INSTRUÇÕES DE USO
β-hCG Quantitativo
Método Imunoenzimático (ELISA) para a determinação quantitativa
da Gonadotrofina Coriônica humana (hCG).
FINALIDADE
O conjunto para β-hCG Quantitativo é um sistema que se destina à
determinação quantitativa da Gonadotrofina coriônica humana no soro.
Lavadora automática de placas (opcional)
Centrífuga
Cronômetro
Vidraria
Pipetas manuais ou automáticas
PRINCÍPIO DE AÇÃO
A Gonadotrofina Coriônica humana (hCG) presente no soro forma complexos
específicos com anticorpos anti-hCG imobilizados em placa de poliestireno.
Após remoção da amostra através de lavagens, é adicionado um segundo
anticorpo monoclonal marcado com peroxidase e específico para a cadeia beta
do hCG imobilizado, levando à formação de um complexo ternário. Após
remoção dos anticorpos conjugados não ligados através de lavagens, o
complexo imobilizado é exposto a uma solução de 3,3’,5,5’ Tetrametilbenzidina
contendo água oxigenada a qual, sob a ação da Peroxidase imobilizada, produz
uma coloração azul. A adição de um ácido forte à mistura paralisa a reação e
produz uma cor amarelada com um máximo de absorção em 450 nm e cuja
intensidade é proporcional à concentração de hCG na amostra.
A Katal desenvolveu método otimizado para a determinação do hCG o qual
requer apenas 40 min de tempo total de teste.
Água destilada ou deionizada
CUIDADOS NO
REAGENTES
ARMAZENAMENTO
E
TRANSPORTE
DOS
As datas de fabricação e validade aparecem no rótulo da embalagem.
Não usar reagentes cujas datas de validade tenham expirado.
Os reagentes devem ser mantidos sob refrigeração, na faixa de 2 a 8ºC.
Não congelar. Manter ao abrigo da luz. O reagente deve permanecer fora
do refrigerador apenas o tempo necessário para as dosagens.
Antes de serem abertos, os reagentes podem ser transportados na
temperatura ambiente (15 a 25ºC), até um limite de 48 horas.
PRECAUÇÕES E CUIDADOS ESPECIAIS
Somente para uso diagnóstico “in vitro”.
REAGENTES
Evitar contaminação com íons metálicos ou agentes oxidantes.
Código : 40IM
Conjunto para 96 determinações quantitativas do βHCG, contendo:
1. 01 placa de poliestireno com 96 microcavidades destacáveis contendo
anticorpo anti - β hCG imobilizado.
Manter a placa acondicionada dentro da embalagem plástica contendo
dessecante. Conservar entre 2 e 8ºC.
2. Diluente de Amostras
01 frasco com 11 mL contendo solução tamponada em pH 8,1 em matriz
protéica, corante artificial 0,40 g/L e Timerosal 0,1g/L como preservativo.
Conservar entre 2 e 8ºC.
3 a 8. Calibradores
06 frascos com 0,5 mL cada, contendo Gonadotrofina coriônica humana (hCG)
em matriz protéica nas concentrações de 0, 10, 50, 100, 300 e 500 mUI//mL e
Timerosal 0,1 g/L como preservativo. Conservar entre 2 e 8ºC.
9. Conjugado
01 frasco com 11 mL de solução tamponada em pH 7,4 contendo anticorpo
monoclonal anti–βhCG conjugado com Peroxidase, corante artificial 0,05 g/dL e
Bromonitro dioxano 0,04 g/dL como preservativo. Conservar entre 2 e 8ºC.
10. Substrato
01 frasco com 11 mL de solução tamponada em pH 3,5 contendo 3,3’,5,5’Tetrametilbenzidina 0,5 mmol/L, Peróxido de hidrogênio 1,0 µmol/L e
Bromonitro dioxano 0,04 g/dL como preservativo. Conservar entre 2 e 8ºC.
A leitora de placas ou mesmo equipamentos automatizados devem ficar
livres de contaminação microbiana, serem calibrados corretamente e
receber manutenção de acordo com as instruções do fabricante.
ATENÇÃO: Reagente extremamente fotossensível. Protegê-lo da ação da
luz. O Reagente deve permanecer incolor ou ligeiramente azulado. O
aparecimento de coloração azul intensa indica contaminação e o reagente
deve ser descartado.
11. Solução de Bloqueio
01 frasco contendo 11 mL de solução de Ácido sulfúrico 0,5 mol/L.
12. Solução de Lavagem
01 frasco contendo 100 mL de solução de NaCl 42,5 g/L (10 x concentrada)
tamponada em pH 7,4, surfactante não iônico 0,025% e Bromonitro dioxano.
Conservar entre 2 e 8ºC.
ATENÇÃO: Devido à alta concentração de NaCl nesta solução, é normal
ocorrer uma pequena precipitação do sal. Basta diluir a solução de acordo com
o procedimento descrito nestas Instruções de Uso. Deixar agitando por 5 a 10
minutos, até a dissolução completa dos cristais.
Não misturar ou trocar diferentes lotes de reagentes. Evitar contaminação
microbiana do reagente e não utilizar reagentes que tenham sinais de
contaminação ou precipitação.
Usar pipetas de vidro e ponteiras descartáveis separadas para cada
amostra, padrões, controle e reagentes.
Não dispensar os reagentes em tubulação contendo ferro galvanizado.
Usar luvas descartáveis quando manusear reagentes.
Não comer, beber, fumar, armazenar ou preparar alimentos, ou aplicar
cosméticos dentro da área de trabalho onde reagentes e amostras
estiverem sendo manuseados.
O Reagente nº 11 é cáustico e corrosivo. Em caso de contato lavar
imediatamente o local afetado com água em profusão. Em caso de
ingestão acidental, procurar auxílio médico imediato. Não provocar
vômitos.
AMOSTRA
Soro.
O βHCG na amostra é estável por dois dias entre 2 e 8ºC e três meses
congelada. Amostras congeladas devem ser misturadas por inversão
várias vezes após seu descongelamento.
Todo o material biológico deve ser processado como sendo
potencialmente contaminante. Usar luvas descartáveis durante a
manipulação. As amostras devem ser descartadas, após o uso, em
recipientes específicos, segundo as normas da Secretaria de Vigilância
Sanitária local. Não dispensar em coletores de lixo comuns ou nas redes
de água e esgoto. Lavar sempre as mãos após trabalhar com material
potencialmente infectante.
PROCEDIMENTO
Ler cuidadosamente as instruções desta bula.
MATERIAIS NECESSÁRIOS NÃO FORNECIDOS
Preparo da Solução de lavagem de uso: Transferir o conteúdo do
frasco para um balão volumétrico de 1.000 mL e completar o volume com
água destilada ou deionizada. Homogeneizar bem e transferir para um
frasco de vidro ou plástico. Estável por 02 meses entre 2 e 8ºC.
Leitora de placas com microcavidades
Os demais reagentes do kit estão prontos para uso.
Destacar o número de microcavidades necessárias para os testes, incluindo
Amostras, Calibradores e Controles, colocá-las no suporte apropriado e
proceder como a seguir :
1. Adicionar 100 µL de Diluente (nº 2) a todas as microcavidades;
2. Adicionar 25 µL de água destilada ou deionizada na microcavidade a ser
utilizada como Branco;
3. Adicionar 25 µL dos Calibradores (nºs 3 a 8) e Amostras nas demais
microcavidades;
4. Homogeneizar através de movimentos circulares durante 10 segundos. É
importante uma homogeneização rigorosa;
5. Incubar a 37°C durante 15 minutos;
6. Desprezar a mistura de incubação, lavar as microcavidades 4 vezes com
solução de lavagem de uso e invertê-las em papel absorvente para retirar o
excesso de líquido.
7. Adicionar 100 µL de Conjugado (n° 9) a todas as microcavidades;
8. Homogeneizar através de movimentos circulares durante 10 segundos.
9. Incubar a 37°C durante 15 minutos;
10. Desprezar a mistura de incubação, lavar as microcavidades 6 vezes com
solução de lavagem de uso e invertê-las em papel absorvente para retirar o
excesso de líquido.
11. Adicionar 100 µL de Substrato (nº 10)
12. Incubar a 37°C durante 10 minutos;
13. Adicionar 100 µL de Solução de Bloqueio (nº 11).
14. Efetuar as leituras espectrofotométricas em 450 nm (filtro secundário em
600-630) em leitora apropriada, no máximo 15 minutos após a adição da
Solução de Bloqueio (nº 11).
CÁLCULOS
Preparar uma curva de calibração locando, em papel de gráfico semi-log, os
valores das concentrações dos padrões de hCG no eixo dos X e os valores das
absorbâncias no eixo dos Y. Calcular as concentrações das amostras e
controles por interpolação gráfica. A curva de calibração é estável por 30 dias
se os reagentes forem mantidos fora da geladeira apenas o tempo necessário
para as dosagens e ao abrigo da luz direta.
ATENÇÃO
FAIXA DINÂMICA
A faixa dinâmica do método é até 500 mUI/mL. Amostras com absorbâncias
acima daquela obtida para o calibrador de 500 mUI/mL deverão ser liberadas
como “acima de 500 mUI/mL”. Se houver necessidade clínica, proceder à
titulação da amostra através de diluições sucessivas até que se encontre
valores de absorbância abaixo daquela obtida para o calibrador de 500 mUI/mL.
Sugere-se iniciar com uma diluição 1:101 (20 µL da Amostra + 2,0 mL de
solução salina fisiológica).
A inobservância da recomendação acima acarretará à liberação de resultados
falsamente diminuídos, pois as leitoras de ELISA possuem limitações
fotométricas e processarão todas as amostras com absorbâncias acima
daquelas obtidas para o Calibrador de 500 mUI/mL como discretamente acima
deste valor. A título de ilustração, valores de hCG na faixa de 5.000 a 2.000.000
mUI/mL poderão ser liberadas como sendo em torno de 600 mUI/mL. Nestas
circunstâncias, torna-se impossível a determinação aproximada da idade
gestacional ou mesmo o diagnóstico de tumores produtores de hCG. A Katal
ajustou a sensibilidade do teste visando a obtenção de absorbância para o
Calibrador de 500 mUI/mL próxima do limite da maioria das leitoras existentes
em nosso mercado.
VALORES DE REFERÊNCIA
A Gonadotrofina coriônica não é detectável em soros de homens ou mulheres
sadios. Durante a gravidez, os níveis do hormônio se elevam até uma faixa de 5
a 50 mUI/mL após aproximadamente 01 semana depois da implantação e
continua aumentando até atingir valores em torno de 250.000 mUI/mL no final
do primeiro trimestre da gravidez.
NOTA: A elevação do βHCG no soro está mais freqüentemente relacionada
com a gravidez. Entretanto, valores elevados são encontrados na mola
hidatiforme, no coriocarcinoma e nas neoplasias não trofoblásticas.
Como avaliação aproximada da idade gestacional, podem ser usados os
valores fornecidos abaixo, levando-se em conta que a determinação exata da
idade gestacional deve levar em conta dados clínicos e ultrasonográficos, entre
outros.
Idade gestacional
Até 01 semana
Valores de hCG (mUI/mL)
5 - 50
02 semanas
50 - 500
03 semanas
100 - 10.000
04 semanas
1000 - 30.000
05 semanas
3500 - 115.000
6 - 8 semanas
12.000 - 270.000
12 semanas
15.000 - 220.000
DADOS ESTATÍSTICOS DE DESEMPENHO DO TESTE
Recuperação : 101,9%.
Coeficiente de variação intra-ensaio (repetitividade): A realização de
20 determinações de uma mesma amostra com valor dentro da faixa de
referência, mostrou um coeficiente de variação igual a 6,3%.
Coeficiente de variação inter-ensaio (reprodutibilidade) A realização
de 20 determinações de uma mesma amostra com valor dentro da faixa
de referência, mostrou um coeficiente de variação igual a 6,7%.
Especificidade analítica: A comparação com método similar validado
demonstrou um coeficiente de correlação, r, igual a 0,9892 a partir da
análise de amostras aleatórias oriundas de pacientes de ambulatório. A
equação de regressão obtida foi: y = 1,038x – 2,177. Os testes
demonstraram também inexistência de reações cruzadas com o LH, FSH
e TSH presentes no soro.
Sensibilidade analítica: O limite de detecção do método é de 3 mUI/mL.
INTERFERENTES
Devem ser evitadas amostras com hemólise e/ou turvação intensas.
Valores de bilirrubina até 20 mg/dL não interferem.
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
1. Swaminathan,N & Bahl,O.P. Biochem. Biophys. Res. Commun.40 :
422,1970
2. Morgan,F.J. et.al. J. Biol. Chem. 250 : 5247, 1975
3.Tietz,N.W. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd. Edition, 1995
4.Highon, J & Hussian, P. J. Immunol. Meth. 68 : 165, 1984
5.Katal : Dados de arquivo
APRESENTAÇÃO
Cód.
Nº de testes
40 IM
96
CONDIÇÕES DE GARANTIA DA QUALIDADE DO PRODUTO
O desempenho deste sistema diagnóstico, medido pelas propriedades
descritas nesta Instrução de Uso, está garantido até a sua data de
vencimento, desde que obedecidas as seguintes condições :
1.
A adesão estrita, pelo usuário, ao quadro de procedimento técnico.
2.
As condições de armazenamento estarem de acordo com o
recomendado nesta Instrução de Uso.
3.
Os materiais necessários e não fornecidos com o produto, estarem
em boas condições de uso.
ASSESSORIA TÉCNICA
Para esclarecimentos de dúvidas e Assessoria Técnica ligue:
(0xx11) 3429-2555 - e-mail: [email protected]
Produção: Katal Biotecnológica Ind. Com. Ltda.
Rua: Leiria, 1.160 - CEP 31255-100
Belo Horizonte - MG – Brasil – CNPJ: 71.437.917/0001-04
Responsável Técnico: Leonides Rezende Jr. - CRMMG 7382
Distribuição: Interteck Internacional Imp. Exp. Ltda.
R. Sabarabuçu, 149 – CEP: 04755-080
São Paulo – SP –CNPJ: 02.668.836/0001-94
Registro M.S.: 10377390093
Edição desta Instrução de Uso: Maio/07
β-hCG Quantitativo