REF DF18
Dimension® clinical chemistry system
Flex® reagent cartridge
Cartucho de reagente Flex® Álcool Etílico
Fim a que se destina: O método do ALC utilizado no sistema de
química clínica Dimension® é um teste para diagnóstico in vitro
destinado à determinação do álcool etílico em soro humano e
sobrenadantes de sangue total precipitado e à detecção qualitativa de
álcool etílico em urina. Os resultados do teste do álcool etílico podem
ser utilizados no diagnóstico e tratamento de intoxicação e
envenenamento pelo álcool.
Resumo: O método do álcool etílico (ALC) é uma modificação do
procedimento enzimático da álcool desidrogenase (ADH) descrito
originalmente por Bonnichsen e Lundgren1 e apresentado
posteriormente como um procedimento geral por Bergmeyer.2 Este
método utiliza o tampão Tris (hidroximetil) aminometano como
agente de retenção do aldeído.
Princípios do procedimento: A desidrogenase do álcool (ADH)
cataliza a oxidação do etanol em acetaldeído, com a redução
simultânea de nicotinamida adenina dinucleótida (NAD). Um pH
alcalino e um agente de retenção do aldeído forçam a reacção até se
obter uma mole de NADH para cada mole de álcool presente. A
absorvância devida ao NADH (e, assim, a concentração de álcool) é
determinada utilizando uma técnica de ponto final com leitura bicromática (340 - 383 nm).
ADH
Etanol + NAD+
(não absorvente a 340 nm)
Acetaldeido + NADH + H+
(absorve a 340 nm)
Complexo
Acetaldeído + Tris
Reagentes
Poçosa
Forma
Ingrediente
Quantidadeb
Fonte
1, 2
Líquido
ADH
15 U
Yeast (Levedura)
3,4,5,6
Comprimido NAD
4.9 µmoL
7,8
Líquido
Tris buffer
0.95 moL
a. Os poços são numerados consecutivamente a partir da extremidade larga
do cartucho.
b. Valor nominal por teste no fabrico.
Precauções: As cuvetes usadas contêm líquidos biológicos
humanos; manipule-as com o cuidado adequado para evitar o
contacto com a pele e a ingestão.3
Para utilização em diagnóstico in vitro
Preparação do reagente: A mistura e a diluição são efectuadas
automaticamente pelo instrumento.
Instruções de armazenamento: Armazenar a 2 - 8° C.
Validade: Consultar a embalagem para obter a data de validade de
cada um dos cartuchos de reagentes não abertos. Os poços dos
cartuchos selados ou não hidratados no instrumento permanecem
estáveis durante 30 dias. Depois de os poços terem sido perfurados
pelo instrumento, permanecerão estáveis durante 5 dias.
Colheita de amostras: Utilizar uma solução germicida não alcoólica
para limpeza da pele. Se forem empregues recipientes, seringas e
agulhas reutilizáveis, estes deverão ser limpos ou armazenados com
álcool ou outros solventes voláteis. O tubo com a amostra deverá ser
completamente preenchido e armazenado sob refrigeração até à sua
análise.3,4,5 Para minimizar as perdas de álcool por evaporação numa
amostra, abrir e processar as amostras no modo STAT. As amostras
de urina deverão ser mantidas a 4° C em recipientes selados até à
análise. Para um armazenamento prolongado ou sem refrigeração,
adicionar 50 mg de NaF como conservante.6
Substâncias interferentes conhecidas
• As substâncias seguintes não interferem com o método ALC
quando se encontram presentes no soro nas quantidades
indicadas. As imprecisões (desvios) sistémáticas devidas a estas
substâncias são inferiores a 10% numa concentração de álcool
etílico de 100 mg/dL [22 mmol/L].c
Ácido ascórbico
Acetaminofeno
Bilirrubina
Ibuprofeno
Álcool isopropilico
Metanol
Acetona
Cafeína
Cimetidina
Etilenoglicol
Manitol
Ácido Lático
3
20
20
40
500
100
100
10
10
250
500
100
mg/dL
mg/dL
mg.dL
mg/dL
mg/dL
mg/dL
mg/dL
mg/dL
mg/dL
mg/dL
mg/dL
mg/dL
[17 mmol/L]
[1.3 mmol/L]
[342 µmol/L]
[1.9 mmol/L]
[83.3 mmol/L]
[31.2 mmol/L]
[17.2 mmol/L]
[51.5 µmol/L]
[0.4 mmol/L]
[40.3 mmol/L]
[27.4 mmol/L]
[11.1 mmol/L]
ALC
Nicotina
Salicolato
Triglicérido
2 mg/dL [0.1 mmol/L]
50 mg/dL [3.62 mmol/L]
600 mg/dL [6.8 mmol/L]
• Os anticoagulantes heparina de lítio e oxalato de potássio/fluoreto
de sódio não interferem com o método ALC nas concentrações
normalmente encontradas nos tubos de colheita de sangue.
• A uma concentração de álcool etílico de 100 mg/dL [22 mmol/L], o
butanol a 250 mg/dL aumenta o resultado do ALC em 26.5% e o
n-propanol a 500 mg/dL aumenta o resultado do ALC em 57.7%.
• O sangue total conservado com 4.3 mg/mL [1.02 mmol/L] de NaF e
o soro visivelmente hemolisado podem ser pré-tratados por
precipitação com TCA a 6% (p/v) antes da análise com o método
do ALC.
Procedimento de precipitação
1. Preparar uma solução de trabalho de ácido tricloroacético (TCA) a
6% (p/v) em cada dia de utilização efectuando uma diluição de 1: 5
de soluto de TCA a 30% (p/v).d
2. Inverter suavemente as amostras de sangue total dez vezes.
3. Usando pipetas volumétricas, adicionar 1.0 mL de sangue total a
2.0 mL da solução de trabalho de TCA a 6% (p/v).
4. Inverter a mistura dez vezes. Centrifugar durante 5 minutos a
200 x g. Analisar imediatamente o sobrenadante no sistema
Dimension®.
5. Multiplicar a leitura pelo factor de diluição de três (3) para obter a
leitura do álcool etílico no “sangue total” no sistema Dimension®.
• Cada laboratório deverá determinar a aceitabilidade dos tubos de
colheita de sangue e dos produtos de separação do soro que utiliza.
Podem existir variações nestes produtos entre fabricantes e, por
vezes, entre lotes do mesmo fabricante.
c. Sistema Internacional de Unidades (Unidades S.I.) entre parêntesis.
d. As soluções de TCA com uma concentração inferior a 30% são consideradas
instáveis.7
Procedimento: Para a execução do teste do ALC é necessário o
cartucho de reagente Flex® ALC, Nº de Catálogo DF18. Este teste é
efectuado no sistema de química clínica Dimension®, depois de o
método ter sido calibrado (consultar o Material de Referência na
secção Calibração).
Passos do teste
A recolha da amostra,e dispensação do reagente, agitação,
processamento e impressão dos resultados são realizados
automaticamente pelo sistema Dimension®. Para obter pormenores
sobre este processamento, consultar o manual do sistema
Dimension®.
e. O recipiente da amostra (se não for um tubo primário) deverá ter volume
suficiente para acomodar o volume da amostra e um volume morto. Não é
necessário um enchimento preciso do recipiente.
• Volume da amostra:
• Volume de Reagente 1:
• Volume de Reagente 2:
• Volume de Reagente 3:
• Volume de Diluente
• Temperatura do teste:
• Comprimento de onda:
• Tipo de leitura:
Condições de teste
3 µL
190 µL
90 µL
25 µL
192 µL
37° C
340 e 383 nm
bicromática, ponto final
Calibração
O procedimento geral de calibração encontra-se descrito no manual
do sistema Dimension®. Na calibração do método do álcool etílico,
deverão ser tomadas em consideração as seguintes informações:
Intervalo do ensaio:
Material de Referência:
Níveis de calibração sugeridos:
Esquema de calibração:
Frequência da calibração:
Coeficientes Atribuídos:
0 - 300 mg/dL [0.0 - 65.0 mmol/L]
Padrões primários ou calibradores
secundários, tais como o Calibrador para
Álcool (N° de Cat. DC37) As ampolas abertas
deverão ser processadas imediatamente
devido à evaporação.
0, 100, 300 mg/dL [0, 22, 65 mmol/L]
Três níveis em triplicado
Cada lote novo de cartucho de reagente
De 3 em 3 meses para qualquer lote
individual.
C0
-2.600
C1
0.323
Método de despiste do álcool etílico na urina
Pelo menos uma vez por dia, analisar um controlo POSITIVO e um
NEGATIVO utilizando um material de controlo adequado. Os
resultados obtidos deverão encontrar-se dentro dos limites definidos
pela variabilidade do sistema no dia a dia, avaliada pelo laboratório do
utilizador.
Resultados: O instrumento calcula e imprime automaticamente a
concentração do ALC em mg/dL [mmol/L] utilizando o esquema de
cálculo ilustrado no manual do sistema Dimension®. Estes resultados
deverão ser relatados caso a amostra seja de soro ou sobrenadante
de sangue total precipitado. As leituras de ALC urinário deverão ser
relatadas como NEGATIVOS para resultados inferiores a 50.0 mg/dL
[11 mmol/L] ou POSITIVOS para resultados superiores ou iguais a
50.0 mg/dL [11 mmol/L]. Os resultados POSITIVOS deverão ser
confirmados por um método alternativo, tal como a cromatografia
gasosa.8 Os efeitos fisiológicos e psicológicos do etanol não estão
necessariamente correlacionados com as concentrações urinárias. A
presença de etanol na urina constitui apenas um indicador de
ingestão recente. São necessárias determinações no soro ou sangue
total para avaliar o efeito.9,10
Nota: Consultar a legislação estatal e local para determinar se a
concentração de álcool etílico com recurso a este método pode ser
aceite para o estabelecimento dos níveis legais de álcool no sangue.
Limitações do procedimento
Resultados:
Diluições manuais:
Auto-diluição (AD):
Resultados:
>300 mg/dL [65 mmol/L]
Para obter resultados que se encontrem dentro do
intervalo do ensaio, efectuar as diluições apropriadas
com Água Purificada. Introduzir o factor de diluição.
Voltar a efectuar o ensaio. A leitura do resultado é
corrigida para a diluição.
Consultar a literatura do seu sistema Dimension®.
<0.0 mg/dL [0 mmol/L]
Para confirmar se o resultado é inferior a 0, diluir 1 parte da amostra
com uma parte de um padrão ou controlo contendo uma
concentração conhecida de álcool. Voltar a efectuar o ensaio. Se o
resultado desta mistura corresponder a metade do valor conhecido do
padrão ou do controlo, registar o valor da amostra como
correspondente a 0 mg/dL [0 mmol/L]. Registar o tipo de amostra
analisada (isto é, soro, sangue total ou urina).
O sistema de emissão de relatórios do instrumento contém
mensagens de erro para prevenir o operador de avarias específicas.
Qualquer relatório que contenha tais mensagens de erro deve ser
retida para seguimento. Consultar o manual do sistema Dimension®
para resolução de problemas.
Intervalo terapêutico: A resposta farmacológica aos níveis de álcool
no sangue podem variar de indivíduo para indivíduo. Existem relatos
de uma concentração letal superior a 400 mg/dL [87 mmol/L].11
Características específicas do desempenhof
Reprodutibilidadeg
Material
Média
mg/dL [mmol/L]
Sobrenadante do sangue total 30.3
Pool de plasma
93.0
Calibrador
98.8
Controlo de etanol Sigma®
188.2
Material
[6.6]
[20.2]
[21.4]
[40.9]
Média
mg/dL [mmol/L]
Correlação
Estatistica de Regressãoh
Método
comparativo
Declive Intersecção
[0.2] (2.4)
[0.4] (1.89)
[0.3] (1.19)
[0.4] (1.07)
Desvio padrão
(% CV)
Intra-ensaio
Especificidade analítica
Consultar a secção sobre substâncias interferentes para obter
pormenores.
Bibliografi
1. Bonnischsen,R and Lundgren, G, Comparison of the ADH and the Widmark
procedures in Forensic Chemistry for Determining Alcohol, Acta. Pharmacol
et Toxicol 13, 256-266 (1957).
2. Bergmeyer, HU, Methods of Enzymatic Analysis, Academic Press, New York,
NY. 1965, p 285.
3. Tietz, NW, Textbook of Clinical Chemistry, W.B. Saunders Co., Philadelphia,
PA 1986, pp 52–53 (techniques and procedures to minimize laboratory
infections) and p 1706 (specimen collection and storage recommendations).
4. Henry,JB, Clinical Diagnosis and Management by Laboratory Methods,
W.B.Saunders Co., Philadelphia, PA 1979, p 507.
5. Tietz, NW, Clinical Guide to Laboratory Tests, W.B. Saunders Co.,
Philadelphia, PA 1990, p 207.
6. Jacobs, DS, et al, Laboratory Test Handbook with DRG Index, Mosby/LexiComp Inc., Stow, OH. 1984, p 525.
7. Windholz, M, et al, The Merck Index, An Encyclopedia of Chemicals and
Drugs, Merck & Co., Inc., Rahway, NJ. 1983, p 1376.
8. Hawks,RL, Chiang,CN, Urine Testing for Drug Abuse. NIDA Research
Monograph 73, 1986, pp. 103-104.
9. Dubowski, KM, Alcohol Analysis: Clinical Laboratory Aspects, Part 1. Lab
Mgt. vol 20(3). Mar 1982 pp 43-54.
10. Blanke,RV, et al, Drug Concentrations & Driving Impairment. JAMA vol 254,
Nov. 8, 1985 pp. 2618-2621.
11. Sunshine, I, Methodology for Analytical Toxicology, CRC Press, Inc,
Cleveland, OH, 1975 pp 152-153.
Dimension®, Flex® e aca® são marcas registadas da Dade Behring Inc., no
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Chave dos Símbolos
Fabricado por
EC REP
IVD
LOT
Representante Autorizado
Dispositivo Médico para Diagnóstico In Vitro
Código do Lote
A data em “Utilizar antes de” encontra-se no
formato ano-mês-dia (AAAA-MM-DD)
EXP
YYYY-MM-DD
Sobrenadante do sangue total 30.3 [6.6]
1.68 [0.4] (5.71)
Pool de plasma
93.0 [20.2]
4.18 [0.9] (4.39)
Calibrador
98.8 [21.4]
2.09 [0.5] (2.09)
®
Controlo de etanol Sigma
188.2 [40.9]
3.20 [0.7] (1.69)
®
Sigma é uma marca comercial registada da Sigma Chemical Company, St.
Louis, MO 63178.
8° C
2° C
Limitação da Temperatura
Marca CE
REF Número de Catálogo
Consulte as Instruções de Utilização
Dade Behring Inc.
Newark, DE 19714, U.S.A.
EC REP
Dade Behring Limited
Regus House, Atterbury
Milton Keynes MK10 9RG
United Kingdom
ni
Método da ALC no analisador
clínico discreto aca®
Soro
1.01
1.75
0.998
87
Sobrenadante do sangue total 1.01
1.82
0.999
200
Plasma
0.96
3.04
0.999
99
Urina
1.01
1.53
0.999
92
Abbot TDx® Plasma
0.92
2.45
0.997
99
Cromatografia gasosa
Soro
0.99
1.45
0.997
87
Sobrenadante do sangue totalj 0.34
0.62
0.993
200
Urina
1.00
2.85
0.999
92
TDX® é uma marca registada da Abbott Diagnostics, Abbott Park, IL 60064.
f. Todos os testes das características do desempenho foram efectuados após a
realização das verificações normalmente recomendadas do controlo da
qualidade do equipamento (consultar o manual do sistema Dimension®).
g. As amostras a cada nível foram analisadas em duplicado durante 20 dias. Os
desvios padrão intra-ensaio e do intervalo diário foram calculados através do
método da análise da variância.
h. A equação modelo para a estatística de regressão é a seguinte: [resultados
do sistema Dimension®] = declive x [resultados do método comparativo] +
intersecção.
i. Partes alíquotas de amostras clínicas recebidas para análise do ALC.
j. As amostras de sangue total foram analisadas por cromatografia gasosa. Os
sobrenadantes do sangue total foram analisados pelo sistema Dimension®.
Os resultados não foram corrigidos com o factor de diluição de três (3) para
obter os resultados do “sangue total”.
Desvio padrão
(% CV)
Intra-ensaio
0.71
1.80
1.19
2.02
Coeficiente de
correlação
2001-12-13 PT
2002-07 E PN 717018.001-PT
Controlo da Qualidade
Pelo menos uma vez por dia, analisar dois níveis de materiais de
controlo de qualidade, com concentrações conhecidas. Para obter
mais pormenores, consultar o manual do sistema Dimension®. O
resultado obtido deverá encontrar-se dentro dos limites definidos pela
variabilidade do sistema no dia a dia, avaliada pelo laboratório do
utilizador. Se os resultados se situarem fora dos limites aceitáveis do
laboratório, siga o procedimento da secção de resolução de
problemas apresentado no manual do sistema Dimension®.
Pode existir uma avaria do sistema se for observada a seguinte
precisão de 5 testes:
Concentração
D.P.
100 mg/dL [22 mmol/L]
>3 mg/dL [0.7 mmol/L]
300 mg/dL [65 mmol/L]
>6 mg/dL [1.3 mmol/L]