Laboratório Multiusuário de Estudos em Biologia III
Universidade Federal de Santa Catarina
Centro de Ciências Biológicas
www.lameb3.ccb.ufsc.br
PROTOCOLO DE SOLUÇÕES UTILIZADAS NAS TÉCNICAS
COMUNS PARA CORTES EM CRIOSTATO
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FIXADOR: SOLUÇÃO DE PFA 4%
12 g de PFA (PARAFORMALDEIDO) (CH2)n
150 mL de Água destilada
150 mL de PB 0,2M
Hidróxido de sódio NaOH
Preparo:
Aquecer a Água destilada até 70°C, no misturador, colocar a “pulga” (imã) e liga-lo,
acrescentando aos poucos o PFA.
Jogar duas pedrinhas ou mais de NaOH até a mistura ficar clara e homogênea.
Por último, acrescentar a solução de PB 0,2M
Obs.: medir pH (pH ~ 7,4) e filtrar a solução.
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SACAROSE:
Importante solução Crioprotetora
Obs.:
1) Fazer a solução no momento do uso (máximo 1/2 dia);
2) Dependendo o tecido é importante fazer mais diluições (10%, 20% e 30%).
Deixar de 1 a 2 horas na solução de 10 e 20% e no mínimo 4 horas na solução de 30%
(esta pode ficar por até 48hs);
OBS: Após 2 horas na sacarose 30% deve-se conservar o material em geladeira.
Solução de sacarose 10%
100ml tampão PB-0,1M
10g Sacarose (C12H22O11)
Solução de sacarose 20%
100ml tampão PB-0,1M
20g Sacarose (C12H22O11)
Solução de sacarose 30%
100ml tampão PB-0,1M
30g Sacarose (C12H22O11)
Campus Universitário Trindade, Ala Nova, Bloco C, 1° Andar, Sala 109C
Córrego Grande, Florianópolis, SC, CEP 88040-970
(48) 3721 4759, [email protected]
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SOLUÇÃO TAMPÃO – FOSFATO (PB- 0,2M)
1L de água destilada
11g de Fosfato de Sódio dibásico anidro
2,75g de Fosfato de Sódio monobásico monohidratado Na2PO4. H2O
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SOLUÇÃO TAMPÃO – FOSFATO (PB-0,1M)
1L de água destilada
1L de Tampão 0,2M
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GELATINIZAÇÃO DE LÂMINAS:
750 ml de Água destilada
0,48 g de Sulfato de Potássio (Cromo) KCr(SO4) – Pode ser usado também o toluol ou
o fenol
3,75g de gelatina
Preparo:
Aquecer a água até 70°C, quando a água estiver bem aquecida colocar a gelatina no
misturador, cuidando para não empelotar a gelatina.
Quando a solução estiver homogeneizada coloque o Sulfato de Potássio (Cromo)
Filtrar a solução
Mergulhar as lâminas em água destilada e depois mergulhar na solução.
Cuidado com bolhas, deixar secar na estufa.
Mergulhar novamente na solução e colocar novamente na estufa (2X).
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SILANIZAÇÃO DE LÂMINAS PARA IMUNOHISTOQUÍMICA
Silano 2,5% em Acetona
Solução de 400ml:
10ml de Silano ________________________ 400ml de Acetona
Procedimentos:
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Colocar as lâminas nas barquinhas de alumínio;
Mergulhar na solução de silano em acetona (5 min);
Mergulhar em água Destilada (2 min);
Deixar secando sobre papel pardo.
OBS: Não usar luva devido ao talco.
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SOLUÇÃO DE MONTAGEM
225ml de água destilada
225ml de PB-0,2M
50ml de etanol (Ch3CH2OH)
0,5g de gelatina
Preparo:
Aquecer a água até 60°C.
Acrescentar gelatina na água aquecida e colocar no misturador
Adicionar a solução PB 0,2M e por último adicionar o etanol
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SOLUÇÃO ANTICONGELANTE PH 7,4
125 mL de PB 0,2M
150 mL de Água destilada
75 g de sacarose
125 mL de propilenoglicol
Se for utilizar etilenoglicol será:
125 mL de etilenoglicol
125 mL de Água destilada
Se for utilizar glicerol será:
240 mL de gliceol
35 mL de Água destilada
Formol = 10%
Imunolis = P Formol 4%
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SOLUÇÃO SALINA 0,9%
1 L de Água destilada
9 g de NaCl
Obs.: filtrar solução
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