João Silva Neves
Introdução
 Grupo de Neuroendocrinologia e Neurogénese
- Culturas de células
- Técnicas laboratoriais
Tipos de cultura de células
 Culturas primárias- culturas feitas directamente a
partir de tecidos animais/vegetais.
 Linha celular- células que foram retiradas de tecidos
animais, e que foram modificadas de modo a poderem
proliferar indefinidamente.
Vantagens
 Culturas primárias: Células não modificadas geneticamente
que apresentam as características das células in vivo.
 Linhas celulares: Células imortalizadas que proliferam
indefinidamente permitindo que sejam usadas muitas
vezes.
Desvantagens
 Culturas primárias: Utilização limitada (proliferação
reduzida ou inexistente). Utilização de um número
elevado de animais.
 Linhas celulares: Células geneticamente modificadas
que podem não apresentar as características das
células in vivo.
Exemplos
 Linhas celulares
3T3-L1
N42
 Culturas primárias- Hipotálamo
Técnicas laboratoriais
 Para estudar proteínas:
- Imunocitoquímica/ Imunohistoquímica
- Western blot.
 Para estudar lípidos:
- Oil red
 Para estudar RNA:
- RT-PCR
Para estudar proteínas
 Imunocitoquímica/Imunohistoquímica: Técnica que
usa anticorpos específicos para a detecção de proteínas
existentes nas células/tecidos, sem alteração da sua
morfologia
 Os anticorpos estão ligados a sondas, permitindo a sua
visualização a microscópio de fluorescência.
TUJ
DAPI
Para estudar proteínas
 Western Blot: Técnica que usa anticorpos específicos
para a detecção de proteínas existentes num lisado de
células ou tecido
 As proteínas são separadas de acordo com o peso
molecular e reconhecidas através da ligação a
anticorpos específicos.
Para estudar lípidos
 Oil Red: Técnica utilizada com o objectivo de
observar/quantificar as gotas lipídicas nas células,
através do reagente Oil Red O que cora os lípidos de
vermelho.
Para estudar RNA
 RT-PCR: É uma reacção que permite detectar o RNA
das células.
- Utiliza como molde uma cadeia simples de RNA.
- A partir do RNA cria-se uma cadeia de DNA
complementar, cDNA, pela utilização da enzima
transcriptase reversa (Transcrição reversa – RT)
Transcriptase reversa
Para estudar RNA
 RT-PCR: É uma reacção que permite detectar o RNA
das células.
- A cadeia de cDNA é amplificada numa reacção em que
se usa a enzima DNA polimerase (reacção em cadeia
da polimerase – PCR)
Trabalho realizado por:
 João Pedro Silva Neves
FIM