O Respirômetro de Warburg
Década de 20
Coloca o
substrato
Tecido
Meio de cultura
Fluido
com cor
Papel de filtro
com KOH
KOH + CO2
•Detecta CO2 Produzido
•Detecta o O2 Consumido
Glicose + 6O2
KHCO3
CO2 KHCO3
Pressão no frasco
Leitura do líquido
6CO2 + 6 H2O + Energia
1
Qual o destino do Piruvato na presença de O2 ?
A: Piruvato (C3) + 3O2
3CO2 + 3 H2O
B: Piruvato (C3) + ácidos dicarboxílicos (C4) + 7O2
3CO2 + 3 H2O
Músculo de peito de pombo
Moles CO2
produzidos
B
3
2
1
0
A
0
5 10 15
Szent – Györg (1930)
testa os ácidos C4
•Malato
•Oxalacetato
•Succinato
•Fumrato
20
Tempo (min)
 Não eram consumidos na reação
 Efeito catalítico na respiração dos tecidos
2
Oxidação e formação de bicarbonato a partir de acidos organicos em cortes de rim de
porquinho da india (cobaia)
Sustrato
Nada
Acetato
Succinato
Fumarato
Malato
Pi ruvato
O2 uptake
(mmols/g dry wt/h)
670
1340
1520
1290
1340
1070
Formação de bicarbonato
(mmols/g dry wt/h)
0
393
555
705
756
318
Enzima da respiração
citicromo
Onde entraria o CO2 ?
Não era na fermentação ...
3
Sir Hans-Krebs (1935)
Testa ácidos dicarboxílicos de 5 carbonos - Alfa cetoglutarato
Moles CO2
produzidos
3
2
1
0
Piruvato
0
6
12 18
24 30
 Não eram consumidos na reação
 Efeito catalítico na respiração dos tecidos
Sir Hans-Krebs (1937)
Testa ácidos tricarboxílicos de 6 carbonos
Moles CO2
produzidos
3
2
1
0
Piruvato
0
6
12 18
•Citrato
•Aconitato
•Isocitrato
24 30
 Não eram consumidos na reação
 Efeito catalítico na respiração dos tecidos
4
Martius & Knoop, 1937 6 Carbonos-
Hans A. Krebs, 1937
Pyruvate
5 Carbonos +CO2
Krebs sabia que o oxalacetato, na presença de piruvato,
gerava citrato ...
Citrate
Oxaloacetate
A adição de malonato inibe a respiração e acumula
5
o produto da reação - fumarato. Deduziu que era um ciclo !
Krebs – NOBEL (1943)
6
Coenzima a importante para reações de tranferência de carbonos
7
Ochoa Lynen: Acetil – CoA como intermediário
Piruvato
Acetil-CoA
Citrato + CoA-SH
Oxalacetato
8
• Malonato inbe competitivamente a
succinato desidrogenase
• Fluoroacetato (análogo da acetilCoA. Se condensa c/ oxalacetato e
forma fluorocitrato (inibe
competitivamente a aconitase). Isso
elevará a concentração de citrato,
que inibe a PFK. Ou seja,
fluoroacetato inibe a glicólise
9
E1 – Piruvato Desidrogenase
E2 - Dihidrolipoil Transacetilase
E3 – Dihidrolipoil Dehidrogenase
10
11
Piruvato
NAD+
CO2
NADH
CoA-SH
12
13
14
Vermelho – CoA
Laranja - Fosfato
15
16
17
18
19