ELSIE NEIVA DOMINGUES DA SILVA GOMES
PADRONIZAÇÃO E APLICAÇÃO CLÍNICA DO RADIOIMUNOENSAIO DE
SOMATOMEDINA B SÉRICA HUMANA. DESENVOLVIMENTO DO MÉTODO DE
RADIOIODAÇÃO ENZIMÁTICA.
Orientador: Dr. Gian Maria Agostinho Angelo Sordi
RESUMO
Padronizou-se as diferentes fases para o radioimunoensaio de SM-B, efetuando-se
a radioiodação pelo método enzimático e a purificação em Sephadex G-25 fino e posterior
repurificação em G-75. Demonstrou-se que a preparação de SM-B marcada com
125
I,
apresenta pureza radioquímica de 99,8%, atividade específica média determinada pelo
método de auto deslocamento de 54,1 ± 3,6 e ligação de 98% em presença de excesso
de anticorpo.
A separação das frações livres e ligadas foi feita pelo método do segundo
anticorpo, após um período de incubação de 4 dias a 4°C.
A análise estatística do método demonstra a sua especificidade, analisada através
do estudo do efeito de diluição do soro em determinações de SM-B endógena. O
coeficiente de correlação entre os diferentes volumes de soro e os valores obtidos, foi r =
0,9944. O estudo da exatidão, demonstrou, recuperações de soros, adicionados à solução
padrão, de 83% para 0,21 ng/ml e 103% para 1,03 ng/ml de SM-B. O coeficiente de
correlação entre os valores esperados. ou teóricos e os valores obtidos nas provas de
recuperação, foi r = 0,9993. A precisão foi estimada pela reprodutibilidade intra e inter
ensaios no primeiro caso, acusou coeficientes de variação de 9,7, 5,1 e 4,9%
respectivamente, para as amostras de soros com elevado, médio e baixo teor de SM-B
para o primeiro caso. Os coeficientes de variação na reprodutibilidade inter-ensaio foram
de 11,1, 7,0 e 7,9% para valores altos, médios e baixos de SM-B respectivamente.
A sensibilidade da técnica determinada por análise discreta dos pontos iniciais da
curva padrão, resultou em 0,31 ng/ml.
Finalmente apresenta-se os níveis de SM-B séricos encontrados em indivíduos
normais e com alterações da secreção de HGH.