XXV CONGRESSO BRASILEIRO DE ZOOTECNIA
ZOOTEC 2015
Dimensões Tecnológicas e Sociais da Zootecnia
Fortaleza – CE, 27 a 29 de maio de 2015
Análise da expressão de RNAm para interleucina 1 beta (IL-1β) e seu receptor IL-1RI em folículos
ovarianos bovinos1
Analysis of mRNA expression for interleukin 1 beta (IL-1β) and its receptor IL-1RI in bovine ovarian
follicles
Rithiele Dantas dos Santos2, José Renato de Sousa Passos3, Regislane Pinto Ribeiro4, José Jackson do
Nascimento Costa5, Ellen de Vasconcelos da Cunha6, Glaucinete Borges de Souza7, Francisco Taiã Gomes
Bezerra8, Adriel Pereira de Castro9 e José Roberto Viana Silva10
1
Parte da proposta de mestrado de José Renato de Sousa Passos, financiado pelo Conselho Nacional de
Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) – Edital 06/2011.
2
Graduando em Zootecnia, Universidade Estadual Vale do Acaraú –UVA, Sobral-CE, Brasil. Bolsista
CNPq/Capes. e-mail: [email protected]
3
Mestre em Biotecnologia pelo Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, Universidade Federal do
Ceará (UFC), Sobral-CE, Brasil.
4,5,6
Doutorando em Biotecnologia pelo Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia – RENORBIO,
Universidade Federal do Ceará (UFC), Fortaleza-CE, Brasil.
7
Mestranda em Biotecnologia pelo Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, Universidade Federal do
Ceará (UFC), Sobral-CE, Brasil.
8
Mestre em Biotecnologia pelo Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, Universidade Federal do
Ceará (UFC), Sobral-CE, Brasil.
9
Graduando em Zootecnia, Universidade Estadual Vale do Acaraú –UVA, Sobral-CE, Brasil.
10
Núcleo de Biotecnologia de Sobral- NUBIS, Universidade Federal do Ceará (UFC), Sobral-CE, Brasil.
Resumo: O objetivo deste estudo foi investigar a expressão do RNAm para interleucina 1 beta (IL-1β) e seu
receptor IL-1RI no oócito, células do cumulus e parede de folículos antrais bovinos. Ovários bovinos foram
coletados para obtenção do complexo cumulus oócito (COCs) oriundos de folículos antrais pequenos (<3 mm
de diâmetro) e grandes (>3 mm de diâmetro). Em seguida, oócitos, células do cumulus e parede folicular
foram recuperados e selecionados para avaliação da expressão do RNAm para IL-1β através da qPCR. Os
resultados demostraram níveis variáveis de RNAm para IL-1β em folículos antrais (<3mm e >3mm de
diâmetro). Em conclusão, a IL-1β é expressa diferencialmente em células ovarianas de acordo com a fase do
desenvolvimento folicular. Estes resultados sugerem um importante papel da interleucina 1 beta na regulação
da foliculogênese em bovinos.
Palavras–chave: bovino, citocina, RNAm
Abstract: The aim of this study was to investigate the expression of mRNA for interleukin 1 beta (IL-1β)
and its receptor IL-1RI in the oocyte, cumulus cells and follicular wall from antral follicles Bovine ovaries
were collected to obtain the cumulus oocyte complex (COC) derived from small (<3 mm in diameter) and
large antral follicles (>3 mm in diameter). Than, oocytes, cumulus cells and follicular walls were recovered
and selected for evaluation of mRNA expression of IL-1β by qPCR. Results showed varying levels of mRNA
for IL-1β in small (<3 mm in diameter) and large antral follicles. In conclusion, IL-1β was differentially
expressed in ovarian cells according to the stage of follicular development. These results suggest an
important role of interleukin 1 beta in the regulation of folliculogenesis in bovine.
Keywords: bovine, cytokine, mRNA
Introdução
O desenvolvimento folicular ovariano é regulado por diversas substâncias, como hormônios, fatores
de crescimento e citocinas. As interleucinas são citocinas que tem ação nas funções ovarianas, maturação
oocitária e ovulação (Field et al., 2014). Em ratos, a IL-1β tem ação nas células da granulosa e células da
teca, bem como na regulação da esteroidogênese e ovulação (Brännström et al., 1993b), retomada da meiose,
maturação nuclear e oocitária em éguas (Caillaud et al., 2005). Ambos os receptores de IL-1RI e IL-1RII
pode ligar-se a IL-1, no entanto, apenas a IL-1RI pode mediar o sinal de IL-1 (Dunn et al., 2001). Entretanto,
não existe qualquer informação sobre a expressão do RNAm para proteínas de IL-1β ou a localização da
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proteína deste ligante em folículos ovarianos bovinos. O presente trabalho teve como objetivo mostrar o
RNAm para a interleucina 1 beta (IL-1β) e seu receptor IL-1RI em complexo cumulus oócito, bem como
parede folicular folículos antrais pequenos (<3 mm de diâmetro) e grandes (>3 mm de diâmetro). Para isto,
os RNAm para IL-1β e seu receptor foram investigados por reação em cadeia da polimerase (qPCR).
Material e Métodos
Ovários (n=20) bovinos foram coletados em abatedouros locais e CCOs oriundos de folículos antrais
pequenos (<3 mm de diâmetro) e grandes (>3 mm de diâmetro) foram recuperados e selecionados sob um
microscópio estereoscópico. As células do cumulus foram removidas do oócito com auxílio do vórtex e
destinadas a extração de RNA total e síntese de cDNA. Logo em seguida, folículos folículos antrais pequenos
e grandes foram microdissecados para obtenção das paredes foliculares, com auxílio de agulhas 18G. A
quantificação do RNAm para IL1-β e seu receptor IL1-RI nas células do cumulus, oócito e paredes
foliculares foram realizadas por PCR em tempo real conduzida no equipamento Step One Plus (Applied
Biosystems, Foster City, CA, USA) com GoTaq®qPCR Master Mix (Promega) e prímers específicos para os
genes testados. Os níveis de RNAm para a IL1-β foram analisados através do teste Kruskal-Wallis e Dunn.
Os resultados foram expressos em média ± SEM e as diferenças foram consideradas significativas quando (P
<0,05).
Resultados e Discussão
Os níveis de RNAm para IL1-β em oócitos, células do cumulus e paredes foliculares a partir de
folículos ovarianos antrais (<3 mm) apresentaram uma redução significativa quando comparado com os
folículos antrais (>3mm) (Figura 1A). Com relação aos níveis de RNAm para o receptor IL1-RI, não foram
observadas diferenças significativas entre os compartimentos foliculares analisados (Figura 1B). A IL-1β foi
anteriormente demonstrada em oócitos, células da granulosa, teca e células do cumulus em mulheres
(Carlberg et al., 2000). Além disso, a IL-1β é produzida pelas células da granulosa de folículos ovarianos préovulatórios e tem papel importante na esteroidogênese em ovários humanos (Salamonsen et al., 2007).
Figuras -
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Figura 1. Expressão relativa do RNAm para a IL-1β e seu receptor IL-1RI em folículos
antrais (<3mm e >3mm). a, b: diferença significativa (P<0,05)
Conclusões
Os compartimentos foliculares (oócitos, células do cumulus e paredes foliculares) expressam RNAm
para IL-1β e IL-1R1. Há um aumento na expressão da IL-1β no oócito e na parede folicular à medida que o
folículo aumenta de tamanho. Além disso, estes resultados sugerem um importante papel da IL-1β na
regulação da foliculogênese em bovinos.
Agradecimentos
Ao financiado pelo Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) pelo
financiamento do projeto e ao Conselho de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) pela
concessão de bolsa.
Literatura citada
BRÄNNSTRÖM, M.; NORMAN, R. J.; SEAMARK, R. F.; ROBERTSON, S. A. Rat ovary produces
cytokines during ovulation. Biology of Reproduction, v. 50, n. 1, p. 88–94, 1994.
BRANNSTROM M, MAYRHOFER G, ROBERTSON S. A. Localization of leukocyte subsets in the rat
ovary during the periovulatory period. Biology of Reproduction, v. 48, n. 2, p. 277-286, 1993.
CARLBERG, M.; NEJATY, J.; FRÖYSA, B.; GUAN, Y.; SÖDER, O.; BERGQVIST, A. Elevated
expression of tumor necrosis fator alpha in cultured granulosa cells from women with endometriosis. Human
Reproduction, v. 15, n. 6, p. 1250-1255, 2000.
DUNN, E.; SIMS, J. E.; NICKLIN, M. J, O'NEILL L. A. Annotating genes with potential roles in the
immune system: Six new members of the il-1 family. Trends in immunology, v. 22, p. 533-536, 2001.
FIELD, S. L.; DASGUPTA, T.; CUMMINGS, M.; ORSI, N. M. Cytokines in ovarian folliculogenesis,
oocyte maturation and luteinisation. Molecular Reproduction and Development, v. 81, n. 4, p. 284-314,
2014.
SALAMONSEN, L. A.; HANNAN, N. J.; DIMITRIADIS, E. Cytokines and chemokines during human
embryo implantation: Roles in implantation and early placentation. Seminars in Reproductive Medicine, v.
25, p. 437-444, 2007.
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