MCM é depositado de maneira bem regulada!
► Replicação
►4
= 1 vez só por ciclo (amplificação)
coisas:
 Replicação (como o ciclo celular) é regulada pelas
cinases/ciclinas e ligases de ubiquitina
 MCM helicase é depositada de forma bem controlada
► MCM
► Cdt1/RLF-B
= mini-chromosome maintenance (helicase)
= “carregador” da MCM
 ORCs escolhem a origem e acendem como fósforo
 Saída de Go envolve estabilização de cdc6 que tem a
ver com o carregamento da helicase.
Coisa 1
Licensing = licenciar uma origem pra replicar
Por que raios é só em G1???
Licenciar = por a placa
MCM 0000
14 ORCs se ligam à cromatina após a fase S e antes de G1.
► Cdc6 liga nas 14 ORCs no próximo G1pm cdc6
► O “carregador” da MCM (cdt1) liga em cima disso cdt1
► MCM chega, completando a tchurma = preRC (pré roberto
carlos)
► Na hora do vamo vê mais 22 proteínas ativam o preRC e a
helicase abre as fitas e duas origens se formam!!
►
Como quem “acendeu” é inibido a formar preRC?
cdk2/A + geminina + cdc7/dbf4
E depois de S...
-fosfatase cdc25 deixa formar cdk1/B
-cdk1/B executa mitose e tem que sumir (culpa de APC)
-APC degrada a geminina liberando cdt1 em G1
-cdc6 na saída do ciclo é desfosforilado e procura ORCs...
!
Licensing = ocorreria durante G1pm (ponto R)
- ciclinas D, E e A decaem
- inibidor genérico p27 inibe ciclina/cdk
Coisa 2
MCM é depositada de maneira bem controlada
►
Em metazoa cdt1 está ligado ao licensing
 superexpresse cdt1 que o DNA re-replica
►
Cdt1 é controlado por ubiquitinilações ( M,G1 S, G2)
 Cdt1-P (cdk2/A) é alvo de SCF tchau
 Cdt1 convidado por PCNA é alvo de CDL  tchau
 Geminina (S/M) inibe cdt1 (metazoa): perda = re-rep
No novo G1,
geminina some
e tem algum
cdt1 para ajudar
nos novos
preRC
Coisa 3
ORCs escolhem a origem
►
Em levedura ORCs ligam na sequência da origem (ARS)
 Ficam lá o tempo todo! Desligadas por fosforilações (cdk1/B)
►
Em metazoa = sequência + fatores epigenéticos
 Modificações em subunidades  Perda de atividade de ORC durante a mitose
ORC 2-5 = grude
ORC 1 e 6 associadas
ORC 1 é sequestrada
por cdk1/A
Daí SCF ubiquitinila!
citoplasma
degradação
Em M, ORC 1 está
hiperfosforilada
Saída de M:
A some  ORC 1 livre!
Coisa 4
Papel de cdc6
Em levedura cdc6 acumula em G1S e em S é degradada
► Em mamíferos ela é importante na saída de Go
►
 fosforilada por cdks, não liga APC e não é degradada.
►
Ela fosforilada, segura a mitose, até que S se complete
 Atuando sobre chk1 que inibe cdc25 logo cdk1/B não se forma