Resumos do 49° Congresso Brasileiro de Genética
Águas de Lindóia, SP, 16 a 19 de Setembro de 2003
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CLONAGEM DE DUAS SEQÜÊNCIAS DE cDNA DE CANA-DE-AÇÚCAR HOMÓLOGAS À MutM
EM VETORES DE SUPER -EXPRESSÃO EM PLANTAS
Silva, Raphael Cleofas Andrade; Silva, Geyzenilce de Oliveira; Lima, Alexsandra Fernanda de Oliveira; Medeiros,
Sílvia Regina Batistuzzo de; Agn ez- Lima, Lucymara Fassarella; Scortecci, Kátia Castanho
Universidade Federal do Rio Grande do Norte – Departamento de Biologia Celular e Genética - Laboratório de
Biologia Molecular e Genômica
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Palavras-chave: Reparo de DNA, cana-de-açúcar, MutM Glicosilase.
O genoma de todos os organismos está suscetível a reagir com agentes exógenos ou produzidos
pelo próprio metabolismo, que promovem lesões na fita de DNA. A fim de corrigir essas lesões,
existem mecanismos que restauram a composição e a estrutura do DNA lesado como o mecanismo
de Reparo por Excisão de Base (R.E.B.), que envolve a ação de diferentes enzimas como DNA
glicosilases, AP endonucleases, DNA polimerases e ligases. O seqüenciamento do genoma da canade-açúcar (projeto SUCEST – FAPESP) revelou a presença de quatro clusters homólogos à proteína
MutM, dos quais dois, scMutM1 e scMutM2, foram escolhidas para serem caracterizados. Estudos
filogenéticos mostraram que essas duas seqüências são independentes, sugerindo que sejam dois
genes. A proteína MutM é uma DNA glicosilase envolvida no reparo de lesões oxidativas como 7,8dihidro-8-desoxiguanina (8-oxoG) e purinas com anel imidazólico aberto (FAPY-G). Ensaios de
complementação bacteriana foram realizados e sugerem que tanto scMutM1 como scMutM2 são
capazes de complementar cepas deficientes no reparo dessas lesões. O objetivo deste trabalho
consiste em caracterizar estes genes funcionalmente em plantas. Esta caracterização está sendo
realizada através da super-expressão de scMutM1 e scMutM2 em plantas de cana-de-açúcar e
Arabidopsis thaliana (modelo genético vegetal), para isso, a seqüência foi clonada em dois diferentes
vetores de super-expressão. A seqüência, subclonada no plasmídeo pSPORT, foi obtida pela
digestão com NotI e SalI e tratada com T4 -DNA-polimerase, a fim de criar pontas cegas permitindo a
ligação a estes vetores, que foram tratados também com fosfatase alcalina, que remove o grupo 5´fosfato, evitando assim a liga ção do vetor sem inserto. Os vetores utilizados serão o pAHC17,
utilizado para transformar cana-de -açúcar, pois contém o promotor da Ubiqutina, e um outro vetor
contendo o promotor CaMV 35S, para Arabidopsis. A utilização destes dois vetores deve-se ao fato
que estes apresentam promotores de expressão específica para monocotiledôneas e dicotiledôneas.
A transformação de cana-de-açúcar será feita por bombardeamento enquanto Arabidopsis será
transformada pelo método de infiltração dos botões florais utilizando a bactéria Agrobacterium
tumenfaciens . A utilização da super -expressão permitirá a caracterização funcional destas proteínas
em plantas na presença ou ausência de agentes exógenos.
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