Instrução de Uso – Esperma Contagem Celular
A Contagem Espermática é realizada no esperma humano líquido estabilizado com conservante. O resultado deve ser
reportado em milhões/mL.
Seguem instruções relacionadas às câmaras de Makler e Neubauer.
Contagem (Câmara de Makler)
A câmara de Makler possui uma profundidade de 0.01 mm e
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uma marcação graduada de 100 quadrados (área total de 1 mm
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e volume de 0,01 mm = 0,01 µL) . Assim, o volume
compreendido na área de 10 quadrados após a colocação da
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lamínula é de 0.001 mm ou 0,001 µL .
1.
Devem ser contados apenas os espermatozóides intactos, ou seja, aqueles que possuem cabeça e cauda.
2.
A contagem será realizada nos 10 quadrados, o que corresponde a um volume de 0,001 µL. Portanto, o
número de espermatozóides contados por campo do microscópio deverá ser multiplicado por um milhão
(1.000.000) para que o resultado corresponda a milhões/mL:
Concentração de espermatozóides (milhões/mL) = número de espermatozóides contados no campo do microscópio
x 1.000.000
Observação:
Os termos “concentração de espermatozóides” e “número total de espermatozóides” não são sinônimos. O número
total de espermatozóides é o número total de espermatozóides ejaculados enquanto a concentração de
espermatozóides é o número de espermatozóides por uma unidade de volume de sêmen.
Contagem (Câmara de Neubauer)
2
A área da câmara dentro do círculo é de 1,0 mm e contém 25 quadrados
grandes com 16 quadrados menores em cada um. A câmara de Neubauer
possui a espessura de 0,1 mm e volume (dos 25 quadrados grandes) de 0,1
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mm = 0,1 µL. A contagem de um quadrado grande multiplicado por 25
corresponde a 0,1µL, que ao ser multiplicado por 10.000 resulta em milhões/mL.
1.
Devem ser contados apenas os espermatozóides intactos, ou seja, aqueles que possuem cabeça e cauda.
2.
Critério de Seleção dos Espermatozóides a serem Contados: Segundo a Organização Mundial de Saúde, para
determinar se um espermatozóide deve ou não ser contado deve ser verificada a posição de sua cabeça,uma
vez que a orientação de sua cauda não possui relevância. Um quadrado grande é limitado pela linha central
das três que o demarca, conforme destacado em negrito na figura 1.
Um espermatozóide deverá ser contado quando:
-
Encontrar-se no interior do quadrado grande,
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3.
-
Se a maioria de sua cabeça encontrar-se entre as duas linhas internas que o delimitam, conforme
exemplificado através dos círculos brancos da figura 1.
-
Caso a maioria de sua cabeça esteja em uma linha central, este só deve ser contado se estiver sobre
o “L” formado entre o lado esquerdo e o lado inferior do quadrado grande, conforme exemplificado
através dos círculos brancos da figura 2.
Um espermatozóide não deverá ser contado quando encontrar-se entre as duas linhas exteriores que
delimitam o quadrado. Caso esteja sobre a linha central, para que este seja desconsiderado na contagem deve
estar fora da região “L” descrita anteriormente, conforme exemplificado pelos círculos pretos das figuras 1 e 3.
Figura 1
Figura 2
Figura 3
Concentração de espermatozóides (milhões/mL) = número de espermatozóides contados no campo do microscópio x
250.000 x fator diluição
Obs. O fator de diluição deve ser considerado na fórmula acima apenas quando diluições forem realizadas no momento
da análise do material.
Referências Bibliográficas
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Laboratory Manual for the Examination and processing of Human Semen World Ministry of Healthy, WHO. 5ª Edição, 2010.
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PEREIRA, O. S. & JANINI J.B.M. Atlas de Morfologia Espermática , Editora Atheneu, 2001.
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PIVA, S. Espermograma. Laboratório São Camilo, 2001.
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GALBA E.S.MORAES. Espermocitologia – Espermograma em Critério Estrito, 2ª edição, Editora Educs , 2007.
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ALBUQUERQUE, C., MENDES, M.E. Gestão da Fase Analítica do Laboratório: como assegurar a qualidade na prática. ControlLab, Vol 1., 2010.
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ALBUQUERQUE, C., MENDES, M.E. Gestão da Fase Analítica do Laboratório: como assegurar a qualidade na prática. ControlLab, Vol 2., 2011.
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ALBUQUERQUE, C., MENDES, M.E. Gestão da Fase Analítica do Laboratório: como assegurar a qualidade na prática. ControlLab, Vol 3., 2012.
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http://www.controllab.com.br/din2/pdf/WHO_laboratory_manual_for_the_Examination_and_processing_of_human_semen_FIFTH_EDITION.pdf
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http://www.control-lab.com.br/din2/pdf/WHO_reference_values_for_human_semen_characteristics.pdf
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