Anti HBc
Ref. 414
Sistema para a determinação qualitativa de anticorpos totais contra o antígeno core do vírus da hepatite B
(anti-HBc) em soro ou plasma.
ELISA - Competição
PREPARO DA SOLUÇÃO DE LAVAGEM
A Solução de Lavagem deve ser diluída 1:10 com água deionizada. Adicionar 50 mL da Solução de Lavagem
concentrada (no 3) a 450 mL de água. Estável 2 semanas entre 2 – 8 °C.
Para preparar volumes menores seguir a tabela abaixo:
Nº Tiras requeridas
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
Solução Lavagem Concentrada (mL)
4
8
12
16
20
24
28
32
36
40
44
Água purificada (mL)
36
72
108
144
180
216
252
288
324
360
396
PREPARO DA SOLUÇÃO SUBSTRATO-CROMÓGENO (Preparar 10 minutos antes do uso)
O reagente Cromógeno (no 5) congela a temperatura ≤18 °C. Deixar atingir a temperatura ambiente (20 - 25 °C)
para que descongele completamente e homogeneizar bem antes de usar. Preparar 10 minutos antes do uso.
Adicionar 0,28 mL do Cromógeno (no 5) diretamente no frasco de Tampão Substrato (no 4) que contém 14 mL e
homogeneizar bem. A solução para uso é incolor e deve ser mantida em recipiente vedado e ao abrigo da luz.
Descartar caso se torne azul. No caso de não utilizar uma placa completa, preparar o volume de solução
necessária, de acordo com a tabela abaixo:
Nº Tiras requeridas
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
Tampão Substrato (mL)
1,0
2,0
3,0
4,0
5,0
6,0
7,0
8,0
9,0
10,0
11,0
Cromógeno (mL)
0,02
0,04
0,06
0,08
0,10
0,12
0,14
0,16
0,18
0,20
0,22
VALIDAÇÃO DO ENSAIO
As absorbâncias devem ser consideradas após subtração do branco de substrato.
O não cumprimento de qualquer destes critérios INVALIDA o ensaio analítico.
Branco do Substrato
Controle Negativo
Controle Positivo
Absorbância ≤ 0,100
Cada replicata não deve variar mais que 20% da média das quatro replicatas.
A média das absorbâncias deve ser ≥ 0,600.
A média das absorbâncias deve ser ≤ 0,100
RESULTADOS
1- Calcular a média das absorbâncias do Controle Negativo e do Controle Positivo. Somar as duas médias e
multiplicar o resultado por 0,4. O valor que se obtém é o Cut-off do ensaio.
Cut-off = ( x CN + x CP) X 0,4
2-Dividir a absorbância de cada amostra pelo Cut-off.
3- Resultados:
Amostra
Reativa ou Positiva
Não Reativa ou Negativa
Inconclusiva
Relação Absorbância / Cut-off
< 0,90
≥ 1,10
≥ 0,90 e < 1,10
1
Anti HBc
1
PROCEDIMENTO
Deixar um poço vazio para o Branco do Substrato.
Ø
2
Transferir 0,05 mL do Controle Positivo (2 replicatas), Controle Negativo (4 replicatas) e amostras aos poços
correspondentes.
Ø
3
Adicionar 0,05 mL de Conjugado (no 2) em todos os poços, exceto ao poço reservado para o Branco de
Substrato.
Ø
4
Cobrir a placa com uma folha adesiva, agitar delicadamente e incubar a 37 °C por 60 minutos.
Ø
5
Retirar e descartar a folha adesiva.
Aspirar o conteúdo dos poços e enchê-los completamente (± 0,350 mL) com a Solução de Lavagem diluída.
Repetir o processo de aspiração e lavagem mais 3 vezes, perfazendo um total de 4 ciclos de lavagem.
Manter a solução de lavagem nos poços por pelo menos 15 segundos antes de cada ciclo de aspiração.
Após a última lavagem, golpear a placa invertida sobre um papel absorvente para eliminar o excesso de
líquido
Ø
6
Adicionar 0,1 mL da Solução Substrato-Cromógeno diluída em todos os poços, inclusive no poço
reservado ao Branco de Substrato.
Ø
7
Incubar 30 minutos à temperatura ambiente (20 - 25 ºC) e ao abrigo da luz.
Ø
8
Adicionar 0,1 mL da Solução de Parada (no 8) a todos os poços, respeitando a mesma sequência e os
mesmos intervalos de tempo da adição da solução Substrato-Cromógeno.
Ø
9
Ajustar o zero da leitora com o poço reservado ao Branco de Substrato em 450 nm e medir a absorbância
em cada um dos poços no prazo máximo de 30 minutos.
Recomenda-se realizar leitura bicromática utilizando filtro secundário de 620 - 630 nm.
ORIENTAÇÕES
D Ler as instruções de uso do produto.
D Todos os reagentes devem estar à temperatura ambiente (20 - 25 °C) antes de iniciar o ensaio.
D Os reagentes líquidos devem ser homogeneizados suavemente antes do uso.
D Realizar as leituras no prazo máximo de 30 minutos após a adição da Solução Substrato-Cromógeno.
D Caso a leitora não permita o ajuste do zero com o Branco do Substrato, é necessário subtrair seu valor das
absorbâncias das amostras e controles.
2
Anti HBc IgM
Ref. 415
Sistema para a determinação qualitativa de anticorpos IgM contra o antígeno core do vírus da hepatite B
(anti-HBc IgM) em soro ou plasma.
ELISA – Imunocaptura
PREPARO DA SOLUÇÃO DE LAVAGEM
A Solução de Lavagem Concentrada (no 5) deve ser diluída 1:25 com água deionizada.
Adicionar 40 mL da Solução de Lavagem Concentrada a 960 mL de água. Estável 1 semana entre 2 – 8 °C.
Para preparar volumes menores seguir a tabela abaixo:
Nº Tiras requeridas
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
Solução Lavagem Concentrada (mL)
7
10
13
16
19
22
25
28
31
34
37
168
240
312
384
456
528
600
672
744
816
888
Água purificada (mL)
PREPARO DO CONJUGADO (Preparar no momento do Uso)
O Conjugado Concentrado (no 2) deve ser diluído 1:50 com o Diluente do Conjugado (no 3).
Adicionar 0,24 mL do Conjugado Concentrado a 11,76 mL do Diluente de Conjugado. No caso de não utilizar uma
placa completa, preparar o volume de solução necessária, de acordo com a tabela abaixo:
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
Diluente Conjugado (mL)
0,98
1,96
2,94
3,92
4,90
5,88
6,86
7,84
8,82
9,80
10,78
Conjugado Concentrado (mL)
0,02
0,04
0,06
0,08
0,10
0,12
0,14
0,16
0,18
0,20
0,22
Nº Tiras requeridas
DILUIÇÃO DAS AMOSTRAS
As amostras devem ser diluídas 1/4000 antes de iniciar o ensaio.
Colocar 0,99 mL de Diluente de Amostras (no 4) em um tubo. Adicionar 0,01 mL de amostra e homogeneizar bem.
Em outro tubo adicionar 0,39 mL de Diluente de Amostras (no 4). Adicionar 0,01 mL da diluição do 1º tubo.
Homogeneizar bem. O fator de diluição no 2º tubo será 1/4000.
NÃO DILUIR O CALIBRADOR E OS CONTROLES. ELES ESTÃO PRONTOS PARA USO.
VALIDAÇÃO DO ENSAIO
As absorbâncias devem ser consideradas após subtração do branco de substrato.
O não cumprimento de qualquer destes critérios INVALIDA o ensaio analítico.
Branco do substrato
Calibrador
Controle Negativo
Controle Positivo
C. Positivo – C. Negativo
Absorbância ≤ 0,150
A absorbância de cada replicata deve ser < 0,120.
Se uma replicata se encontrar fora deste intervalo, deve-se descartá-la e calcular
a média com os outros 2 valores.
Se 2 replicatas se encontrarem fora deste intervalo, o teste deve ser repetido.
A média das absorbâncias deve ser < 0,120.
Absorbância < 0,120
Absorbância entre 0,500 e 2,500
> 0,450
RESULTADOS
1- Calcular a média das absorbâncias do Calibrador e somar 0,200. O valor que se obtém é o Cut-off do ensaio.
Cut-off = x Calibrador + 0,200
2-Dividir a absorbância de cada amostra pelo Cut-off.
3- Resultados:
Amostra
Reativa ou Positiva
Não Reativa ou Negativa
Inconclusiva
Relação Absorbância / Cut-off
≥ 1,10
< 0,90
≥ 0,90 e < 1,10
Anti HBc IgM
1
PROCEDIMENTO
Deixar um poço vazio para o Branco do Substrato.
Ø
2
Adicionar 0,1 mL do Controle Positivo e Controle Negativo (1 replicata de cada), Calibrador (3 replicatas) e
as amostras diluídas aos poços correspondentes.
O Calibrador e os Controles estão prontos para uso.
Ø
3
Cobrir a placa com uma folha adesiva, agitar delicadamente e incubar a 37 °C por 120 minutos.
Ø
4
Retirar e descartar a folha adesiva.
Aspirar o conteúdo dos poços e enchê-los completamente (± 0,350 mL) com a Solução de Lavagem diluída.
Repetir o processo de aspiração e lavagem mais 4 vezes, perfazendo um total de 5 ciclos de lavagem.
Manter a solução de lavagem nos poços por pelo menos 30 segundos antes de cada ciclo de aspiração.
Após a última lavagem, golpear a placa invertida sobre um papel absorvente para eliminar o excesso de
líquido.
Ø
5
Adicionar 0,1 mL do Conjugado diluído a cada poço, exceto ao poço reservado ao Branco de Substrato.
Evitar a formação de bolhas.
Ø
6
Cobrir a placa com uma nova folha adesiva e incubar 60 minutos à 37 ºC.
Ø
7
Ao final da incubação, retirar a folha adesiva. Aspirar e lavar a placa como no passo 4.
Ø
8
Adicionar 0,1 mL da Solução Substrato-Cromógeno (no 6) em todos os poços, inclusive no poço
reservado para o Branco de Substrato.
Ø
9
Incubar por 30 minutos à temperatura ambiente ( 20 a 25 °C) e ao abrigo da luz.
Ø
10
Parar a reação adicionando 0,1 mL da Solução de Parada (no 10) em cada poço, respeitando a mesma
sequencia e intervalos de tempo observados na adição da Solução Substrato-Cromógeno.
Ø
11
Ajustar o zero da leitora com o poço reservado ao Branco de Substrato em 450 nm e medir a absorbância
em cada um dos poços no prazo máximo de 30 minutos.
Recomenda-se realizar leitura bicromática utilizando filtro secundário de 620 - 630 nm.
ORIENTAÇÕES
D Ler as instruções de uso do produto.
D Todos os reagentes devem estar à temperatura ambiente (20 - 25 °C) antes de iniciar o ensaio.
D Os reagentes líquidos devem ser homogeneizados suavemente antes do uso.
D Realizar as leituras no prazo máximo de 30 minutos após a adição da Solução Substrato-Cromógeno.
D Caso a leitora não permita o ajuste do zero com o Branco do Substrato, é necessário subtrair seu valor das
absorbâncias das amostras e controles.
Anti HBe
Ref. 417
Sistema para a determinação qualitativa de anticorpos específicos contra o antígeno “e” do vírus da
hepatite B (anti-HBe) em soro ou plasma.
ELISA - Competição
PREPARO DA SOLUÇÃO DE LAVAGEM
A Solução de Lavagem Concentrada (no 6) deve ser diluída 1:25 com água deionizada.
Adicionar 40 mL da Solução de Lavagem Concentrada a 960 mL de água. Estável 1 semana entre 2 - 8 °C.
Para preparar volumes menores seguir a tabela abaixo:
Nº Tiras requeridas
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
Solução Lavagem Concentrada (mL)
3
6
9
12
15
18
21
24
27
30
33
Água purificada (mL)
72
144
216
288
360
432
504
576
648
720
792
PREPARO DO CONJUGADO (Preparar no momento do Uso)
O Conjugado Concentrado (no 2) deve ser diluído 1:50 com o Diluente do Conjugado (no 3).
Adicionar 0,24 mL do Conjugado Concentrado a 11,76 mL do Diluente de Conjugado. No caso de não utilizar uma
placa completa, preparar o volume de solução necessária, de acordo com a tabela abaixo:
Nº Tiras requeridas
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
Diluente Conjugado (mL)
0,98
1,96
2,94
3,92
4,90
5,88
6,86
7,84
8,82
9,80
10,78
Conjugado Concentrado (mL)
0,02
0,04
0,06
0,08
0,10
0,12
0,14
0,16
0,18
0,20
0,22
VALIDAÇÃO DO ENSAIO
As absorbâncias devem ser consideradas após subtração do branco de substrato.
O não cumprimento de qualquer destes critérios INVALIDA o ensaio analítico.
Branco do substrato
Calibrador
Controle Negativo
Controle Positivo
C. Negativo – C. Positivo
Absorbância ≤ 0,150
A absorbância de cada replicata deve estar entre 0,500 e 2,500.
Se uma replicata se encontrar fora deste intervalo, deve-se descartá-la e calcular
a média com os outros 2 valores.
Se 2 replicatas se encontrarem fora deste intervalo, o teste deve ser repetido.
Absorbância entre 0,500 e 2,500.
Absorbância entre 0,050 e 0,300.
> 0,250
RESULTADOS
1- Calcular a média das absorbâncias do Calibrador e multiplicar por 0,5. O valor que se obtém é o Cut-off do
ensaio.
Cut-off = x Calibrador x 0,5
2-Dividir a absorbância de cada amostra pelo Cut-off.
3- Resultados:
Amostra
Reativa ou Positiva
Não Reativa ou Negativa
Inconclusiva
Relação Absorbância / Cut-off
< 0,90
≥ 1,10
≥ 0,90 e < 1,10
Anti HBe
1
PROCEDIMENTO
Deixar um poço vazio para o Branco do Substrato.
Ø
2
Transferir 0,05 mL do de Tampão de Incubação (no 4) a todos os poços, exceto ao poço reservado ao
Branco de Substrato.
Ø
3
Adicionar 0,05 mL do Controle Positivo e Controle Negativo (1 replicata de cada), Calibrador (3 replicatas) e
amostras aos poços correspondentes.
Ø
4
Adicionar 0,05 mL de Solução Neutralizante (no 5) a todos os poços, exceto ao poço reservado ao Branco
do Substrato.
Ø
5
Cobrir a placa com uma folha adesiva, agitar delicadamente e incubar a 37 °C por 120 minutos.
Ø
6
Retirar e descartar a folha adesiva.
Aspirar o conteúdo dos poços e enchê-los completamente (± 0,350 mL) com a Solução de Lavagem diluída.
Repetir o processo de aspiração e lavagem mais 4 vezes, perfazendo um total de 5 ciclos de lavagem.
Manter a solução de lavagem nos poços por pelo menos 30 segundos antes de cada ciclo de aspiração.
Após a última lavagem, golpear a placa invertida sobre um papel absorvente para eliminar o excesso de
líquido.
Ø
7
Adicionar 0,1 mL do Conjugado diluído a cada poço, exceto ao poço reservado ao Branco do Substrato.
Evitar a formação de bolhas.
Ø
8
Cobrir a placa com uma nova folha adesiva e incubar 60 minutos à 37 ºC.
Ø
9
Ao final da incubação, retirar a folha adesiva. Aspirar e lavar a placa como no passo 6.
Ø
10
Adicionar 0,1 mL da Solução Substrato-Cromógeno (no 7) em todos os poços, inclusive no poço
reservado para o Branco de Substrato.
Ø
11
Incubar por 30 minutos à temperatura ambiente ( 20 a 25 °C) e ao abrigo da luz.
Ø
12
Parar a reação adicionando 0,1 mL da Solução de Parada (no 11) em cada poço, respeitando a mesma
sequencia e intervalos de tempo observados na adição da Solução Substrato-Cromógeno.
Ø
13
Ajustar o zero da leitora com o poço reservado ao Branco de Substrato em 450 nm e medir a absorbância
em cada um dos poços no prazo máximo de 30 minutos.
Recomenda-se realizar leitura bicromática utilizando filtro secundário de 620 - 630 nm.
ORIENTAÇÕES
D Ler as instruções de uso do produto.
D Todos os reagentes devem estar à temperatura ambiente (20 - 25 °C) antes de iniciar o ensaio.
D Os reagentes líquidos devem ser homogeneizados suavemente antes do uso.
D Realizar as leituras no prazo máximo de 30 minutos após a adição da Solução Substrato-Cromógeno.
D Caso a leitora não permita o ajuste do zero com o Branco do Substrato, é necessário subtrair seu valor das
absorbâncias das amostras e controles.
Anti HBs
Ref. 413
Sistema para a determinação qualitativa e quantitativa de anticorpos específicos contra o antígeno de
superfície do vírus da hepatite B (anti-HBs) em soro ou plasma.
ELISA – Sanduíche (Ag-Ac-Ag)
PREPARO DA SOLUÇÃO DE LAVAGEM
A Solução de Lavagem Concentrada (no 3) deve ser diluída 1:10 com água deionizada.
Adicionar 50 mL da Solução de Lavagem Concentrada a 450 mL de água. Estável 2 semanas entre 2 – 8 °C.
Para preparar volumes menores seguir a tabela abaixo:
Nº Tiras requeridas
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
Solução Lavagem Concentrada (mL)
4
8
12
16
20
24
28
32
36
40
44
Água purificada (mL)
36
72
108
144
180
216
252
288
324
360
396
PREPARO DA SOLUÇÃO SUBSTRATO-CROMÓGENO (Preparar 10 minutos antes do Uso)
O reagente Cromógeno (no 5) congela a temperatura ≤18 °C. Deixar atingir a temperatura ambiente (20 - 25 °C)
para que descongele completamente e homogeneizar bem antes de usar. Adicionar 0,28 mL do Cromógeno (no 5)
diretamente ao frasco de Tampão Substrato (no 4) que contém 14 mL e homogeneizar bem. A solução para uso é
rósea e deve ser mantida em recipiente vedado e ao abrigo da luz. Descartar caso se torne azul. No caso de não
utilizar uma placa completa, preparar o volume de solução necessária, de acordo com a tabela abaixo:
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
Tampão Substrato (mL)
1,0
2,0
3,0
4,0
5,0
6,0
7,0
8,0
9,0
10,0
11,0
Cromógeno (mL)
0,02
0,04
0,06
0,08
0,10
0,12
0,14
0,16
0,18
0,20
0,22
Nº Tiras requeridas
VALIDAÇÃO DO ENSAIO (O ensaio será considerado válido apenas se cumprir os critérios abaixo):
As absorbâncias devem ser consideradas após subtração do branco de substrato.
O não cumprimento de qualquer destes critérios INVALIDA o ensaio analítico.
Branco do Substrato
Controle Negativo
Calibrador Positivo Baixo
Calibrador Positivo Alto
Absorbância ≤ 0,100
Absorbância < 0,100
Absorbância > 0,070
Deve também ser maior que o dobro da média do Controle Negativo.
Absorbância entre 0,800 e 2,100
RESULTADOS QUALITATIVOS
1- Calcular a média das absorbâncias do Calibrador Positivo Baixo. O valor que se obtém é o Cut-off do ensaio.
Cut-off = média Calibrador Positivo Baixo
2-Dividir a absorbância de cada amostra pelo Cut-off.
3- Resultados:
Amostra
Relação Absorbância / Cut-off
Reativa ou Positiva
≥ 1,10
Não Reativa ou Negativa
< 0,90
Inconclusiva
≥ 0,90 e < 1,10
RESULTADOS QUANTITATIVOS
1- Calcular a média das absorbâncias do Controle Negativo. A concentração de anti-HBs é Zero.
2- Calcular a média das absorbâncias do Calibrador Positivo Baixo. A concentração de anti-HBs é de 10 mUI/mL.
3- Calcular a média das absorbâncias do Calibrador Positivo Alto. A concentração de anti-HBs é de 100 mUI/mL.
4- Representar em uma folha de papel milimetrado, as médias das absorbâncias dos calibradores e controle na
ordenada (eixo y) contra suas respectivas concentrações em mUI/mL na abscissa (eixo x).
5- Traçar uma linha passando pelos 3 pontos.
6- Utilizando o gráfico é possível encontrar as concentrações das amostras a partir de suas absorbâncias.
Para facilitar os cálculos, utilizar a planilha: anti-HBs – RESULTADOS QUANTITATIVOS, disponível em
www.labtest.com.br.
Anti HBs
1
PROCEDIMENTO
Deixar um poço vazio para o Branco do Substrato.
Ø
2
Transferir 0,1 mL do Controle Negativo, Calibrador Positivo Baixo, Calibrador Positivo Alto (2 replicatas de
cada) e amostras aos poços correspondentes.
Ø
3
Cobrir a placa com uma folha adesiva, agitar delicadamente e incubar a 37 °C por 60 minutos.
Ø
4
Retirar e descartar a folha adesiva.
Aspirar o conteúdo dos poços e enchê-los completamente (± 0,350 mL) com a Solução de Lavagem diluída.
Repetir o processo de aspiração e lavagem mais 3 vezes, perfazendo um total de 4 ciclos de lavagem.
Manter a solução de lavagem nos poços por pelo menos 15 segundos antes de cada ciclo de aspiração.
Após a última lavagem, golpear a placa invertida sobre um papel absorvente para eliminar o excesso de
líquido.
Ø
5
Adicionar 0,1 mL do Conjugado (no 2) em todos os poços, exceto ao poço reservado ao Branco de
Substrato.
Ø
6
Cobrir a placa com uma folha adesiva e incubar a 37 °C por 30 minutos.
Ø
7
Adicionar 0,1 mL da Solução Substrato-Cromógeno diluída em todos os poços, inclusive no poço
reservado ao Branco de Substrato.
Ø
8
Incubar 30 minutos à temperatura ambiente (20 - 25 ºC) e ao abrigo da luz.
Ø
9
Adicionar 0,1 mL da Solução de Parada (no 9) a todos os poços, respeitando a mesma sequência e os
mesmos intervalos de tempo da adição da solução Substrato-Cromógeno.
Ø
10
Ajustar o zero da leitora com o poço reservado ao Branco de Substrato em 450 nm e medir a absorbância
em cada um dos poços no prazo máximo de 30 minutos.
Recomenda-se realizar leitura bicromática utilizando filtro secundário de 620 - 630 nm.
ORIENTAÇÕES
D Ler as instruções de uso do produto.
D Todos os reagentes devem estar à temperatura ambiente (20 - 25 °C) antes de iniciar o ensaio.
D Os reagentes líquidos devem ser homogeneizados suavemente antes do uso.
D Realizar as leituras no prazo máximo de 30 minutos após a adição da Solução Substrato-Cromógeno.
D Caso a leitora não permita o ajuste do zero com o Branco do Substrato, é necessário subtrair seu valor das
absorbâncias das amostras e controles.
Ref. 421
CHAGAS
Sistema para a determinação qualitativa de anticorpos totais específicos anti-Trypanosoma cruzi em soro
ou plasma.
ELISA – Indireto (Ag-Ac-Ac)
PREPARO DA SOLUÇÃO DE LAVAGEM
A Solução de Lavagem Concentrada deve ser diluída 1:10 com água deionizada. Adicionar 50 mL da Solução de
Lavagem concentrada (no 5) a 450 mL de água. Estável 2 semanas entre 2 – 8 °C.
Para preparar volumes menores seguir a tabela abaixo:
Nº Tiras requeridas
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
Solução Lavagem Concentrada (mL)
4
8
12
16
20
24
28
32
36
40
44
Água purificada (mL)
36
72
108
144
180
216
252
288
324
360
396
PREPARO DO CONJUGADO (Preparar no momento do uso)
O Conjugado Concentrado (no 2) deve ser diluído 1:51 com o Diluente do Conjugado (no 3). Adicionar 3,0 mL de
Conjugado Concentrado ao frasco que contém 15 mL de Diluente de Conjugado e homogeneizar suavemente.
Preparar no momento do uso. No caso de não utilizar uma placa completa, preparar o volume de solução
necessária, de acordo com a tabela abaixo:
Nº Tiras requeridas
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
Diluente de Conjugado (mL)
1,0
2,0
3,0
4,0
5,0
6,0
7,0
8,0
9,0
10,0
11,0
Conjugado Concentrado (mL)
0,02
0,04
0,06
0,08
0,10
0,12
0,14
0,16
0,18
0,20
0,22
PREPARO DA SOLUÇÃO SUBSTRATO-CROMÓGENO (Preparar 10 minutos antes do Uso)
O reagente Cromógeno (no 7) congela a temperatura ≤18 °C. Deixar atingir a temperatura ambiente (20 - 25 °C)
para que descongele completamente e homogeneizar bem antes de usar. Preparar 10 minutos antes do uso.
Adicionar 0,28 mL do Cromógeno (no 7) diretamente no frasco de Tampão Substrato (no 4) que contem 14 mL e
homogeneizar bem. A solução para uso é incolor e deve ser mantida em recipiente vedado e ao abrigo da luz.
Descartar caso se torne azul. No caso de não utilizar uma placa completa, preparar o volume de solução
necessária, de acordo com a tabela abaixo:
Nº Tiras requeridas
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
Tampão Substrato (mL)
1,0
2,0
3,0
4,0
5,0
6,0
7,0
8,0
9,0
10,0
11,0
Cromógeno (mL)
0,02
0,04
0,06
0,08
0,10
0,12
0,14
0,16
0,18
0,20
0,22
VALIDAÇÃO DO ENSAIO
As absorbâncias devem ser consideradas após subtração do branco de substrato.
O não cumprimento de qualquer destes critérios INVALIDA o ensaio analítico.
Branco do Substrato
Controle Negativo
Controle Positivo
Absorbância ≤ 0,100
A absorbância de cada replicata deve ser ≤ 0,200. Se uma replicata se encontrar fora
dessa margem, deve-se descartá-la e calcular a média com os outros 2 valores.
Se 2 replicatas se encontrarem fora dessa margem, o teste deverá ser repetido.
A média das absorbâncias deve ser ≥ 0,600
RESULTADOS
1- Calcular a média das absorbâncias do Controle Negativo e somar 0,300.
O valor que se obtém é o Cut-off do ensaio.
Cut-off = x CN + 0,300
2-Dividir a absorbância de cada amostra pelo Cut-off.
3- Resultados:
Amostra
Reativa ou Positiva
Não Reativa ou Negativa
Inconclusiva
Relação Absorbância / Cut-off
≥ 1,10
< 0,90
≥ 0,90 e < 1,10
CHAGAS
1
PROCEDIMENTO
Deixar um poço vazio para o Branco do Substrato.
Ø
2
Ø
3
Transferir 0,2 mL do Controle Positivo (2 replicatas) e Controle Negativo (3 replicatas) aos poços
correspondentes.
Não diluir os controles, pois estão prontos para uso.
Adicionar 0,2 mL de Diluente de Amostras (no 4) aos poços correspondentes.
Adicionar 0,01 mL de amostra em cada poço de amostra.
Ø
4
Cobrir a placa com uma folha adesiva e incubar a 37 °C por 60 minutos.
Ø
Retirar e descartar a folha adesiva.
Aspirar o conteúdo dos poços e enchê-los completamente (± 0,350 mL) com a Solução de Lavagem diluída.
5
Repetir o processo de aspiração e lavagem mais 3 vezes, perfazendo um total de 4 ciclos de lavagem.
Manter a solução de lavagem nos poços por pelo menos 15 segundos antes de cada ciclo de aspiração.
Após a última lavagem, golpear a placa invertida sobre um papel absorvente para eliminar o excesso de
líquido
Ø
6
Adicionar 0,1 mL do Conjugado diluído em todos os poços, exceto ao poço reservado ao Branco de
Substrato. Evitar a formação de bolhas.
Ø
7
Cobrir a placa com uma nova folha adesiva e incubar a 37 ºC por 30 minutos.
Ø
8
Ao final da incubação retirar a folha adesiva. Aspirar e lavar a placa como no passo 5.
Ø
9
Adicionar 0,1 mL da Solução substrato-Cromógeno diluído em todos os poços, inclusive no poço
reservado ao Branco de Substrato.
Ø
10
Incubar 30 minutos à temperatura ambiente (20 a 25 °C) e ao abrigo da luz.
Ø
11
Adicionar 0,1 mL da Solução de Parada (no 10) a todos os poços, respeitando a mesma sequência e
intervalos de tempo da adição da solução Substrato-Cromógeno.
Ø
12
Ajustar o zero da leitora com o poço reservado ao Branco de Substrato em 450 nm e medir a absorbância
em cada um dos poços no prazo máximo de 30 minutos.
Recomenda-se realizar leitura bicromática utilizando filtro secundário de 620 - 630 nm.
ORIENTAÇÕES
D Ler as instruções de uso do produto.
D Todos os reagentes devem estar à temperatura ambiente (20 - 25 °C) antes de iniciar o ensaio.
D Os reagentes líquidos devem ser homogeneizados suavemente antes do uso.
D Realizar as leituras no prazo máximo de 30 minutos após a adição da Solução Substrato-Cromógeno.
D Caso a leitora não permita o ajuste do zero com o Branco do Substrato, é necessário subtrair seu valor das
absorbâncias das amostras e controles.
Ref. 406
CMV IgG
Sistema para a determinação qualitativa e quantitativa de anticorpos IgG específicos anti-CMV em soro
ou plasma.
ELISA – Indireto (Ag-Ac-Ac)
PREPARO DA SOLUÇÃO DE LAVAGEM
A Solução de Lavagem deve ser diluída 1:10 com água deionizada. Adicionar 50 mL da Solução de Lavagem
concentrada (no 5) a 450 mL de água. Estável 2 semanas entre 2 – 8 °C.
Para preparar volumes menores seguir a tabela abaixo:
Nº Tiras requeridas
Solução Lavagem Concentrada (mL)
Água purificada (mL)
1
4
36
2
8
72
3
12
108
4
16
144
5
20
180
6
24
216
7
28
252
8
32
288
9
36
324
10
40
360
11
44
396
DILUIÇÃO DO CONJUGADO CONCENTRADO (Preparar no momento do Uso)
Diluir o Conjugado Concentrado (no 2) 1/51 com o Diluente do Conjugado (no 3). Adicionar 0,3 mL de Conjugado
Concentrado ao frasco que contém 15 mL de Diluente do Conjugado. Homogeneizar suavemente. No caso de não
utilizar uma placa completa, preparar o volume de solução necessária, de acordo com a tabela abaixo:
2
Nº Tiras requeridas
Diluente do Conjugado (mL)
Conjugado Concentrado (mL)
1
1,0
0,02
2
2,0
0,04
3
3,0
0,06
4
4,0
0,08
5
5,0
0,10
6
6,0
0,12
7
7,0
0,14
8
8,0
0,16
9
9,0
0,18
10
10,0
0,20
11
11,0
0,22
PREPARO DA SOLUÇÃO SUBSTRATO-CROMÓGENO (Preparar 10 minutos antes do Uso)
O reagente Cromógeno (no 7) congela a temperatura ≤18 °C. Deixar atingir a temperatura ambiente (20 - 25 °C)
para que descongele completamente e homogeneizar bem antes de usar. Adicionar 0,28 mL do Cromógeno (no 7)
diretamente no frasco de Tampão Substrato (no 6) que contém 14 mL e homogeneizar bem. Preparar 10 minutos
antes do Uso. A solução para uso é incolor e deve ser mantida em recipiente vedado e ao abrigo da luz.
Descartar caso se torne azul. No caso de não utilizar uma placa completa, preparar o volume de solução
necessária, de acordo com a tabela abaixo:
Nº Tiras requeridas
Tampão Substrato (mL)
Cromógeno (mL)
1
1,0
0,02
2
2,0
0,04
3
3,0
0,06
4
4,0
0,08
5
5,0
0,10
6
6,0
0,12
7
7,0
0,14
8
8,0
0,16
9
9,0
0,18
10
10,0
0,20
11
11,0
0,22
DILUIÇÃO DAS AMOSTRAS
Preparar diluições 1/101 dos Calibradores (no 8 e 9), Controle Negativo (no 10) e amostras.
Exemplo: Pipetar 1,0 mL do Diluente de Amostras (no 4) em um tubo e adicionar 0,01 mL de soro. Homogeneizar
suavemente.
ORIENTAÇÕES
D Ler as instruções de uso do produto.
D Todos os reagentes devem estar à temperatura ambiente (20 - 25 °C) antes de iniciar o ensaio.
D Os reagentes líquidos devem ser homogeneizados suavemente antes do uso.
D Realizar as leituras no prazo máximo de 30 minutos após a adição da Solução Substrato-Cromógeno.
D Caso a leitora não permita o ajuste do zero com o Branco do Substrato, é necessário subtrair seu valor das
absorbâncias das amostras e controles.
CMV IgG
VALIDAÇÃO DO ENSAIO
As absorbâncias devem ser consideradas após subtração do branco de substrato.
O não cumprimento de qualquer destes critérios INVALIDA o ensaio analítico.
Branco do substrato
Controle Negativo
Calibrador Positivo Baixo
Calibrador Positivo Alto
Relação Calibrador Positivo Alto / Calibrador Positivo Baixo
Relação Controle Negativo / Calibrador Positivo baixo
Absorbância ≤ 0,100
Absorbância < 0,100
Absorbância ≥ 0,150
Absorbância ≥ 0,600
≥ 2,0
≤ 0,5
RESULTADOS QUALITATIVOS
1- Calcular a média das absorbâncias do Calibrador Positivo Baixo. O valor que se obtém é o Cut-off do ensaio.
Cut-off = x Calibrador Positivo Baixo
2-Dividir a absorbância de cada amostra pelo Cut-off.
3- Resultados:
Amostra
Reativa ou Positiva
Não Reativa ou Negativa
Inconclusiva
Relação Absorbância / Cut-off
≥ 1,10
< 0,90
≥ 0,90 e < 1,10
RESULTADOS QUANTITATIVOS
1- Calcular a média das absorbâncias do Calibrador Positivo Baixo.
A concentração de IgG anti-CMV é de 0,25 UI/mL.
2- Calcular a média das absorbâncias do Calibrador Positivo Alto.
A concentração de IgG anti-CMV é de 2,5 UI/mL.
3- Representar em folha de papel semi-logaritmico, as médias das absorbâncias dos calibradores na ordenada
(eixo y, linear), contra suas respectivas concentrações em UI/mL na abscissa (eixo x, log).
4- traçar uma linha passando pelos 2 pontos.
5- Utilizando o gráfico é possível encontrar as concentrações das amostras a partir de sua absorbância.
Para facilitar os cálculos dos resultados quantitativos, utilizar planilha: CMV – IgG – RESULTADOS
QUANTITATIVOS, disponível em www.labtest.com.br.
CMV IgG
1
PROCEDIMENTO
Deixar um poço vazio para o Branco do Substrato.
Ø
2
Transferir 0,1 mL do Calibrador Positivo Baixo, Calibrador Positivo Alto e Controle Negativo (2 replicatas de
cada) e amostras aos poços correspondentes.
Diluir Calibradores, Controle e amostras conforme orientação.
Ø
3
Cobrir a placa com uma folha adesiva e incubar a 37 °C por 60 minutos.
Ø
4
Retirar e descartar a folha adesiva.
Aspirar o conteúdo dos poços e enchê-los completamente (± 0,350 mL) com a Solução de Lavagem diluída.
Repetir o processo de aspiração e lavagem mais 3 vezes, perfazendo um total de 4 ciclos de lavagem.
Manter a solução de lavagem nos poços por pelo menos 15 segundos antes de cada ciclo de aspiração.
Após a última lavagem, golpear a placa invertida sobre um papel absorvente para eliminar o excesso de
líquido.
Ø
5
Adicionar 0,1 mL do Conjugado diluído em todos os poços, exceto no poço reservado ao Branco de
Substrato. Evitar a formação de bolhas.
Ø
6
Cobrir a placa com uma nova folha adesiva e incubar a 37 °C por 30 minutos.
Ø
7
Ao final da incubação retirar a folha adesiva.
Aspirar e lavar a placa como no passo 4.
Ø
8
Adicionar 0,1 mL da Solução Substrato-Cromógeno diluída em todos os poços, inclusive no poço
reservado ao Branco de Substrato.
Ø
9
Incubar 30 minutos à temperatura ambiente (20 - 25 ºC) e ao abrigo da luz.
Ø
10
Adicionar 0,1 mL da Solução de Parada (no 11) a todos os poços, respeitando a mesma sequência e os
mesmos intervalos de tempo da adição da solução Substrato-Cromógeno.
Ø
11
Ajustar o zero da leitora com o poço reservado ao Branco de Substrato em 450 nm e medir a absorbância
em cada um dos poços no prazo máximo de 30 minutos.
Recomenda-se realizar leitura bicromática utilizando filtro secundário de 620 - 630 nm.
Ref. 407
CMV IgM
Sistema para a determinação qualitativa e semi-quantitativa de anticorpos IgM específicos anti-CMV em
soro ou plasma.
ELISA – Sanduíche-Imunocaptura (Ac-Ac-Ag)
PREPARO DA SOLUÇÃO DE LAVAGEM
A Solução de Lavagem deve ser diluída 1:10 com água deionizada. Adicionar 50 mL da Solução de Lavagem
concentrada (no 5) a 450 mL de água. Estável 2 semanas entre 2 – 8 °C.
Para preparar volumes menores seguir a tabela abaixo:
Nº Tiras requeridas
Solução Lavagem Concentrada (mL)
Água purificada (mL)
1
4
36
2
8
72
3
12
108
4
16
144
5
20
180
6
24
216
7
28
252
8
32
288
9
36
324
10
40
360
11
44
396
DILUIÇÃO DO CONJUGADO CONCENTRADO E CONTROLE DE ANTÍGENO (Preparar no momento do Uso)
Diluir o Conjugado Concentrado (no 2) e o Controle de Antígeno (no 3) 1/101 com o Tampão Diluente (no 4).
Adicionar 0,12 mL de Conjugado Concentrado mais 0,12 mL do Controle de Antígeno e 12 mL do Tampão
Diluente. Homogeneizar suavemente.
No caso de não utilizar uma placa completa, preparar o volume de solução necessária, de acordo com a tabela
abaixo:
Nº Tiras requeridas
Tampão Diluente (mL)
Conjugado Concentrado (mL)
Controle de Antígeno (mL)
1
1,0
0,01
0,01
2
2,0
0,02
0,02
3
3,0
0,03
0,03
4
4,0
0,04
0,04
5
5,0
0,05
0,05
6
6,0
0,06
0,06
7
7,0
0,07
0,07
8
8,0
0,08
0,08
9
9,0
0,09
0,09
10
10,0
0,10
0,10
11
11,0
0,12
0,12
PREPARO DA SOLUÇÃO SUBSTRATO-CROMÓGENO (Preparar 10 minutos antes do Uso)
O reagente Cromógeno (no 7) congela a temperatura ≤18 °C. Deixar atingir a temperatura ambiente (20 - 25 °C)
para que descongele completamente e homogeneizar bem antes de usar. Adicionar 1,2 mL do Cromógeno (no 7) a
10,8 mL do Tampão Substrato (no 6). Homogeneizar bem. A solução para uso é incolor e deve ser mantida em
recipiente vedado e ao abrigo da luz. Descartar caso se torne azul.
No caso de não utilizar uma placa completa, preparar o volume de solução necessária, de acordo com a tabela
abaixo:
Nº Tiras requeridas
Tampão Substrato (mL)
Cromógeno (mL)
1
0,9
0,1
2
1,8
0,2
3
2,7
0,3
4
3,6
0,4
5
4,5
0,5
6
5,4
0,6
7
6,3
0,7
8
7,2
0,8
9
8,1
0,9
10
9,0
1,0
11
9,9
1,1
DILUIÇÃO DAS AMOSTRAS
Preparar diluições 1/101 das amostras. Exemplo: Em um tubo pipetar 1,0 mL do Tampão Diluente (no 4) e
adicionar 0,01 mL da amostra. Homogeneizar suavemente.
Não diluir os Controles (no 8, 9 e 10) pois estão prontos para uso.
ORIENTAÇÕES
D Ler as instruções de uso do produto.
D Todos os reagentes devem estar à temperatura ambiente (20 - 25 °C) antes de iniciar o ensaio.
D Os reagentes líquidos devem ser homogeneizados suavemente antes do uso.
D Realizar as leituras no prazo máximo de 30 minutos após a adição da Solução Substrato-Cromógeno.
D Caso a leitora não permita o ajuste do zero com o Branco do Substrato, é necessário subtrair seu valor das
absorbâncias das amostras e controles.
CMV IgM
VALIDAÇÃO DO ENSAIO
As absorbâncias devem ser consideradas após subtração do branco de substrato.
O não cumprimento de qualquer destes critérios INVALIDA o ensaio analítico.
Branco do substrato
Controle Positivo Baixo
Relação Controle Positivo Alto/Controle Positivo Baixo
Relação Controle Negativo/Controle Positivo Baixo
Absorbância ≤ 0,100
A absorbância de cada replicata não deve variar
mais do que 25% em relação à média das 4
absorbâncias.
A média deve ser entre 0,200 e 0,600.
> 3,0
< 0,7
RESULTADOS QUALITATIVOS
1- Calcular a média das absorbâncias do Controle Positivo Baixo. O valor que se obtém é o Cut-off do ensaio.
Cut-off = x Controle Positivo Baixo
2-Dividir a absorbância de cada amostra pelo Cut-off.
3- Resultados:
Amostra
Relação Absorbância / Cut-off
Reativa ou Positiva
≥ 1,10
Não Reativa ou Negativa
< 0,90
Inconclusiva
≥ 0,90 e < 1,10
RESULTADOS SEMI-QUANTITATIVOS
1- Calcular o valor do Cut-off como descrito anteriormente.
2- Calcular a concentração das IgM em Unidades Arbitrárias (UA/mL) dividindo a absorbância da amostra pelo
valor do Cut-off e multiplicando o resultado por 10.
UA/mL = absorbância da amostra / Cut-off x 10
3- Resultados:
Amostra
Reativa ou Positiva
Não Reativa ou Negativa
Inconclusiva
Relação Absorbância / Cut-off
≥ 11
<9
≥ 9 e < 11
CMV IgM
1
PROCEDIMENTO
Deixar um poço vazio para o Branco do Substrato.
Ø
2
Transferir 0,1 mL do Controle Positivo Alto, Controle Negativo (2 replicatas de cada), Controle Positivo
Baixo (4 replicatas) e amostras diluídas aos poços correspondentes.
Ø
3
Cobrir a placa com uma folha adesiva e incubar a 37 °C por 60 minutos.
Ø
4
Retirar e descartar a folha adesiva.
Aspirar o conteúdo dos poços e enchê-los completamente (± 0,350 mL) com a Solução de Lavagem diluída.
Repetir o processo de aspiração e lavagem mais 4 vezes, perfazendo um total de 5 ciclos de lavagem.
Manter a solução de lavagem nos poços por pelo menos 15 segundos antes de cada ciclo de aspiração.
Após a última lavagem, golpear a placa invertida sobre um papel absorvente para eliminar o excesso de
líquido.
Ø
5
Adicionar 0,1 mL do Conjugado diluído em todos os poços, exceto no poço reservado ao Branco de
Substrato.
Evitar a formação de bolhas.
Ø
6
Cobrir a placa com uma nova folha adesiva e incubar a 37 °C por 60 minutos.
Ø
7
Ao final da incubação, retirar a folha adesiva.
Aspirar e lavar a placa como no passo 4.
Ø
8
Adicionar 0,1 mL da Solução Substrato-Cromógeno diluída em todos os poços, inclusive no poço
reservado ao Branco de Substrato.
Ø
9
Incubar 30 minutos à temperatura ambiente (20 - 25 ºC) e ao abrigo da luz.
Ø
10
Adicionar 0,1 mL da Solução de Parada (no 11) a todos os poços, respeitando a mesma sequência e os
mesmos intervalos de tempo da adição da solução Substrato-Cromógeno.
Ø
11
Ajustar o zero da leitora com o poço reservado ao Branco de Substrato em 450 nm e medir a absorbância
em cada um dos poços no prazo máximo de 30 minutos.
Recomenda-se realizar leitura bicromática utilizando filtro secundário de 620 - 630 nm.
Ref. 416
HBeAg
Sistema para a determinação qualitativa do antígeno “e” do vírus da hepatite B (HBeAg) em soro ou
plasma.
ELISA – Sanduiche (Ac-Ag-Ac)
PREPARO DA SOLUÇÃO DE LAVAGEM
A Solução de Lavagem Concentrada deve ser diluída 1:25 com água deionizada. Adicionar 40 mL da Solução de
Lavagem concentrada (no 5) a 960 mL de água. Estável 1 semana entre 2 – 8 °C.
Para preparar volumes menores seguir a tabela abaixo:
Nº Tiras requeridas
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
Solução Lavagem Concentrada (mL)
3
6
9
12
15
18
21
24
27
30
33
Água purificada (mL)
72
144
216
288
360
432
504
576
648
720
792
PREPARO DO CONJUGADO (Preparar no momento do uso)
O Conjugado Concentrado (no 2) deve ser diluído 1:50 com o Diluente do Conjugado (no 3). Adicionar 0,24 mL de
Conjugado Concentrado a 11,76 mL de Diluente de Conjugado e homogeneizar suavemente.
No caso de não utilizar uma placa completa, preparar o volume de solução necessária, de acordo com a tabela
abaixo:
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
Diluente de Conjugado (mL)
0,98
1,96
2,94
3,92
4,90
5,88
6,86
7,84
8,82
9,80
10,78
Conjugado Concentrado (mL)
0,02
0,04
0,06
0,08
0,10
0,12
0,14
0,16
0,18
0,20
0,22
Nº Tiras requeridas
VALIDAÇÃO DO ENSAIO
As absorbâncias devem ser consideradas após subtração do branco de substrato.
O não cumprimento de qualquer destes critérios INVALIDA o ensaio analítico.
Branco do Substrato
Caibrador
Controle Negativo
Controle Positivo
Controle Positivo - Controle Negativo
Absorbância ≤ 0,150
A absorbância de cada replicata deve ser < 0,120. Se uma
replicata se encontrar fora dessa margem, deve-se
descartá-la e calcular a média com os outros 2 valores. Se
2 replicatas se encontrarem fora dessa margem, o teste
deverá ser repetido.
Absorbância < 0,120
Absorbância entre 0,500 e 2,500
> 0,450
RESULTADOS
1- Calcular a média das absorbâncias do Calibrador e somar 0,060.
O valor que se obtém é o Cut-off do ensaio.
Cut-off = x Calibrador + 0,060
2-Dividir a absorbância de cada amostra pelo Cut-off.
3- Resultados:
Amostra
Reativa ou Positiva
Não Reativa ou Negativa
Inconclusiva
Relação Absorbância / Cut-off
≥ 1,10
< 0,90
≥ 0,90 e < 1,10
HBeAg
1
PROCEDIMENTO
Deixar um poço vazio para o Branco do Substrato.
Ø
2
Transferir 0,05 mL do Tampão de Incubação (no 4) a todos os poços, exceto ao poço reservado para o
Branco de Substrato.
Ø
3
Adicionar 0,1 mL do Controle Positivo Alto, Controle Positivo Baixo (1 replicata de cada), Calibrador (3
replicatas) e amostras aos poços correspondentes.
Ø
4
Cobrir a placa com uma folha adesiva e incubar a 37 °C por 120 minutos.
Ø
5
Retirar e descartar a folha adesiva.
Aspirar o conteúdo dos poços e enchê-los completamente (± 0,350 mL) com a Solução de Lavagem diluída.
Repetir o processo de aspiração e lavagem mais 4 vezes, perfazendo um total de 5 ciclos de lavagem.
Manter a solução de lavagem nos poços por pelo menos 30 segundos antes de cada ciclo de aspiração.
Após a última lavagem, golpear a placa invertida sobre um papel absorvente para eliminar o excesso de
líquido
Ø
6
Adicionar 0,1 mL do Conjugado diluído em todos os poços, exceto ao poço reservado ao Branco de
Substrato. Evitar a formação de bolhas.
Ø
7
Cobrir a placa com uma nova folha adesiva e incubar a 37 ºC por 60 minutos.
Ø
8
Ao final da incubação retirar a folha adesiva. Aspirar e lavar a placa como no passo 5.
Ø
9
Adicionar 0,1 mL da Solução substrato-Cromógeno (no 6) em todos os poços, inclusive no poço
reservado ao Branco de Substrato.
Ø
10
Incubar 30 minutos à temperatura ambiente (20 a 25 °C) e ao abrigo da luz.
Ø
11
Adicionar 0,1 mL da Solução de Parada (no 10) a todos os poços, respeitando a mesma sequência e
intervalos de tempo da adição da solução Substrato-Cromógeno
Ø
12
Ajustar o zero da leitora com o poço reservado ao Branco de Substrato em 450 nm e medir a absorbância
em cada um dos poços no prazo máximo de 30 minutos.
Recomenda-se realizar leitura bicromática utilizando filtro secundário de 620 - 630 nm.
ORIENTAÇÕES
D Ler as instruções de uso do produto.
D Todos os reagentes devem estar à temperatura ambiente (20 - 25 °C) antes de iniciar o ensaio.
D Os reagentes líquidos devem ser homogeneizados suavemente antes do uso.
D Realizar as leituras no prazo máximo de 30 minutos após a adição da Solução Substrato-Cromógeno.
D Caso a leitora não permita o ajuste do zero com o Branco do Substrato, é necessário subtrair seu valor das
absorbâncias das amostras e controles.
Ref. 412
HBsAg
Sistema para a determinação qualitativa do antígeno de superfície do vírus da hepatite B (HBsAg) em
soro ou plasma.
ELISA – Sanduiche (Ac-Ag-Ac)
PREPARO DA SOLUÇÃO DE LAVAGEM
A Solução de Lavagem Concentrada deve ser diluída 1:10 com água deionizada. Adicionar 50 mL da Solução de
Lavagem Concentrada (no 4) a 450 mL de água. Estável 2 semanas entre 2 – 8 °C.
Para preparar volumes menores seguir a tabela abaixo:
Nº Tiras requeridas
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
Solução Lavagem Concentrada (mL)
4
8
12
16
20
24
28
32
36
40
44
Água purificada (mL)
36
72
108
144
180
216
252
288
324
360
396
PREPARO DO CONJUGADO (preparar no momento do uso)
O Conjugado Concentrado (no 2) deve ser diluído 1:51 com o Diluente do Conjugado (no 3). Adicionar 0,24 mL de
Conjugado Concentrado a 12 mL de Diluente de Conjugado e homogeneizar suavemente. Preparar no momento
do uso. No caso de não utilizar uma placa completa, preparar o volume de solução necessária, de acordo com a
tabela abaixo:
Nº Tiras requeridas
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
Diluente de Conjugado (mL)
1,0
2,0
3,0
4,0
5,0
6,0
7,0
8,0
9,0
10,0
11,0
Conjugado Concentrado (mL)
0,02
0,04
0,06
0,08
0,10
0,12
0,14
0,16
0,18
0,20
0,22
PREPARO DA SOLUÇÃO SUBSTRATO-CROMÓGENO (preparar 10 minutos antes do uso)
O reagente Cromógeno (no 6) congela a temperatura ≤18 °C. Deixar atingir a temperatura ambiente (20 - 25 °C)
para que descongele completamente e homogeneizar bem antes de usar. Preparar 10 minutos antes do uso.
Adicionar 0,28 mL do Cromógeno (no 6) diretamente no frasco de Tampão Substrato (no 5) que contem 14 mL e
homogeneizar bem. A solução para uso é rósea e deve ser mantida em recipiente vedado e ao abrigo da luz.
Descartar caso se torne azul. No caso de não utilizar uma placa completa, preparar o volume de solução
necessária, de acordo com a tabela abaixo:
Nº Tiras requeridas
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
Tampão Substrato (mL)
1,0
2,0
3,0
4,0
5,0
6,0
7,0
8,0
9,0
10,0
11,0
Cromógeno (mL)
0,02
0,04
0,06
0,08
0,10
0,12
0,14
0,16
0,18
0,20
0,22
VALIDAÇÃO DO ENSAIO
As absorbâncias devem ser consideradas após subtração do branco de substrato.
O não cumprimento de qualquer destes critérios INVALIDA o ensaio analítico.
Branco do Substrato
Controle Negativo
Controle Positivo
Absorbância ≤ 0,100
A média das absorbâncias deve ser < 0,120
A absorbância de cada replicata deve ser maior do que a média das absorbâncias
vezes 0,5. ( x CN x 0,5).
Se uma replicata se encontrar fora dessa margem, deve-se descartá-la e calcular a
média com os outros 2 valores.
Se duas replicatas se encontrarem fora dessa margem, o teste deverá ser repetido.
Absorbância ≥ 0,700
RESULTADOS
1- Calcular a média das absorbâncias do Controle Negativo e somar 0,040.
O valor que se obtém é o Cut-off do ensaio.
Cut-off = x Controle negativo + 0,040
2-Dividir a absorbância de cada amostra pelo Cut-off.
3- Resultados:
Amostra
Relação Absorbância / Cut-off
Reativa ou Positiva
≥ 1,10
Não Reativa ou Negativa
< 0,90
Inconclusiva
≥ 0,90 e < 1,10
HBsAg
1
PROCEDIMENTO
Deixar um poço vazio para o Branco do Substrato.
Ø
2
Transferir 0,1 mL do Controle Positivo (1 replicata), Controle Negativo (3 replicatas) e amostras aos poços
correspondentes.
Ø
3
Cobrir a placa com uma folha adesiva, agitar delicadamente e incubar a 37 °C por 60 minutos.
Ø
4
Retirar e descartar a folha adesiva.
Aspirar o conteúdo dos poços e enchê-los completamente (± 0,350 mL) com a Solução de Lavagem diluída.
Repetir o processo de aspiração e lavagem mais 3 vezes, perfazendo um total de 4 ciclos de lavagem.
Manter a solução de lavagem nos poços por pelo menos 15 segundos antes de cada ciclo de aspiração.
Após a última lavagem, golpear a placa invertida sobre um papel absorvente para eliminar o excesso de
líquido
Ø
5
Adicionar 0,1 mL do Conjugado diluído em todos os poços, exceto ao poço reservado ao Branco de
Substrato. Evitar a formação de bolhas.
Ø
6
Cobrir a placa com uma nova folha adesiva e incubar a 37 ºC por 30 minutos.
Ø
7
Ao final da incubação retirar a folha adesiva.
Aspirar e lavar a placa como no passo 4.
Ø
8
Adicionar 0,1 mL da Solução Substrato-Cromógeno diluída em todos os poços, inclusive no poço
reservado ao Branco de Substrato.
Ø
9
Incubar 30 minutos à temperatura ambiente (20 a 25 °C) e ao abrigo da luz.
Ø
10
Adicionar 0,1 mL da Solução de Parada (no 9) a todos os poços, respeitando a mesma sequência e
intervalos de tempo da adição da solução Substrato-Cromógeno
Ø
11
Ajustar o zero da leitora com o poço reservado ao Branco de Substrato em 450 nm e medir a absorbância
em cada um dos poços no prazo máximo de 30 minutos.
Recomenda-se realizar leitura bicromática utilizando filtro secundário de 620 - 630 nm.
ORIENTAÇÕES
D Ler as instruções de uso do produto.
D Todos os reagentes devem estar à temperatura ambiente (20 - 25 °C) antes de iniciar o ensaio.
D Os reagentes líquidos devem ser homogeneizados suavemente antes do uso.
D Realizar as leituras no prazo máximo de 30 minutos após a adição da Solução Substrato-Cromógeno.
D Caso a leitora não permita o ajuste do zero com o Branco do Substrato, é necessário subtrair seu valor das
absorbâncias das amostras e controles.
Ref. 418
HCV
Sistema para a determinação qualitativa de anticorpos totais específicos contra o vírus da hepatite C
(HCV) em soro ou plasma.
ELISA – Indireto (Ag-Ac-Ac)
PREPARO DA SOLUÇÃO DE LAVAGEM
A Solução de Lavagem Concentrada deve ser diluída 1:10 com água deionizada. Adicionar 50 mL da Solução de
Lavagem Concentrada (no 5) a 450 mL de água. Estável 2 semanas entre 2 – 8 °C.
Para preparar volumes menores seguir a tabela abaixo:
Nº Tiras requeridas
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
Solução Lavagem Concentrada (mL)
4
8
12
16
20
24
28
32
36
40
44
Água purificada (mL)
36
72
108
144
180
216
252
288
324
360
396
PREPARO DO CONJUGADO
(Preparar no momento do uso)
o
O Conjugado Concentrado (n 2) deve ser diluído 1:51 com o Diluente do Conjugado (no 3). Adicionar 0,3 mL de
Conjugado Concentrado ao frasco que contém 15 mL de Diluente de Conjugado e homogeneizar suavemente.
Preparar no momento do uso. No caso de não utilizar uma placa completa, preparar o volume de solução
necessária, de acordo com a tabela abaixo:
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
Diluente de Conjugado (mL)
1,0
2,0
3,0
4,0
5,0
6,0
7,0
8,0
9,0
10,0
11,0
Conjugado Concentrado (mL)
0,02
0,04
0,06
0,08
0,10
0,12
0,14
0,16
0,18
0,20
0,22
Nº Tiras requeridas
PREPARO DA SOLUÇÃO SUBSTRATO-CROMÓGENO (Preparar 10 minutos antes do Uso)
O reagente Cromógeno (no 7) congela a temperatura ≤18 °C. Deixar atingir a temperatura ambiente (20 - 25 °C)
para que descongele completamente e homogeneizar bem antes de usar. Preparar 10 minutos antes do uso.
Adicionar 0,28 mL do Cromógeno (no 7) diretamente no frasco de Tampão Substrato (no 4) que contem 14 mL e
homogeneizar bem. A solução para uso é incolor e deve ser mantida em recipiente vedado e ao abrigo da luz.
Descartar caso se torne azul. No caso de não utilizar uma placa completa, preparar o volume de solução
necessária, de acordo com a tabela abaixo:
Nº Tiras requeridas
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
Tampão Substrato (mL)
1,0
2,0
3,0
4,0
5,0
6,0
7,0
8,0
9,0
10,0
11,0
Cromógeno (mL)
0,02
0,04
0,06
0,08
0,10
0,12
0,14
0,16
0,18
0,20
0,22
VALIDAÇÃO DO ENSAIO (O ensaio será considerado válido apenas se cumprir os critérios abaixo):
As absorbâncias devem ser consideradas após subtração do branco de substrato.
O não cumprimento de qualquer destes critérios INVALIDA o ensaio analítico.
Branco do Substrato
Controle Negativo
Controle Positivo Baixo
Controle Positivo Alto
Relação Controle Positivo Alto / Controle Positivo Baixo
Relação Controle Negativo / Controle Positivo Baixo
Absorbância ≤ 0,100
Absorbância < 0,100
Cada absorbância não deve variar mais do que
30% em relação à média das absorbâncias.
A média das absorbâncias deve ser ≥ 0,200
Absorbância ≥ 0,800
> 2,5
< 0,5
RESULTADOS
1- Calcular a média das absorbâncias do Controle Positivo Baixo e multiplicar por 0,9.
O valor que se obtém é o Cut-off do ensaio.
Cut-off = x Controle Positivo Baixo x 0,90
2-Dividir a absorbância de cada amostra pelo Cut-off.
3- Resultados:
Amostra
Reativa ou Positiva
Não Reativa ou Negativa
Inconclusiva
Relação Absorbância / Cut-off
≥ 1,10
< 0,90
≥ 0,90 e < 1,10
HCV
1
PROCEDIMENTO
Deixar um poço vazio para o Branco do Substrato.
Ø
2
Transferir 0,2 mL do Controle Positivo Alto, Controle Positivo Baixo e Controle Negativo (2 replicatas de
cada) aos poços correspondentes.
Não diluir os controles, pois estão prontos para uso.
Ø
3
Adicionar 0,2 mL de Diluente de Amostras (no 4) aos poços correspondentes para as amostras.
Adicionar 0,01 mL de amostra em cada poço de amostra.
Ø
4
Cobrir a placa com uma folha adesiva e incubar a 37 °C por 60 minutos.
Ø
5
Retirar e descartar a folha adesiva.
Aspirar o conteúdo dos poços e enchê-los completamente (± 0,350 mL) com a Solução de Lavagem diluída.
Repetir o processo de aspiração e lavagem mais 5 vezes, perfazendo um total de 6 ciclos de lavagem.
Manter a solução de lavagem nos poços por pelo menos 15 segundos antes de cada ciclo de aspiração.
Após a última lavagem, golpear a placa invertida sobre um papel absorvente para eliminar o excesso de
líquido
Ø
6
Adicionar 0,1 mL do Conjugado diluído em todos os poços, exceto ao poço reservado ao Branco de
Substrato. Evitar a formação de bolhas.
Ø
7
Cobrir a placa com uma nova folha adesiva e incubar a 37 ºC por 30 minutos.
Ø
8
Ao final da incubação retirar a folha adesiva.
Aspirar e lavar a placa como no passo 5.
Ø
9
Adicionar 0,1 mL da Solução substrato-Cromógeno diluído em todos os poços, inclusive no poço
reservado ao Branco de Substrato.
Ø
10
Incubar 30 minutos à temperatura ambiente (20 a 25 °C) e ao abrigo da luz.
Ø
11
Adicionar 0,1 mL da Solução de Parada (no 11) a todos os poços, respeitando a mesma sequência e
intervalos de tempo da adição da solução Substrato-Cromógeno.
Ø
12
Ajustar o zero da leitora com o poço reservado ao Branco de Substrato em 450 nm e medir a absorbância
em cada um dos poços no prazo máximo de 30 minutos
Recomenda-se realizar leitura bicromática utilizando filtro secundário de 620 - 630 nm.
ORIENTAÇÕES
D Ler as instruções de uso do produto.
D Todos os reagentes devem estar à temperatura ambiente (20 - 25 °C) antes de iniciar o ensaio.
D Os reagentes líquidos devem ser homogeneizados suavemente antes do uso.
D Realizar as leituras no prazo máximo de 30 minutos após a adição da Solução Substrato-Cromógeno.
D Caso a leitora não permita o ajuste do zero com o Branco do Substrato, é necessário subtrair seu valor das
absorbâncias das amostras e controles.
HIV-1+2
Ref. 419
Sistema para a determinação qualitativa de anticorpos contra HIV-1, HIV-2 e subtipo O em soro ou
plasma.
ELISA – Sanduiche (Ag-Ac-Ag)
PREPARO DA SOLUÇÃO DE LAVAGEM
A Solução de Lavagem Concentrada deve ser diluída 1:20 com água deionizada. Adicionar 50 mL da Solução de
Lavagem Concentrada (no 5) a 950 mL de água. Estável 1 semana entre 2 – 8 °C.
Para preparar volumes menores seguir a tabela abaixo:
Nº Tiras requeridas
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
Solução Lavagem Concentrada (mL)
4
8
12
16
20
24
28
32
36
40
44
Água purificada (mL)
76
152
228
304
380
456
532
608
684
760
836
PREPARO DO CONJUGADO (Preparar no momento do uso)
O Conjugado Concentrado (no 2) deve ser diluído 1:51 com o Diluente do Conjugado (no 3). Adicionar 0,24 mL de
Conjugado Concentrado a 12 mL de Diluente de Conjugado e homogeneizar suavemente. No caso de não utilizar
uma placa completa, preparar o volume de solução necessária, de acordo com a tabela abaixo:
Nº Tiras requeridas
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
Diluente de Conjugado (mL)
1,0
2,0
3,0
4,0
5,0
6,0
7,0
8,0
9,0
10,0
11,0
Conjugado Concentrado (mL)
0,02
0,04
0,06
0,08
0,10
0,12
0,14
0,16
0,18
0,20
0,22
PREPARO DA SOLUÇÃO SUBSTRATO-CROMÓGENO (Preparar 10 minutos antes do uso)
O reagente Cromógeno (no 7) congela a temperatura ≤18 °C. Deixar atingir a temperatura ambiente (20 - 25 °C)
para que descongele completamente e homogeneizar bem antes de usar. Preparar 10 minutos antes do uso.
Adicionar 0,12 mL do Cromógeno (no 7) a 12 mL de Tampão Substrato (no 6) e homogeneizar bem. A solução
para uso é incolor e deve ser mantida em recipiente vedado e ao abrigo da luz. Descartar caso se torne azul.
No caso de não utilizar uma placa completa, preparar o volume necessário, de acordo com a tabela abaixo:
Nº Tiras requeridas
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
Tampão Substrato (mL)
1,0
2,0
3,0
4,0
5,0
6,0
7,0
8,0
9,0
10,0
11,0
Cromógeno (mL)
0,01
0,02
0,03
0,04
0,05
0,06
0,07
0,08
0,09
0,10
0,11
VALIDAÇÃO DO ENSAIO
As absorbâncias devem ser consideradas após subtração do branco de substrato.
O não cumprimento de qualquer destes critérios INVALIDA o ensaio analítico.
Branco do Substrato
Controle Negativo
Controle Positivo HIV-1
Controle Positivo HIV-2
Absorbância ≤ 0,100
A média das absorbâncias deve ser < 0,150
A absorbância de cada replicata deve ser maior do que a média das absorbâncias x 0,5
>( x CN x 0,5) e menor ou igual à média das absorbâncias vezes 1,5 (≤ x CN x 1,5).
Se uma replicata se encontrar fora dessa margem, deve-se descartá-la e calcular a
média com os outros 2 valores. Se 2 replicatas se encontrarem fora dessa margem, o
teste deverá ser repetido.
Absorbância maior ou igual à média do Controle Negativo + 0,700
≥ ( x CP1 ≥ x CN + 0,700)
Absorbância maior que o Cut-off.
RESULTADOS
1- Calcular a média das absorbâncias do Controle Negativo e somar 0,250.
O valor que se obtém é o Cut-off do ensaio.
Cut-off = x Controle Negativo + 0,250
2-Dividir a absorbância de cada amostra pelo Cut-off.
3- Resultados:
Amostra
Reativa ou Positiva
Não Reativa ou Negativa
Inconclusiva
Relação Absorbância / Cut-off
≥ 1,10
< 0,90
≥ 0,90 e < 1,10
HIV-1+2
1
PROCEDIMENTO
Deixar um poço vazio para o Branco do Substrato.
Ø
2
Transferir 0,1 mL de Diluente de Amostras para todos os poços, exceto ao poço reservado ao Branco de
Substrato.
Ø
3
Adicionar 0,05 mL do Controle Positivo HIV-1 (2 replicatas), Controle Positivo HIV-2 (1 replicata), Controle
Negativo (3 replicatas) e amostras aos poços correspondentes.
Ø
4
Cobrir a placa com uma folha adesiva, agitar delicadamente e incubar a 37 °C por 60 minutos.
Ø
5
Retirar e descartar a folha adesiva.
Aspirar o conteúdo dos poços e enchê-los completamente (± 0,350 mL) com a Solução de Lavagem diluída.
Repetir o processo de aspiração e lavagem mais 3 vezes, perfazendo um total de 4 ciclos de lavagem.
Manter a solução de lavagem nos poços por pelo menos 15 segundos antes de cada ciclo de aspiração.
Após a última lavagem, golpear a placa invertida sobre um papel absorvente para eliminar o excesso de
líquido
Ø
6
Adicionar 0,1 mL do Conjugado diluído em todos os poços, exceto ao poço reservado ao Branco de
Substrato. Evitar a formação de bolhas.
Ø
7
Cobrir a placa com uma nova folha adesiva e incubar a 37 ºC por 30 minutos.
Ø
8
Ao final da incubação retirar a folha adesiva. Aspirar e lavar a placa como no passo 5.
Ø
9
Adicionar 0,1 mL da Solução Substrato-Cromógeno diluída em todos os poços, inclusive no poço
reservado ao Branco de Substrato.
Ø
10
Incubar 30 minutos à temperatura ambiente (20 a 25 °C) e ao abrigo da luz.
Ø
11
Adicionar 0,1 mL da Solução de Parada (no 11) a todos os poços, respeitando a mesma sequência e
intervalos de tempo da adição da solução Substrato-Cromógeno
Ø
12
Ajustar o zero da leitora com o poço reservado ao Branco de Substrato em 450 nm e medir a absorbância
em cada um dos poços no prazo máximo de 30 minutos. Recomenda-se realizar leitura bicromática
utilizando filtro secundário de 620 - 630 nm.
ORIENTAÇÕES
D Ler as instruções de uso do produto.
D Todos os reagentes devem estar à temperatura ambiente (20 - 25 °C) antes de iniciar o ensaio.
D Os reagentes líquidos devem ser homogeneizados suavemente antes do uso.
D Realizar as leituras no prazo máximo de 30 minutos após a adição da Solução Substrato-Cromógeno.
D Caso a leitora não permita o ajuste do zero com o Branco do Substrato, é necessário subtrair seu valor das
absorbâncias das amostras e controles.
Rubéola IgG
Ref. 401
Sistema para a determinação qualitativa e quantitativa de anticorpos IgG específicos anti-rubéola em soro
ou plasma.
ELISA – Indireto (Ag-Ac-Ac)
PREPARO DA SOLUÇÃO DE LAVAGEM
A Solução de Lavagem Concentrada deve ser diluída 1:10 com água deionizada. Adicionar 50 mL da Solução de
Lavagem Concentrada (no 5) a 450 mL de água. Estável 2 semanas entre 2 – 8 °C.
Para preparar volumes menores seguir a tabela abaixo:
Nº Tiras requeridas
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
Solução Lavagem Concentrada (mL)
4
8
12
16
20
24
28
32
36
40
44
Água purificada (mL)
36
72
108
144
180
216
252
288
324
360
396
PREPARO DO CONJUGADO (Preparar no momento do uso)
O Conjugado Concentrado (no 2) deve ser diluído 1:51 com o Diluente do Conjugado (no 3). Adicionar 0,3 mL de
Conjugado Concentrado ao frasco que contém 15 mL de Diluente de Conjugado e homogeneizar suavemente. No
caso de não utilizar uma placa completa, preparar o volume de solução necessária, de acordo com a tabela
abaixo:
Nº Tiras requeridas
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
Diluente de Conjugado (mL)
1,0
2,0
3,0
4,0
5,0
6,0
7,0
8,0
9,0
10,0
11,0
Conjugado Concentrado (mL)
0,02
0,04
0,06
0,08
0,10
0,12
0,14
0,16
0,18
0,20
0,22
PREPARO DA SOLUÇÃO SUBSTRATO-CROMÓGENO (Preparar 10 minutos antes do uso)
O reagente Cromógeno (no 7) congela a temperatura ≤18 °C. Deixar atingir a temperatura ambiente (20 - 25 °C)
para que descongele completamente e homogeneizar bem antes de usar. Preparar 10 minutos antes do uso.
Adicionar 0,28 mL do Cromógeno (no 7) ao frasco que contém 14 mL de Tampão Substrato (no 6) e homogeneizar
bem. A solução para uso é incolor e deve ser mantida em recipiente vedado e ao abrigo da luz. Descartar caso se
torne azul.
No caso de não utilizar uma placa completa, preparar o volume necessário, de acordo com a tabela abaixo:
Nº Tiras requeridas
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
Tampão Substrato (mL)
1,0
2,0
3,0
4,0
5,0
6,0
7,0
8,0
9,0
10,0
11,0
Cromógeno (mL)
0,02
0,04
0,06
0,08
0,10
0,12
0,14
0,16
0,18
0,20
0,22
DILUIÇÃO DAS AMOSTRAS
Preparar diluições 1:101 do Calibrador Positivo Baixo, Calibrador Positivo Alto, Controle Negativo e Amostras com
o Diluente de Amostras (no 4).
Exemplo: Em um tubo colocar 1 mL de Diluente de Amostras e adicionar 0,01 mL de soro. Homogeneizar
suavemente.
Rubéola IgG - Ref. 401
VALIDAÇÃO DO ENSAIO
As absorbâncias devem ser consideradas após subtração do branco de substrato.
O não cumprimento de qualquer destes critérios INVALIDA o ensaio analítico.
Branco do Substrato
Controle Negativo
Calibrador Positivo Alto
Calibrador Positivo Baixo
Relação Calibrador Positivo Alto / Calibrador Positivo Baixo
Relação Controle Negativo / Calibrador Positivo Baixo
Absorbância ≤ 0,100
Absorbância < 0,100
Absorbância ≥ 0,600
Absorbância ≥ 0,150
≥ 2,0
≤ 0,5
RESULTADOS QUALITATIVOS
1- Calcular a média das absorbâncias do Calibrador Positivo Baixo.
O valor que se obtém é o Cut-off do ensaio.
Cut-off = x Calibrador Positivo Baixo
2-Dividir a absorbância de cada amostra pelo Cut-off.
3- Resultados:
Amostra
Relação Absorbância / Cut-off
Reativa ou Positiva
≥ 1,10
Não Reativa ou Negativa
< 0,90
Inconclusiva
≥ 0,90 e < 1,10
RESULTADOS QUANTITATIVOS
1- Calcular a média das absorbâncias do Calibrador Positivo Baixo. A concentração de IgG anti-rubéola do
Calibrador Positivo Baixo é de 10 UI/mL.
2- Calcular a média das absorbâncias do Calibrador Positivo Alto. A concentração de IgG anti-rubéola do
Calibrador Positivo Alto é de 200 UI/mL.
3- Representar em coordenadas linear-log, em folha de papel semi-logarítmico, as médias das absorbâncias dos
calibradores na ordenada (eixo y, linear) contra suas respectivas concentrações em UI/mL na abscissa (eixo x,
log).
4- Traçar uma linha passando pelos 2 pontos.
5- Utilizando o gráfico com a reta obtida, encontra-se a concentração das amostras a partir de suas absorbâncias.
6- Para facilitar os cálculos dos resultados quantitativos, utilizar planilha: RUBÉOLA – IgG – RESULTADOS
QUANTITATIVOS, disponível em www.labtest.com.br.
ORIENTAÇÕES
D Ler as instruções de uso do produto.
D Todos os reagentes devem estar à temperatura ambiente (20 - 25 °C) antes de iniciar o ensaio.
D Os reagentes líquidos devem ser homogeneizados suavemente antes do uso.
D Realizar as leituras no prazo máximo de 30 minutos após a adição da Solução Substrato-Cromógeno.
D Caso a leitora não permita o ajuste do zero com o Branco do Substrato, é necessário subtrair seu valor das
absorbâncias das amostras e controles.
Rubéola IgG
1
PROCEDIMENTO
Deixar um poço vazio para o Branco do Substrato.
Ø
2
Transferir 0,1 mL do Controle Negativo, Calibrador Positivo Baixo e Calibrador Positivo alto (2 replicatas de
cada) e amostra aos poços correspondentes. Ver item Diluição de Amostras.
Ø
3
Cobrir a placa com uma folha adesiva, agitar delicadamente e incubar a 37 °C por 60 minutos.
Ø
4
Retirar e descartar a folha adesiva.
Aspirar o conteúdo dos poços e enchê-los completamente (± 0,350 mL) com a Solução de Lavagem diluída.
Repetir o processo de aspiração e lavagem mais 3 vezes, perfazendo um total de 4 ciclos de lavagem.
Manter a solução de lavagem nos poços por pelo menos 15 segundos antes de cada ciclo de aspiração.
Após a última lavagem, golpear a placa invertida sobre um papel absorvente para eliminar o excesso de
líquido
Ø
5
Adicionar 0,1 mL do Conjugado diluído em todos os poços, exceto ao poço reservado ao Branco de
Substrato. Evitar a formação de bolhas.
Ø
6
Cobrir a placa com uma nova folha adesiva e incubar a 37 ºC por 30 minutos.
Ø
7
Ao final da incubação retirar a folha adesiva. Aspirar e lavar a placa como no passo 4.
Ø
8
Adicionar 0,1 mL da Solução Substrato-Cromógeno diluída em todos os poços, inclusive no poço
reservado ao Branco de Substrato.
Ø
9
Incubar 30 minutos à temperatura ambiente (20 a 25 °C) e ao abrigo da luz.
Ø
10
Adicionar 0,1 mL da Solução de Parada (no 11) a todos os poços, respeitando a mesma sequência e
intervalos de tempo da adição da solução Substrato-Cromógeno
Ø
11
Ajustar o zero da leitora com o poço reservado ao Branco de Substrato em 450 nm e medir a absorbância
em cada um dos poços no prazo máximo de 30 minutos. Recomenda-se realizar leitura bicromática
utilizando filtro secundário de 620 - 630 nm.
Rubéola IgM
Ref. 402
Sistema para a determinação qualitativa e semi-quantitativa de anticorpos IgM específicos anti-rubéola
em soro ou plasma.
ELISA – Sanduíche-Imunocaptura (Ac-Ac-Ag)
PREPARO DA SOLUÇÃO DE LAVAGEM
A Solução de Lavagem Concentrada deve ser diluída 1:10 com água deionizada. Adicionar 50 mL da Solução de
Lavagem Concentrada (no 4) a 450 mL de água. Estável 2 semanas entre 2 – 8 °C. Para preparar volumes
menores seguir a tabela abaixo:
Nº Tiras requeridas
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
Solução Lavagem Concentrada (mL)
4
8
12
16
20
24
28
32
36
40
44
Água purificada (mL)
36
72
108
144
180
216
252
288
324
360
396
PREPARO DA SOLUÇÃO SUBSTRATO-CROMÓGENO (Preparar 10 minutos antes do uso)
O reagente Cromógeno (no 6) congela a temperatura ≤18 °C. Deixar atingir a temperatura ambiente (20 - 25 °C)
para que descongele completamente e homogeneizar bem antes de usar. Preparar 10 minutos antes do uso.
Adicionar 0,28 mL do Cromógeno (no 6) ao frasco que contém 14 mL de Tampão Substrato (no 5) e homogeneizar
bem. A solução para uso é incolor e deve ser mantida em recipiente vedado e ao abrigo da luz. Descartar caso se
torne azul.
No caso de não utilizar uma placa completa, preparar o volume necessário, de acordo com a tabela abaixo:
Nº Tiras requeridas
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
Tampão Substrato (mL)
1,0
2,0
3,0
4,0
5,0
6,0
7,0
8,0
9,0
10,0
11,0
Cromógeno (mL)
0,02
0,04
0,06
0,08
0,10
0,12
0,14
0,16
0,18
0,20
0,22
DILUIÇÃO DAS AMOSTRAS
Preparar diluições 1:101 das Amostras com o Diluente de Amostras (no 4). Exemplo: Em um tubo colocar 1 mL de
Diluente de Amostras e adicionar 0,01 mL de soro. Homogeneizar suavemente.
NÃO DILUIR OS CONTROLES (no 7,8 e 9), POIS ESTÃO PRONTOS PARA USO.
Rubéola IgM - Ref. 402
VALIDAÇÃO DO ENSAIO
As absorbâncias devem ser consideradas após subtração do branco de substrato.
O não cumprimento de qualquer destes critérios INVALIDA o ensaio analítico.
Branco do Substrato
Controle Negativo
Controle Positivo Baixo
Controle Positivo Alto
Relação Controle Positivo Alto / Controle Positivo Baixo
Relação Controle Negativo / Controle Positivo Baixo
Absorbância ≤ 0,100
Absorbância < 0,100
Cada absorbância não deve variar mais que
30%em relação à média das 3 replicatas.
A média das absorbâncias deve ser ≥ 0,120
Absorbância ≥ 0,600
≥ 2,5
≤ 0,5
RESULTADOS QUALITATIVOS
1- Calcular a média das absorbâncias do Controle Positivo Baixo e multiplicar por 0,8.
O valor que se obtém é o Cut-off do ensaio.
Cut-off = x Controle Positivo Baixo x 0,8
2-Dividir a absorbância de cada amostra pelo Cut-off.
3- Resultados:
Amostra
Relação Absorbância / Cut-off
Reativa ou Positiva
≥ 1,10
Não Reativa ou Negativa
< 0,90
Inconclusiva
≥ 0,90 e < 1,10
RESULTADOS SEMI-QUANTITATIVOS
1- Calcular o Cut-off como descrito anteriormente.
2- Calcular a concentração das IgM em Unidades Arbitrárias (UA/mL) dividindo a absorbância da amostra pelo
valor do Cut-off e multiplicando o resultado por 10.
UA/mL = absorbância da amostra / Cut-off x 10
3- Resultados:
Amostra
Reativa ou Positiva
Não Reativa ou Negativa
Inconclusiva
Resultado em UA/mL
≥ 11
<9
≥ 9 e < 11
ORIENTAÇÕES
D Ler as instruções de uso do produto.
D Todos os reagentes devem estar à temperatura ambiente (20 - 25 °C) antes de iniciar o ensaio.
D Os reagentes líquidos devem ser homogeneizados suavemente antes do uso.
D Realizar as leituras no prazo máximo de 30 minutos após a adição da Solução Substrato-Cromógeno.
D Caso a leitora não permita o ajuste do zero com o Branco do Substrato, é necessário subtrair seu valor das
absorbâncias das amostras e controles.
Rubéola IgM
1
PROCEDIMENTO
Deixar um poço vazio para o Branco do Substrato.
Ø
2
Transferir 0,1 mL do Controle Negativo e Controle Positivo Alto (2 replicatas), Controle Positivo Baixo (3
replicatas) e amostras diluídas aos poços correspondentes.
Ø
3
Cobrir a placa com uma folha adesiva, agitar delicadamente e incubar a 37 °C por 60 minutos.
Ø
4
Retirar e descartar a folha adesiva.
Aspirar o conteúdo dos poços e enchê-los completamente (± 0,350 mL) com a Solução de Lavagem diluída.
Repetir o processo de aspiração e lavagem mais 3 vezes, perfazendo um total de 4 ciclos de lavagem.
Manter a solução de lavagem nos poços por pelo menos 15 segundos antes de cada ciclo de aspiração.
Após a última lavagem, golpear a placa invertida sobre um papel absorvente para eliminar o excesso de
líquido
Ø
5
Adicionar 0,1 mL do Conjugado (no 2) em todos os poços, exceto ao poço reservado ao Branco de
Substrato. Evitar a formação de bolhas.
Ø
6
Cobrir a placa com uma nova folha adesiva e incubar a 37 ºC por 60 minutos.
Ø
7
Ao final da incubação retirar a folha adesiva. Aspirar e lavar a placa como no passo 4.
Ø
8
Adicionar 0,1 mL da Solução Substrato-Cromógeno diluída em todos os poços, inclusive no poço
reservado ao Branco de Substrato.
Ø
9
Incubar 30 minutos à temperatura ambiente (20 a 25 °C) e ao abrigo da luz.
Ø
10
Adicionar 0,1 mL da Solução de Parada (no 10) a todos os poços, respeitando a mesma sequência e
intervalos de tempo da adição da solução Substrato-Cromógeno
Ø
11
Ajustar o zero da leitora com o poço reservado ao Branco de Substrato em 450 nm e medir a absorbância
em cada um dos poços no prazo máximo de 30 minutos.
Recomenda-se realizar leitura bicromática utilizando filtro secundário de 620 - 630 nm.
TOXO-IgG
Ref. 408
Sistema para a determinação qualitativa e quantitativa de anticorpos IgG específicos anti-toxoplasma em
soro ou plasma.
ELISA – Indireto (Ag-Ac-Ac)
PREPARO DA SOLUÇÃO DE LAVAGEM
A Solução de Lavagem Concentrada deve ser diluída 1:10 com água deionizada. Adicionar 50 mL da Solução de
Lavagem Concentrada (no 5) a 450 mL de água. Estável 2 semanas entre 2 – 8 °C.
Para preparar volumes menores seguir a tabela abaixo:
Nº Tiras requeridas
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
Solução Lavagem Concentrada (mL)
4
8
12
16
20
24
28
32
36
40
44
Água purificada (mL)
36
72
108
144
180
216
252
288
324
360
396
PREPARO DO CONJUGADO (Preparar no momento do uso)
O Conjugado Concentrado (no 2) deve ser diluído 1:51 com o Diluente de Conjugado (no 3). Adicionar 0,3 mL de
Conjugado Concentrado ao frasco que contém 15 mL de Diluente de Conjugado e homogeneizar suavemente. No
caso de não utilizar uma placa completa, preparar o volume de solução necessária, de acordo com a tabela
abaixo:
Nº Tiras requeridas
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
Diluente de Conjugado (mL)
1,0
2,0
3,0
4,0
5,0
6,0
7,0
8,0
9,0
10,0
11,0
Conjugado Concentrado (mL)
0,02
0,04
0,06
0,08
0,10
0,12
0,14
0,16
0,18
0,20
0,22
PREPARO DA SOLUÇÃO SUBSTRATO-CROMÓGENO (Preparar 10 minutos antes do uso)
O reagente Cromógeno (no 7) congela a temperatura ≤18 °C. Deixar atingir a temperatura ambiente (20 - 25 °C)
para que descongele completamente e homogeneizar bem antes de usar. Preparar 10 minutos antes do uso.
Adicionar 0,28 mL do Cromógeno (no 7) ao frasco que contém 14 mL de Tampão Substrato (no 6) e homogeneizar
bem. A solução para uso é incolor e deve ser mantida em recipiente vedado e ao abrigo da luz. Descartar caso se
torne azul.
No caso de não utilizar uma placa completa, preparar o volume necessário, de acordo com a tabela abaixo:
Nº Tiras requeridas
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
Tampão Substrato (mL)
1,0
2,0
3,0
4,0
5,0
6,0
7,0
8,0
9,0
10,0
11,0
Cromógeno (mL)
0,02
0,04
0,06
0,08
0,10
0,12
0,14
0,16
0,18
0,20
0,22
DILUIÇÃO DAS AMOSTRAS
Preparar diluições 1:101 do Calibrador Positivo Baixo, Calibrador Positivo Alto, Controle Negativo e Amostras com
o Diluente de Amostras (no 4).
Exemplo: Em um tubo colocar 1 mL de Diluente de Amostras e adicionar 0,01 mL de soro. Homogeneizar
suavemente.
TOXO-IgG
Ref. 408
VALIDAÇÃO DO ENSAIO
As absorbâncias devem ser consideradas após subtração do branco de substrato.
O não cumprimento de qualquer destes critérios INVALIDA o ensaio analítico.
Branco do Substrato
Controle Negativo
Calibrador Positivo Alto
Calibrador Positivo Baixo
Relação Calibrador Positivo Alto / Calibrador Positivo Baixo
Relação Controle Negativo / Calibrador Positivo Baixo
Absorbância ≤ 0,100
Absorbância < 0,100
Absorbância ≥ 0,600
Absorbância ≥ 0,150
≥ 2,5
≤ 0,5
RESULTADOS QUALITATIVOS
1- Calcular a média das absorbâncias do Calibrador Positivo Baixo.
O valor que se obtém é o Cut-off do ensaio.
Cut-off = x Calibrador Positivo Baixo
2-Dividir a absorbância de cada amostra pelo Cut-off.
3- Resultados:
Amostra
Reativa ou Positiva
Não Reativa ou Negativa
Inconclusiva
Relação Absorbância / Cut-off
≥ 1,10
< 0,90
≥ 0,90 e < 1,10
RESULTADOS QUANTITATIVOS
1- Calcular a média das absorbâncias do Calibrador Positivo Baixo. A concentração de IgG anti-toxoplasma do
Calibrador Positivo Baixo é de 10 UI/mL.
2- Calcular a média das absorbâncias do Calibrador Positivo Alto. A concentração de IgG anti-toxoplasma do
Calibrador Positivo Alto é de 200 UI/mL.
3- Representar em coordenadas linear-log, em folha de papel semi-logarítmico, as médias das absorbâncias dos
calibradores na ordenada (eixo y, linear) contra suas respectivas concentrações em UI/mL na abscissa (eixo x,
log).
4- Traçar uma linha passando pelos 2 pontos.
5- Utilizando o gráfico com a reta obtida, encontra-se as concentrações das amostras a partir de suas
absorbâncias.
Para facilitar os cálculos dos resultados quantitativos, utilizar planilha: TOXO – IgG – RESULTADOS
QUANTITATIVOS, disponível em www.labtest.com.br.
ORIENTAÇÕES
D Ler as instruções de uso do produto.
D Todos os reagentes devem estar à temperatura ambiente (20 - 25 °C) antes de iniciar o ensaio.
D Os reagentes líquidos devem ser homogeneizados suavemente antes do uso.
D Realizar as leituras no prazo máximo de 30 minutos após a adição da Solução Substrato-Cromógeno.
D Caso a leitora não permita o ajuste do zero com o Branco do Substrato, é necessário subtrair seu valor das
absorbâncias das amostras e controles.
TOXO-IgG
1
PROCEDIMENTO
Deixar um poço vazio para o Branco do Substrato.
Ø
2
Transferir 0,1 mL do Controle Negativo, Calibrador Positivo Baixo e Calibrador Positivo alto (2 replicatas de
cada) e amostra aos poços correspondentes.
Ver item Diluição de Amostras.
Ø
3
Cobrir a placa com uma folha adesiva, agitar delicadamente e incubar a 37 °C por 60 minutos.
Ø
4
Retirar e descartar a folha adesiva.
Aspirar o conteúdo dos poços e enchê-los completamente (± 0,350 mL) com a Solução de Lavagem diluída.
Repetir o processo de aspiração e lavagem mais 3 vezes, perfazendo um total de 4 ciclos de lavagem.
Manter a solução de lavagem nos poços por pelo menos 15 segundos antes de cada ciclo de aspiração.
Após a última lavagem, golpear a placa invertida sobre um papel absorvente para eliminar o excesso de
líquido
Ø
5
Adicionar 0,1 mL do Conjugado diluído em todos os poços, exceto ao poço reservado ao Branco de
Substrato. Evitar a formação de bolhas.
Ø
6
Cobrir a placa com uma nova folha adesiva e incubar a 37 ºC por 30 minutos.
Ø
7
Ao final da incubação retirar a folha adesiva. Aspirar e lavar a placa como no passo 4.
Ø
8
Adicionar 0,1 mL da Solução Substrato-Cromógeno diluída em todos os poços, inclusive no poço
reservado ao Branco de Substrato.
Ø
9
Incubar 30 minutos à temperatura ambiente (20 a 25 °C) e ao abrigo da luz.
Ø
10
Adicionar 0,1 mL da Solução de Parada (no 11) a todos os poços, respeitando a mesma sequência e
intervalos de tempo da adição da solução Substrato-Cromógeno.
Ø
11
Ajustar o zero da leitora com o poço reservado ao Branco de Substrato em 450 nm e medir a absorbância
em cada um dos poços no prazo máximo de 30 minutos. Recomenda-se realizar leitura bicromática
utilizando filtro secundário de 620 - 630 nm.
TOXO-IgM
Ref. 409
Sistema para determinação qualitativa e semi-quantitativa de anticorpos IgM específicos anti-toxoplasma
em soro ou plasma.
ELISA – Sanduíche-Imunocaptura (Ac-Ac-Ag)
PREPARO DA SOLUÇÃO DE LAVAGEM
A Solução de Lavagem Concentrada deve ser diluída 1:10 com água deionizada. Adicionar 50 mL da Solução de
Lavagem Concentrada (no 4) a 450 mL de água. Estável 2 semanas entre 2 – 8 °C.
Para preparar volumes menores seguir a tabela abaixo:
Nº Tiras requeridas
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
Solução Lavagem Concentrada (mL)
4
8
12
16
20
24
28
32
36
40
44
Água deionizada (mL)
36
72
108
144
180
216
252
288
324
360
396
PREPARO DO CONJUGADO (Preparar no momento do uso)
O Conjugado Concentrado (no 2) deve ser diluído 1:51 com o Diluente do Conjugado (no 3). Adicionar 0,3 mL de
Conjugado Concentrado ao frasco que contém 15 mL de Diluente de Conjugado e homogeneizar suavemente. No
caso de não utilizar uma placa completa, preparar o volume de solução necessária, de acordo com a tabela
abaixo:
Nº Tiras requeridas
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
Diluente de Conjugado (mL)
1,0
2,0
3,0
4,0
5,0
6,0
7,0
8,0
9,0
10,0
11,0
Conjugado Concentrado (mL)
0,02
0,04
0,06
0,08
0,10
0,12
0,14
0,16
0,18
0,20
0,22
PREPARO DA SOLUÇÃO SUBSTRATO-CROMÓGENO (Preparar 10 minutos antes do uso)
O reagente Cromógeno (no 7) congela a temperatura ≤18 °C. Deixar atingir a temperatura ambiente (20 - 25 °C)
para que descongele completamente e homogeneizar bem antes de usar. Preparar 10 minutos antes do uso.
Adicionar 0,28 mL do Cromógeno (no 7) ao frasco que contém 14 mL de Tampão Substrato (no 6) e homogeneizar
bem. A solução para uso é incolor e deve ser mantida em recipiente vedado e ao abrigo da luz. Descartar caso se
torne azul.
No caso de não utilizar uma placa completa, preparar o volume necessário, de acordo com a tabela abaixo:
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
Tampão Substrato (mL)
1,0
2,0
3,0
4,0
5,0
6,0
7,0
8,0
9,0
10,0
11,0
Cromógeno (mL)
0,02
0,04
0,06
0,08
0,10
0,12
0,14
0,16
0,18
0,20
0,22
Nº Tiras requeridas
DILUIÇÃO DAS AMOSTRAS
Preparar diluições 1:101 das Amostras com o Diluente de Amostras (no 4).
Exemplo: Em um tubo colocar 1 mL de Diluente de Amostras e adicionar 0,01 mL de soro. Homogeneizar
suavemente.
NÃO DILUIR OS CONTROLES (no 7,8 e 9), POIS ESTÃO PRONTOS PARA USO.
TOXO-IgM
Ref. 409
VALIDAÇÃO DO ENSAIO
As absorbâncias devem ser consideradas após subtração do branco de substrato.
O não cumprimento de qualquer destes critérios INVALIDA o ensaio analítico.
Branco do Substrato
Controle Negativo
Controle Positivo Baixo
Controle Positivo Alto
Relação Controle Positivo Alto / Controle Positivo Baixo
Relação Controle Negativo / Controle Positivo Baixo
Absorbância ≤ 0,100
Absorbância < 0,120
Cada absorbância não deve variar mais que
30%em relação à média das 3 replicatas.
A média das absorbâncias deve ser ≥ 0,200
Absorbância ≥ 0,600
≥ 1,5
≤ 0,5
RESULTADOS QUALITATIVOS
1- Calcular a média das absorbâncias do Controle Positivo Baixo.
O valor que se obtém é o Cut-off do ensaio.
Cut-off = x Controle Positivo Baixo
2-Dividir a absorbância de cada amostra pelo Cut-off.
3- Resultados:
Amostra
Reativa ou Positiva
Não Reativa ou Negativa
Inconclusiva
Relação Absorbância / Cut-off
≥ 1,10
< 0,90
≥ 0,90 e < 1,10
RESULTADOS SEMI-QUANTITATIVOS
1- Calcular o Cut-off como descrito anteriormente.
2- Calcular a concentração das IgM em Unidades Arbitrárias (UA/mL) dividindo a absorbância da amostra pelo
valor do Cut-off e multiplicando o resultado por 10.
UA/mL = absorbância da amostra / Cut-off x 10
3- Resultados:
Amostra
Reativa ou Positiva
Não Reativa ou Negativa
Inconclusiva
Resultado em UA/mL
≥ 11
<9
≥ 9 e < 11
ORIENTAÇÕES
D Ler as instruções de uso do produto.
D Todos os reagentes devem estar à temperatura ambiente (20 - 25 °C) antes de iniciar o ensaio.
D Os reagentes líquidos devem ser homogeneizados suavemente antes do uso.
D Realizar as leituras no prazo máximo de 30 minutos após a adição da Solução Substrato-Cromógeno.
D Caso a leitora não permita o ajuste do zero com o Branco do Substrato, é necessário subtrair seu valor das
absorbâncias das amostras e controles.
TOXO-IgM
1
PROCEDIMENTO
Deixar um poço vazio para o Branco do Substrato.
Ø
2
Transferir 0,1 mL do Controle Negativo e Controle Positivo Alto (2 replicatas), Controle Positivo Baixo (3
replicatas) e amostras diluídas aos poços correspondentes.
Ø
3
Cobrir a placa com uma folha adesiva, agitar delicadamente e incubar a 37 °C por 60 minutos.
Ø
Retirar e descartar a folha adesiva.
Aspirar o conteúdo dos poços e enchê-los completamente (± 0,350 mL) com a Solução de Lavagem diluída.
4
Repetir o processo de aspiração e lavagem mais 3 vezes, perfazendo um total de 4 ciclos de lavagem.
Manter a solução de lavagem nos poços por pelo menos 15 segundos antes de cada ciclo de aspiração.
Após a última lavagem, golpear a placa invertida sobre um papel absorvente para eliminar o excesso de
líquido
Ø
5
Adicionar 0,1 mL do Conjugado diluído em todos os poços, exceto ao poço reservado ao Branco de
Substrato. Evitar a formação de bolhas.
Ø
6
Cobrir a placa com uma nova folha adesiva e incubar a 37 ºC por 60 minutos.
Ø
7
Ao final da incubação retirar a folha adesiva. Aspirar e lavar a placa como no passo 4.
Ø
8
Adicionar 0,1 mL da Solução Substrato-Cromógeno diluída em todos os poços, inclusive no poço
reservado ao Branco de Substrato.
Ø
9
Incubar 30 minutos à temperatura ambiente (20 a 25 °C) e ao abrigo da luz.
Ø
10
Adicionar 0,1 mL da Solução de Parada (no 11) a todos os poços, respeitando a mesma sequência e
intervalos de tempo da adição da solução Substrato-Cromógeno
Ø
11
Ajustar o zero da leitora com o poço reservado ao Branco de Substrato em 450 nm e medir a absorbância
em cada um dos poços no prazo máximo de 30 minutos.
Recomenda-se realizar leitura bicromática utilizando filtro secundário de 620 - 630 nm.