na 4ª sem. após início do tratamento
SNP IL-28B
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SNP DA IL-28B E O DESFECHO DA HEPATITE C
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QUAL A FREQUÊNCIA DESTE ALELO NA POPULAÇÃO BRASILEIRA?
Ancestralidade
Europeus 61 – 78%
Africanos 30 – 10%
Ameríndios 19%
Pena et al. 2011
Andrea Marques Vieira da Silva,
Bio-Manguinhos-FIOCRUZ
OBJETIVO
Avaliar a expressão gênica de citocinas e sua relação com o
polimorfismo da IL-28B, em voluntários sadios, após
administração de uma dose de IFN-α-PEG A ou B, buscando
identificar assinaturas gênicas/ fatores genéticos que possam
ser correlacionados a cada um dos biofármacos.
Andrea Marques Vieira da Silva,
Bio-Manguinhos-FIOCRUZ
METODOLOGIA
Amostras - 18 voluntários (0, 12, 24, 48 e 72h) após tratamento A ou B.
CONEP -2530.214576/2011-44.
92 genes de citocinas
7 SNPs da região IL-28B.
Andrea Marques Vieira da Silva,
Bio-Manguinhos-FIOCRUZ
EXPRESSÃO GÊNICA DE CITOCINAS
Escolha dos primers de cada
citocina
Sistema microfluídico
Análises
Extração de RNA
Normalização - 3 genes constitutivos
Pré-amplificação
Calibrador: tempo 0
 qPCR multiplex
96
amostras
96
genes
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GENOTIPAGEM DA IL-28B
Escolha dos primers e das sondas
marcadas FAM e VIC
Extração de DNA
qPCR sistema TaqMan
 StepOne Plus
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RESULTADOS
Expressão Gênica
X
rs12979860 CC e CT /TT
X
Tratamento A e B
Indivíduos com SNP rs12979860 com
alelo C, qual será o fenótipo da resposta
imunológica?
COMPARAÇÃO ENTRE OS TRATAMENTOS
INFLUÊNCIA DO GENÓTIPO DA IL-28B
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INFLUÊNCIA DO GENÓTIPO DA IL-28B
Andrea Marques Vieira da Silva,
Bio-Manguinhos-FIOCRUZ
DESEQUILÍBRIO DE LIGAÇÃO DE 7 SNPS DA IL28
Haploview - gráfico de r2.
DL – descreve situações em que algumas combinações de alelos ou marcadores
ocorrem mais ou menos frequentes em uma população
Andrea Marques Vieira da Silva,
Bio-Manguinhos-FIOCRUZ
CONCLUSÃO
 Que há influência genética na expressão de citocinas em indivíduos genótipo
CC (SNP rs12979860), apresentam aumento da expressão de genes destas
moléculas em relação aos indivíduos genótipos CT e TT;
 As análises de DL sugerem que outros SNPs podem também estar relacionados
com o desfecho do tratamento;
 Observou-se que a expressão de alguns dos genes estudados podem ser
influenciados pelo tratamento administrado, independente dos genótipos;
 O conhecimento destes perfis moleculares contribuirá para o melhor
entendimento da ação do IFN-α PEG e para a introdução da genotipagem da IL28B na rotina, auxiliando na elaboração de um tratamento mais adequado e
personalizado para cada paciente.
Andrea Marques Vieira da Silva,
Bio-Manguinhos-FIOCRUZ
PERSPECTIVAS
Comparar o perfil de expressão gênica dos voluntários sadios com
pacientes portadores de hepatite C crônica;
 Caracterizar adequadamente os mecanismos de ação do biofármaco
produzido em Bio-Manguinhos nos indivíduos brasileiros;
Correlacionar os perfis com a Resposta Virológica Sustentada (RSV);
AGRADECIMENTOS
Dr. Marcos Freire – Vice Diretoria de Desenvolvimento Tecnológico
Dras. Nadia Batoreu e Ana Carolina M. Andrade – Programa Biofármacos-VDTEC-BioManguinhos/Fiocruz
À equipe dos Laboratórios: Tecnologia Recombinante, Tecnologia Virológica e Tecnologia e
Diagnóstico
Dra. Maria de Lourdes Maia e equipe da ASCLIN – Bio-Manguinhos/Fiocruz
Dr. Paulo Picon Dornelles e equipe da NUCLIMED
À equipe – Laboratório de Hanseníase-IOC/Fiocruz
Dr. Marcelo R. Alves - IPEC – Fiocruz
Aos parceiros do Laboratório Tecnologia Imunológica
Aos orientadores Dra. Denise Matos e Dr. Milton Moraes
Andrea Marques Vieira da Silva,
Bio-Manguinhos-FIOCRUZ
OBRIGADA.
Andrea Marques Vieira da Silva,
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