23.001 Early-outgrowth bone marrow cells protect the retina of experimental
model of type 2 diabetes by improving SIRT-1 signaling
Duarte, D. A. , Silva, K. C. , Papadimitriou, A. , Rosales, M. A. B. , Peixoto, E. B. M. I. , Gilbert, R. E.
, Lopes de Faria, J. B. , Lopes de Faria, J. M. ,
Renal Pathophysiology Laboratory, Investigation on - Unicamp
Keenan Research Centre of the Li Ka Shing Knowledg - University of Toronto
Introducao:
Cellular therapy has been studied in cardiovascular disease but has rarely been investigated in eye
diseases. Sirtuins (SIRTs), a family of deacetylases, is thought to be sensitive to oxidative
stress. This study hypothesized that cell therapy using early outgrowth cells (EOC) could protect the
diabetic retina through antioxidant means, thus improving the SIRT1 pathway.
Objetivos:
This study investigated the possible therapeutic effects of cells derived from healthy (db/m) and
diabetic (db/db) animals on diabetic retinopathy (DR).
Metodos:
Mice aged 8-weeks and db/db were randomized to receive a unique intravenous injection of PBS or
0.5 × 105 db/m EOCs or 0.5 × 105 db/db EOCs. Four weeks later, the animals were euthanized and
the eyes enucleated. For in vitro study, an EOCs-conditioned medium (EOC-CM) was generated
from db/m and db/db EOCs cultures. Mice were housed in a temperature-controlled room (22°C)
with a 12-h:12-h light:dark cycle with free access to food and water. All animal studies were
approved by the St. Michael’s Hospital Animal Ethics Committee in accordance with the
Guide for the Care and Use of Laboratory Animals (NIH publ. no. 85-23, revised 1996). The rat
Müller cells (rMCs) were exposed for 24 h to normal (NG), high glucose (HG) combined, or with
neither db/m nor db/db EOC-CMs.
Resultados:
In diabetic rats, there was an increase of DR and oxidative damage markers accompanied by an
increase in NOX4 expression leading to detriment of SIRT1 protein. This was followed by
lysine-310-p65-NFκB acetylation. The treatment with cells from db/m significantly reduced
this damage, but the treatment with cells from db/db mice fully restored these alterations to normal
levels. The rMCs exposed to HG displayed GFAP and VEGF expression upregulation accompanied
by an increase in NOX4 expression, ROS levels and acetyl-lysine-310-p65-NFκB. Protein
expression and activity of SIRT1 were markedly reduced in diabetic milieu conditions. The treatment
with both EOC-CMs prevented all these abnormalities, but db/db EOC-CM resulted in full restoration
to NG conditions. The presence of EX-527, a SIRT1-specific blocker, or siRNA SIRT1 abolished the
observed effects in both treatments.
Conclusão:
This study demonstrates that the endocrine capacity of EOCs is effective in improving the retinal
SIRT1 pathway, thus protecting the retina from diabetic milieu insult. This is one evidence that
regenerative therapy for DR using EOCs or its released factors could be a promising tool for patients
with diabetic eye disease.
Apoio Financeiro:
This study demonstrates that the endocrine capacity of EOCs is effective in improving the retinal
SIRT1 pathway, thus protecting the retina from diabetic milieu insult. This is one evidence that
regenerative therapy for DR using EOCs or its released factors could be a promising tool for patients
with diabetic eye disease.
Comitê de Ética:
NIH publ. no. 85-23
23.002 CISPLATIN LOADED LONG-CIRCULATING, pH-SENSITIVE LIPOSOMES
FOR PANCREATIC TUMOR TREATMENT.
Carlesso, F. N. , Fuscaldi, L. L. , Araujo, R. S. , Teixeira, C. S. , Fernandes, S. O. A. , De Oliveira,
M. C. , Silveira, J.N., Leite, E. A. , Cardoso, V. N. , De Barros, A. L. B. ,
Department of Clinical and Toxicological Analysis - UFMG
Department of Pharmaceuticals - UFMG
Introducao:
BACKGROUND: Pancreatic cancer is one of the most aggressive types of tumors and is associated
with the low survival rate (5% in the U.S.). In this context, the search for effective treatments is
needed. Cisplatin (CDDP) is a therapeutic option for treating pancreatic tumor. However, the use of
this drug is quite limited by several side effects, and chemoresistance frequently reported. An
alternative to minimize these effects would be use nanostructured carriers, such as pH-sensitive
liposome (SpHL-CDDP) which could contribute to lower toxicity and higher drug concentration in the
tumor tissue.
Objetivos:
OBJECTIVES: To evaluate the treatment with free CDDP and SpHL-CDDP in pancreatic tumor,
CAPAN-1 cell line in an animal model.
Metodos:
METHODS: The pancreatic tumor was induced in the upper right flank of male mice BALB/c nude (8
weeks old) by subcutaneous inoculation of 5x106 CAPAN-1 cells suspended in 100 µL of culture
medium. The animals were randomically divided into four groups: 1) control (CT, saline) (n=6); 2)
Treatment with free CDDP (8 mg / kg, n=7); 3) Treatment with SpHL-CDDP (8 mg / kg, n=6), 4)
Blank liposome (SpHL, n=6). Each animal from each group received one injection per week (IV
route) during three consecutive weeks. The parameters tumor volume and body weight were
assessed weekly. The data were quantitatively compared by analysis of variance (ANOVA) and/or
by the Tukey test. A level of p<0.05 was considered statistically significant. This study was approved
by CEUA-UFMG (20/2014).
Resultados:
RESULTS: Tumor volume evaluation showed an increase of tumor tissue in the groups treated with
saline and blank liposome, this increase was not observed in the groups treated with free CDDP or
SpHL-CDDP. Statistical difference between the control and treated groups was observed, showing
the potential of this drug in treating this type of tumor. However, there was not observed statistical
difference in tumor volume between free CDDP and SpHL-CDDP groups. Nevertheless, when the
weight of the animal was assessed there was significant difference between animals treated with
CDDP (-27.40 ± 6.83) and animals treated with SpHL-CDDP (-0.94 ± 2.83), indicating that although
liposomes showed similar efficacy to the free drug, they have lower toxicity. Furthermore, in the
group treated with CDDP, 3 animals died during treatment (40%), whereas in the group treated with
the encapsulated drug no deaths were determined, indicating the lower toxicity of formulation again.
Conclusão:
CONCLUSIONS: Data obtained from these experiments suggested higher toxicity for free CDDP
than SpHL-CDDP due to reduced body weight and mortality rate of 40%. The use of the
SpHL-CDDP prevented tumor growth as well as the free CDDP, however, and the encapsulation in
liposomes reduced the toxicity.
Apoio Financeiro:
CONCLUSIONS: Data obtained from these experiments suggested higher toxicity for free CDDP
than SpHL-CDDP due to reduced body weight and mortality rate of 40%. The use of the
SpHL-CDDP prevented tumor growth as well as the free CDDP, however, and the encapsulation in
liposomes reduced the toxicity.
Comitê de Ética:
20 / 2014
23.003 Characterization and in vivo evaluation of nanocapsules loading
99mTc-MIBI for intramammary study
Araujo, R. S. , Fuscaldi, L. L. , Takenaka, I. K. T. M. , Vilela, J. M. C. , Andrade, M. S. , Mosqueira,
V. C. F. , Cardoso, V. N. ,
Departamento de Analises Clinicas e Toxicologicas - UFMG
Departamento de Farmacia - UFOP
Instituto de Inovação Metalurgia e Ligas Especiais - SENAI/CETEC
Introducao:
The blood&ndash;milk barrier is an efficient barrier that provides a protection to the milk produced
by animals. Curative and prophylactic treatments of mammary gland can be administrated via
intramammary to avoid undesired drug concentration in the blood of the animals. The detection of
drugs and its residues in biological media is not desirable and limits are established (ANVISA).
Recently, nanoparticulate systems have been developed to improve therapeutic efficacy and to
avoid adverse effects. However, few examples of nanocarriers incorporating drugs intended for
veterinary field are reported to date.
Objetivos:
1-
Production
and
characterization
of
two
different
surface
nanocapsules
(NCs):
poly-&epsilon;-caprolactone nanocapsule (PCL NC) and poly-&epsilon;-caprolactone nanocapsule
coated with chitosan (CS-PCL NC) loading the lipophilic complex 99mTc-MIBI to mimic a lipophilic
drug. 2- Evaluation of 99mTc-MIBI free and NCs loading 99mTc-MIBI absorption in rats after
intramammary administration.
Metodos:
MIBI was labeled with 99mTc and the radiolabeling efficiency was performed by thin layer
chromatography and solvent extraction. Radiolabeling stability was determined in saline and milk.
99mTc-MIBI-PCL NC and 99mTc-MIBI-CS-PCL NC were prepared by interfacial deposition of
preformed polymer followed by solvent displacement method. The size and zeta potential of the NCs
were determined in a Zetasizer by photon correlation spectroscopy (PCS) and laser Doppler
anemometry, respectively. The NCs morphology was evaluated by atomic force microscopy (AFM).
Radiolabeled NCs and free 99mTc&ndash;MIBI were administered into the R4 abdominal mammary
gland of anesthetized Wistar female rats (180-220 g; 3-4 months; n = 5). At pre-established time
intervals, blood samples were collected and their radioactivity was determined in a scintillator
apparatus. Animals study was approved by the Ethics Committee on Animal Use of Federal
University of Minas Gerais (protocol 358/2013). Data were analyzed by ANOVA, followed by Tukey
multiple-comparisons test (Prism 4) and were expressed as &lsquo;means ± standard
deviations&rsquo;. P-values < 0.05 were considered significant.
Resultados:
Radiolabeling efficiency of MIBI with 99mTc was higher than 95% for both methods, remaining
stable during 24 h in saline and milk. The mean diameter of the NCs ranged from 405 ± 2 to 558 ± 1
nm and from 363 ± 60 to 821 ± 55 nm when determined by PCS and AFM, respectively. The zeta
potential of PCL NC and CS-PCL NC formulations were negative and positive, respectively,
demonstrating that chitosan coated PCL NC. The encapsulation efficiency of 99mTc-MIBI in both
formulations was higher than 85%. The absorption of both radiolabeled NCs, after intramammary
administration in rats, was lower than the absorption of free 99mTc-MIBI (P < 0.05). Comparing both
NCs, 99mTc-MIBI-CS-PCL NC had higher significant absorption levels than 99mTc-MIBI-PCL NC,
except at 60, 120 and 240 min (P > 0.05).
Conclusão:
Both NCs formulations presented suitable physicochemical properties and high retention in the
mammary gland, especially PCL NC formulation. Then, the NCs could be a promising formulation
for encapsulating lipophilic drugs, as antibiotics, intended for the treatment of intramammary
diseases in animals.
Apoio Financeiro:
Both NCs formulations presented suitable physicochemical properties and high retention in the
mammary gland, especially PCL NC formulation. Then, the NCs could be a promising formulation
for encapsulating lipophilic drugs, as antibiotics, intended for the treatment of intramammary
diseases in animals.
Comitê de Ética:
358/2013
23.004 Manipulation of primer affinity corrects PCR bias and improves High
Resolution Melting accuracy for imprinted genes.
Rubatino, F. V. M. , Carobin, N. V. , Oliveira, V. T. , Freitas, M. L. , Pietra, R. X. , Bosco, A. A. ,
Jehee, F. S. ,
Genética Humana - IEPSC-BH
Endocrinologia - IEPSC-BH
Introducao:
High Resolution Melting studies are considered a cheap, fast and attractive alternative methodology
for methylation analyses. To overcome a PCR bias towards the unmethylated targets, it has been
proposed that primers should be fully complementary to the methylated sequence and have a
mismatch to the unmethylated one. However, when studying genes mapped within imprinted
regions, or that present a higher level of methylation, an unusual PCR bias towards the methylated
target can arise. We hypothesized that inverting primer affinity would overcome this problem.
Objetivos:
The aim of this work is show that one mismatch at methylated binding site can improve High
Resolution Melting assay for high methylation levels.
Metodos:
To test the hypothesis we used the imprinted MAGEL2 gene. Two sets of primers were designed,
one with mismatches to the unmethylated primer biding sequences and the other with mismatches
to the methylated ones.
Resultados:
When performing High Resolution Melting using different methylation levels (0%, 50%, 75%, 90%,
99% and 100%) we were only able to create appropriate PCR conditions with the second set of
primers. Primers that are fully complementary to the methylated sequence originate a very small
plotting area between samples 50% and 100%. When using primers that are fully complementary to
the unmethylated sequence we were able to distinguish samples with small methylation fractions
(90%, 99% and 100%).
Conclusão:
Based on our results we propose that the best approach to design primers to MS-HRM studies of
genes mapped in imprinted regions is to favor the rarer unmethylated sequence.
Apoio Financeiro:
Based on our results we propose that the best approach to design primers to MS-HRM studies of
genes mapped in imprinted regions is to favor the rarer unmethylated sequence.
Comitê de Ética:
This work did not use humam or animal samples. The DNA used on reactions is from EpiTect PCR
Control DNA Set, Qiagen,&nbsp;Bisulfite-converted DNA for control experiments.
23.005 Apresentação atípica da síndrome de Prader-Willi em gêmeas
monozigóticas não é causada pela alteração do padrão de metilação da região
15q11.2-q13.
Oliveira, V. T. , Carobin, N. V. , Rubatino, F. V. M. , Giannetti, J. G. , Vianna, G. S. , Rocha, P. P. O.
, Ribeiro, B. S. V. , Pietra, R. X. , Jehee, F. ,
Genética Humana - IEPSCBH
Medicina - UFMG
Introducao:
A síndrome de Prader-Willi (SPW) é caracterizada por deficiência mental leve a moderada,
obesidade e hiperfagia e é causada pela perda de expressão dos alelos herdados paternamente na
região 15q11.2-q13. Já a Síndrome de Angelman (AS) é caracterizada por comprometimento no
desenvolvimento motor, de fala e comportamental resultante da perda da expressão do gene
UBE3A de origem materna.
Objetivos:
Sujeitos da pesquisa: Para este estudo identificamos gêmeas monozigóticas, de 24 meses, com
quadro de atraso do desenvolvimento neuropsicomotor grave, crise convulsiva de difícil controle
assemelhando-se à síndrome de Angelman. Esta pesquisa foi aprovada pelo CEP da Santa Casa
de Belo Horizonte (CAAE:01969512.9.0000.5138).
Metodos:
Resultados:
Métodos e Resultados: Os testes genéticos para AS, realizados por marcadores microssatélites,
PCR sensível à metilação de SNRPN e FISH, mostraram que ambas possuíam deleção paterna da
região 15q11.2-q13, resultado compatível com PWS. Aos 14 anos as pacientes continuam com
atraso do desenvolvimento neuropsicomotor grave, crises convulsivas e não desenvolveram
hiperfagia ou obesidade. Para excluirmos que suas deleções fossem maiores do que a região típica
de PWS, foi realizado estudo de array-CGH. Este identificou que a deleção era de 4,9 Mb, entre os
pontos de quebra 2 e 3 (Tipo 2), uma das mais comuns entre os pacientes PWS. O
sequenciamento direto do gene UBE3A não identificou mutações patogênicas. Levantamos, então,
a hipótese de que os padrões de metilação dos demais genes da região poderiam estar alterados,
levando ao surgimento do quadro atípico de PWS. Para testar esta hipótese, desenhamos primes
para PCR sensível à metilação, para os genes ATP10A, NDN, MKRN3. Os resultados foram
comparados com os de indivíduos controles não afetados e indivíduos com diagnóstico molecular
de PWS. Nas pacientes, o padrão de metilação para os genes NDN e MKRN3 é paterno,
semelhante aos indivíduos PWS. Os controles não afetados apresentam padrão bialélico para
esses dois genes. Já o gene ATP10A apresentou um padrão de metilação bialélico em todos
indivíduos testados, evidenciando que, mesmo em indivíduos que possuem apenas um alelo
imprintado, ocorre o escape de metilação.
Conclusão:
Concluímos que o quadro clínico atípico nas gêmeas não é devido a alterações nos padrões de
metilação dos genes da região imprintada 15q11.2-q13.
Apoio Financeiro:
Concluímos que o quadro clínico atípico nas gêmeas não é devido a alterações nos padrões de
metilação dos genes da região imprintada 15q11.2-q13.
Comitê de Ética:
CAAE:01969512.9.0000.5138
23.006 Estudo dos níveis de expressão do gene MAGEL2 em indivíduos
obesos e não-obesos
Carobin, N. V. , Rubatino, F. V. M. , Oliveira, V. T. , Rocha, P. P. O. , Pietra, R. X. , Bosco, A. A. ,
Petruceli, E. , Vieira, C. , Petruceli, M. , Reis, G. M. F. , Jehee, F. ,
Genética Humana - IEPSCBH
Endocrinologia - CEM
Introducao:
: A Síndrome de Prader-Willi é uma desordem genética caracterizada por hiperfagia e obesidade
associada à ausência de expressão de genes paternalmente herdados na região cromossômica
15q11-q13. O gene MAGEL2 está mapeado nesta região e tem expressão exclusivamente paterna.
Os baixos níveis de expressão do homologo Magel2 em modelo animal foram relacionados à
disfunção hipotalâmica, como a falta do controle da saciedade, fazendo deste gene um forte
candidato à obesidade na Síndrome de Prader-Willi.
Objetivos:
Estudar os níveis de expressão de MAGEL2 no sangue de indivíduos obesos e comparar com os
níveis de expressão de indivíduos não obesos.
Metodos:
Estudamos 16 pacientes obesos e 16 controles de ambos os gêneros com idade média de 42,6
anos (Aprovação do Comitê de Ética CAAE 17053713.7.0000.5138). O isolamento de RNA foi
realizado por Trizol e o cDNA sintetizado por transcriptase reversa. A quantificação do cDNA foi
realizada por PCR em tempo real com sondas TaqMan, tendo o gene ACTB (beta actina) como
controle endógeno.
Resultados:
Os resultados de expressão gênica mostram uma amplificação tardia para o gene MAGEL2 com
um Ct médio de 37,8 para o grupo obeso e 36,0 para o grupo controle. Já os resultados do controle
endógeno ACTB mostram uma amplificação precoce com Ct médio de 28,7 e Ct 24,7 para o grupo
obeso e controle respectivamente.
Conclusão:
Não observamos diferenças nos níveis de expressão nos dois grupos estudados. Este estudo
mostra também que a expressão de MAGEL2 no sangue é muito baixa e este gene não serviria
como marcador biológico de predisposição de obesidade para estudos em sangue periférico.
Apoio Financeiro:
Não observamos diferenças nos níveis de expressão nos dois grupos estudados. Este estudo
mostra também que a expressão de MAGEL2 no sangue é muito baixa e este gene não serviria
como marcador biológico de predisposição de obesidade para estudos em sangue periférico.
Comitê de Ética:
CAAE 17053713.7.0000.5138
23.007 PGC-1&beta; regula o crescimento de células tumorais de mama com
superexpressão de Her2
Victorino, V. J. , Assunção, A. K. M. , Barroso, W. A. , Lima, T. M. , Ariga, S. K. , Souza, H. P. ,
Ciências Médicas - FMUSP
Introducao:
O câncer de mama consiste na neoplasia maligna mais incidente entre mulheres. O status de
atividade metabólica é essencial para a célula determinar se irá proliferar ou ativar mecanismos de
morte. A família de coativadores da transcrição gênica da família PGC-1 exerce funções cruciais no
metabolismo energético celular, regulando a biogênese mitocondrial e o metabolismo oxidativo.
Alguns trabalhos na literatura mostram alterações de PGC-1&alpha;/b no desenvolvimento do
câncer de mama. Contudo, mecanismos envolvidos na proliferação celular do câncer de mama em
diferentes subtipos moleculares permanecem desconhecidos.
Objetivos:
Determinar se os coativadores PGC-1&alpha;/b estão envolvidos na proliferação de células
tumorais de mama de diferentes subtipos moleculares.
Metodos:
Foram utilizadas as linhagens tumorais de mama triplo negativas (MDA-MB-231), luminais (MCF-7)
e HER2- superexpresso (SKBR3). Como controle, foi utilizada a célula de tecido mamário benigno
MCF10A. A expressão de PGC-1&alpha;/b foi avaliada por PCR. As células SKBR3 foram
transfectadas com RNA de interferência (RNAi) para PGC-1b. O crescimento celular foi avaliado
por contagem de células utilizando câmera de Newbauer e Azul de Tripan. Os resultados foram
analisados aplicando teste estatístico One-Way ANOVA seguido por Tukey, adotando p<0,05 como
significativo. Dados mostrados como média ± erro padrão para dados de PCR e média ± desvio
padrão para outras análises. Os experimentos foram realizados em sextuplicata.
Resultados:
Os resultados mostraram diminuição na expressão de PGC-1&alpha; em MCF-7 (0,01±0,2) e
SKBR3 (0,05±0,3) quando comparado com MCF10A (1±0,1), p<0,05. Não houve alteração
significativa para MDAMB231 (0,25±0,12). A expressão de PGC-1&beta; foi aumentada apenas em
células SKBR3 (3,67±0,1) quando comparadas a MCF10A (1±0,06) (p<0,05). Células MCF-7
(0,31±0,04) e MDAMB231(0,05±0,06) tiveram a expressão de PGC-1&beta; diminuído (p<0,05).
Assim, as células SKBR3 foram tratadas com RNAi para PGC-1&beta; com duas sequências (RNAi
Sequência1= 0,42±0,08; RNAi Sequência 2= 0,8±0,04) diminuindo significativamente sua
expressão quando comparado ao controle negativo (1±0,18). Após 72 horas de tratamento, as
células foram contadas mostrando diminuição significativa no número de células com knockdown
de PGC-1&beta; (RNAi Sequência1= 33±6 x104 células; RNAi Sequência 2= 64±10 x104 células)
quando comparados ao controle (104±13 x104 células). O número de células após tratamento com
RNAi correlacionou positivamente com os níveis de expressão de PGC-1&beta; (r²=0,86).
Conclusão:
PGC-1&beta; parece regular o crescimento de células tumorais de mama com Her2 superexpresso.
Apoio Financeiro:
PGC-1&beta; parece regular o crescimento de células tumorais de mama com Her2 superexpresso.
Comitê de Ética:
Cultura de C&eacute;lulas
23.008 AVALIAÇÃO DO EFEITO DE CORRENTES ELÉTRICAS CONTÍNUAS DE
BAIXA INTENSIDADE EM DOIS MODELOS CELULARES: Candida albicans e
Leishmania amazonensis
Barbosa, G. M. , Capella, F. N. C. , Santos, A. L. S. , Quaresma, C. H. ,
Departamento de Fármacos e Medicamentos - UFRJ
Departamento de Microbiologia Geral - UFRJ
Introducao:
Correntes elétricas contínuas de baixa intensidade (CE) atualmente são utilizadas com diferentes
finalidades terapêuticas, entre elas, a indução de morte celular, como observado em diversos
relatos com tumores. Importantes estudos relataram também o uso de CE sobre diferentes
microrganismos, como fungos e bactérias. Nesse contexto, o foco do presente trabalho foi avaliar o
efeito da eletroterapia sobre dois microrganismos, causadores de patologias que representam um
importante problema de saúde publica: uma espécie fúngica (Candida albicans) e um protozoário
(Leishmania amazonensis).
Objetivos:
Avaliar o efeito de correntes elétricas contínuas de baixa intensidade sobre a viabilidade de C.
albicans e L. amazonensis.
Metodos:
C. albicans e L. amazonensis foram submetidas a 2,0 mA de corrente elétrica (CE) em diferentes
tempos de tratamento, em um aparato experimental desenvolvido para avaliar in vitro três
condições experimentais distintas: Fluxo Anódico (FA ou pólo positivo), Fluxo Eletroiônico (FEI) e
Fluxo Catódico (FC ou pólo negativo). No FEI não há contato direto com os eletrodos, ocorrendo
apenas o contato das células com elétrons e não com produtos de eletrólise, como ocorre no FA e
FC. Após o tratamento, as leveduras de C. albicans tratadas e não tratadas (controle) foram
plaqueadas em ágar nutriente a fim de avaliar o crescimento de colônias após 48 horas, através da
contagem de unidades formadoras de colônias (UFC). As promastigotas de L. amazonensis
tratadas e não tratadas foram submetidas a diferentes ensaios de viabilidade: contagem em câmara
de Neubauer para verificar a motilidade flagelar (MF), incorporação de iodeto de propídio (PI) e
resazurina.
Resultados:
Os resultados com C. albicans demonstraram que 1 minuto de tratamento com 2,0 mA de CE não
induziu crescimento de colônias após 48 horas, diferente do controle, no qual houve formação de
cerca de 200 UFC, aproximadamente. Entretanto, o FC e o FEI não promoveram variações
estatísticas significativas de viabilidade celular, quando comparados ao controle, até o tempo
máximo de tratamento de 20 minutos. Foram realizados, no mínimo, 3 experimentos em duplicata
para cada tempo avaliado. Os resultados preliminares com L. amazonensis no FA, através das três
metodologias utilizadas, demonstraram uma redução tempo-dependente de viabilidade celular, ou
seja, a redução de viabilidade foi proporcional ao aumento do tempo de tratamento (2, 4, 6, 8 e 10
minutos). Os percentuais de incorporação de PI observados para L. amazonensis no FA foram,
respectivamente: 17, 31, 37, 51 e 97%. Esses dados indicam morte celular, pois o reagente PI
penetra apenas em células nas quais a permeabilidade de membrana plasmática apresenta-se
alterada. Nesse ensaio, o controle apresentou incorporação de cerca de 9% de PI. Entretanto, para
esse protozoário, os dados preliminares não demonstraram variação estatística significativa no FC
pelo método de incorporação de PI, mas houve redução do número total de células, quando foi
verificada a MF.
Conclusão:
A partir dos resultados obtidos, foi possível verificar o efeito de morte celular induzido pela corrente
elétrica, sendo que tal observação é dependente da polaridade e do tempo de exposição à CE,
assim como da espécie de microrganismo tratada, devido às características intrínsecas de cada
espécie, modificando a resposta observada. Portanto, a eletroterapia representa um tratamento em
potencial para infecções locais causadas por microrganismos.
Apoio Financeiro:
A partir dos resultados obtidos, foi possível verificar o efeito de morte celular induzido pela corrente
elétrica, sendo que tal observação é dependente da polaridade e do tempo de exposição à CE,
assim como da espécie de microrganismo tratada, devido às características intrínsecas de cada
espécie, modificando a resposta observada. Portanto, a eletroterapia representa um tratamento em
potencial para infecções locais causadas por microrganismos.
Comitê de Ética:
Nesse trabalho foram realizados experimentos in vitro apenas. N&atilde;o foram realizados
experimentos em animais nem experimentos clinicos.
&nbsp;
23.009 IMPACTO DO TRATAMENTO COM O FULEROL NA TOXICIDADE E
EFICÁCIA DO ANTIMONIATO DE MEGLUMINA EM MODELO MURINO DE
LEISHMANIOSE VISCERAL
Ramos, G. S. , Reis, P. G. , Souza, D. M. , Ladeira, M. S. , Ladeira, L. O. , Pinheiro, M. V. B. ,
Campos, P. P. , Melo, M. N. , Frezard, F. J. G. ,
Fisiologia e Biofísica - ICB/UFMG
Parasitologia - ICB/UFMG
Patologia - ICB/UFMG
Físíca - ICEX/UFMG
Introducao:
Os antimoniais pentavalentes, tal como Glucantime® (Gluc) são fármacos de primeira escolha para
o tratamento das leishmanioses em vários países, incluindo o Brasil. Todavia, a utilização desse
medicamento,
acarreta
diversos
efeitos
adversos
graves,
dentre
eles,
cardiotoxicidade,
hepatotoxicidade e pancreatite. O Fulerol (Ful), é uma nanoestrutura esférica de carbono solúvel
em água e um potente antioxidante com alta capacidade de complexar radicais livres e prevenir a
toxicidade de fármacos mediada por estresse oxidativo.
Objetivos:
Avaliar o efeito do co-tratamento com o fulerol, na hepatotoxicidade e atividade antileishmania do
glucantime em modelo murino de Leishmaniose Visceral (LV).
Metodos:
Fêmeas de camundongos BALB/c foram infectadas com Leishmania infantum e tratadas por via
intraperitoneal com Gluc 120mg Sb/kg/dia em associação ou não com Fulerol na forma livre (0,05
mg/kg/dia) ou encapsulada em lipossomas (0,05 mg/kg/4 dias) durante 20 dias (n = 6 por grupo).
Os grupos controle receberam Salina ou Ful (CETEA protocolo nº 46/2013). Após o tratamento, os
animais foram sacrificados e o baço e o fígado foram retirados para determinação da carga
parasitária por PCR quantitativa. Além disso, os níveis hepáticos de antimônio (Sb) foram
determinados utilizando espectroscopia de absorção atômica em forno de grafite e o fígado foi
processado para histologia, coradas em H&E e analisados digitalmente no programa Image
Pro-Plus para investigar alterações morfológicas nos hepatócitos, como degeneração hidrópica e
índice apoptótico. A presença de corpos apoptóticos foi avaliada também semi-quantitativamente
através da técnica de TUNEL utilizando um kit comercial. A análise estatística dos dados foi
realizada utilizando One-Way ANOVA no software Prisma 5.0.
Resultados:
A análise histopatológica no fígado dos animais que receberam Gluc mostrou hepatócitos
predominantemente ingurgitados e uma alta proporção de áreas lucentes (31,5% ± 1,1) indicando
degeneração hidrópica. Notou-se também um elevado índice apoptótico nos hepatócitos do grupo
tratado com Gluc (10,9% ± 1,8), corroborado através do método TUNEL indicando núcleos com
cromatina condensada e corados em marrom.O grupo tratado com Gluc associado ao Ful mostrou
uma redução significativa dessas alterações hepáticas (7,1% ± 1,1 e 5,5% ± 1,1 para degeneração
hidrópica e apoptose, respectivamente). Ademais, foi demonstrado, de forma surpreendente e
inédito, que o Ful livre ou encapsulado foi capaz de reduzir a carga parasitária hepática em nível
equivalente ao observado pelo Gluc (número de parasitos: Ful, 1,6±1,0 x108; Ful encapsulado,
0,86±0,32x108; Gluc, 2,2±1,2 x108) quando comparado ao grupo salina (12,7±6,4 x108). A
captação hepática de Sb não foi afetada pelo co-tratamento com o Ful.
Conclusão:
O tratamento com Ful apresenta a dupla capacidade de exercer atividade antileishmania em
modelo de LV, sem efeitos adversos aparentes, bem como de reduzir os efeitos deletérios do Gluc
no fígado sem interferir nas propriedades farmacológicas deste.
Apoio Financeiro:
O tratamento com Ful apresenta a dupla capacidade de exercer atividade antileishmania em
modelo de LV, sem efeitos adversos aparentes, bem como de reduzir os efeitos deletérios do Gluc
no fígado sem interferir nas propriedades farmacológicas deste.
Comitê de Ética:
CETEA protocolo nº 46/2013