C.3.2 – Biologia Molecular
Potencial apoptótico de uma nova clorina anfifílica como fotossensibilizador para terapia
fotodinâmica
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Milene N. O. Moritz , Carlos Rossa Júnior ², Kleber Thiago de Oliveira³, Janice R. Perussi .
1. Mestre pelo Programa de Pós-Graduação Interunidades em Bioengenharia , USP, São Carlos/SP; *[email protected]
2. Docente e Pesquisador do Depto.de Diagnóstico e Cirurgia , UNESP, Araraquara/SP
3. Docente e Pesquisador do Depto. de Química, UFSCar, São Carlos/SP
4. Docente e Pesquisadora do Depto de Química e Física Molecular, USP, São Carlos/SP
Palavras Chave: PDT, clorinas, morte celular.
Introdução
A Terapia Fotodinâmica (PDT) é uma técnica
utilizada para tratar vários tipos de tumores em que a
luz estimula um fotossensibilizador (FS) a gerar
espécies reativas de oxigênio (ROS) que levam à
morte celular por apoptose ou necrose. Visando
aumentar a
efetividade
da
clorina
(CHL,
metilfeoforbídio) como FS, foi adicionado o grupo
TRISMA (CHL-T) para torná-la mais anfifílica. O
objetivo foi avaliar a efetividade desta clorina
modificada na indução de morte celular de uma
linhagem de carcinoma espinocelular de laringe
(Hep-2). Para isso, avaliamos a função mitocondrial
(ensaio MTT) e apoptose/necrose (microscopia de
fluorescência e citometria de fluxo).
CHL-T aumenta a apoptose em estágio inicial e final
em comparação à clorina não modificada e à
hipericina
Figura 2. Citometria de fluxo das células HEp-2 para os
três fotossensibilizadores no tempo de incubação de 2h,
-2
dose de luz de 6 J cm e período de pós-irradiação de
24h. A: controle negativo. B: 0,52 μM de CHL. C: 0,52 μM
de CHL-T. D: 0,52 μM de HY.
Resultados e Discussão
CHL-T é 10X mais citotóxica que a clorina não
modificada
Tabela 1. Concentrações inibitórias médias (IC50) para os
FSs incubados por 2h e 16h e irradiados na dose de 6 J
-2
cm e análise das células após 24h.
Figura 1. Microscopia de fluorescência das células HEp-2
-2
no tempo de incubação de 2h, dose de luz de 6 J cm e
período de pós-irradiação de 24h. A: controle negativo. B:
controle escuro com 0,06 μM de CHL-T. C: irradiado e
0,06 μM de CHL-T. D: irradiado e 0,12 μM de CHL-T E:
irradiado e 0,92 μM de CHL-T.
CHL-T aumenta a ativação da proteína pró-apoptótica
p53
Figura 3. Wester blotting das células HEp-2 para os três
fotossensibilizadores na concentração de 0,52 μM no
-2
tempo de incubação de 2h, dose de luz de 6 J cm e
período de pós-irradiação de 24h.
Conclusões
A modificação da clorina com adição do grupo
TRISMA resultou em significativa melhora de sua
eficiência como fotossensibilizador na indução de
morte celular por PDT.
Agradecimentos
Apoio financeiro: CNPq, CAPES, FAPESP e CEPOF.